实验五土壤中细菌纯种分离和培养ppt课件

1、实实 验验 五五土壤中细菌分别、纯化和培育土壤中细菌分别、纯化和培育 1、初步掌握从土壤中分别和纯化细菌的、初步掌握从土壤中分别和纯化细菌的 根本方法。根本方法。2、练习微生物接种和培育的根本技术，、练习微生物接种和培育的根本技术， 掌握无菌操作技术。掌握无菌操作技术。 土壤是微生物生活的大本土壤是微生物生活的大本营营，是，是寻觅寻觅和和发现发现有重要有重要运运用潜力的微生物的主要菌源。不同土用潜力的微生物的主要菌源。不同土样样中各中各类类微生物微生物数数量不同，普通土壤中量不同，普通土壤中细细菌菌数数量最多。用挑量最多。用挑单孢单孢法、法、稀稀释释涂布平板法或平板涂布平板法或平板划线划线法法

2、获获得一得一种种或一株微生物。或一株微生物。样样 品：新颖土壤品：新颖土壤培育基：灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培育基培育基：灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培育基无菌水：带有玻璃珠装有无菌水：带有玻璃珠装有90mL无菌水三角无菌水三角 瓶、装有瓶、装有9mL无菌水的试管。无菌水的试管。其其 它：无菌培育皿它：无菌培育皿(直径直径75毫米毫米) 、无菌玻、无菌玻 璃移液管、酒精灯、培育箱等璃移液管、酒精灯、培育箱等 。细菌纯种分别的方法有两种：细菌纯种分别的方法有两种： 1、稀释平板法、稀释平板法 2、平板划线法、平板划线法一细菌纯种分别的操作方法一细菌纯种分别的操作方法 1 1取样取样 选择较肥沃的土壤，铲去

3、表土层，挖选择较肥沃的土壤，铲去表土层，挖5-20cm5-20cm深度的或特殊要求的地方土壤，装入灭过菌深度的或特殊要求的地方土壤，装入灭过菌的袋内，封好袋口，做好编号记录，携回实的袋内，封好袋口，做好编号记录，携回实验室供分别用。验室供分别用。1 1、稀释平板分别法、稀释平板分别法 将将1瓶瓶90mL和和7管管9mL的无菌水陈列好，按的无菌水陈列好，按10-2、10-3、10-4、10-5及及10-6依次编号。依次编号。 称取土样称取土样10g放入盛放入盛90mL无菌水并带有玻无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，用手摇璃珠的三角瓶中，用手摇10min，使土样均，使土样均匀分散，制成匀分散，制成10

4、-1土壤悬液。土壤悬液。 在无菌操作条件下，用在无菌操作条件下，用lmL无菌移液管汲取无菌移液管汲取lmL 10-1浓度的菌液于另一管浓度的菌液于另一管9mL无菌水中，将移液无菌水中，将移液 管吹洗三次，摇匀即为管吹洗三次，摇匀即为10-2浓度菌液。浓度菌液。 同样方法，依次稀释到同样方法，依次稀释到10-6。 留意：在土壤稀释过程中，汲取不同梯度的菌液需换留意：在土壤稀释过程中，汲取不同梯度的菌液需换用不同的吸管。用不同的吸管。汲取菌液：汲取菌液： 用无菌移液管汲取用无菌移液管汲取菌液于无菌培育皿内。菌液于无菌培育皿内。留意：每次汲取前，用移液管在菌液中吹泡使菌液充分混匀。留意：每次汲取前，

5、用移液管在菌液中吹泡使菌液充分混匀。3平板的制造平板的制造留意：在无菌培育皿底部注明稀释度。留意：在无菌培育皿底部注明稀释度。倒平板：倒平板：将融化并冷至约将融化并冷至约50 的牛肉膏蛋白的牛肉膏蛋白胨琼脂胨琼脂 培育基倒入培育基倒入培育皿内。培育皿内。将培育皿平放在桌将培育皿平放在桌上，顺时针和反时针上，顺时针和反时针来回转动培育皿，使来回转动培育皿，使培育基和菌液充分混培育基和菌液充分混匀，冷凝后即成平板匀，冷凝后即成平板每组制培育皿每组制培育皿3套。套。 取取“对照的无菌培育皿，倒对照的无菌培育皿，倒平板待凝固后，翻开皿盖平板待凝固后，翻开皿盖10min后盖上皿盖。后盖上皿盖。1 1平板

6、的制造平板的制造 将融化并冷至约将融化并冷至约5050的肉膏蛋白的肉膏蛋白胨琼脂培育基倒入无菌培育皿内，胨琼脂培育基倒入无菌培育皿内，使凝固成平板。使凝固成平板。2、平板划线分别法、平板划线分别法 用接种环挑取一环土壤悬液，左手拿用接种环挑取一环土壤悬液，左手拿培育皿，中指、无名指和小指托住皿培育皿，中指、无名指和小指托住皿底，拇指和食指夹住皿盖，将培育皿底，拇指和食指夹住皿盖，将培育皿稍倾斜，左手拇指和食指将皿盖掀半稍倾斜，左手拇指和食指将皿盖掀半开，右手将接种环伸入培育皿内，在开，右手将接种环伸入培育皿内，在平板上悄然划线每组做三皿。平板上悄然划线每组做三皿。留意：切勿划破培育基留意：切勿

7、划破培育基1.斜线法斜线法 2.曲线法曲线法 3.方格法方格法 4.放射法放射法 5.四格法四格法 将前面制造的平板倒置于培育箱，将前面制造的平板倒置于培育箱，30培育培育2448h，然后察看结果。，然后察看结果。 在平板上选择分别较好的有代表性的单菌在平板上选择分别较好的有代表性的单菌落接种斜面，假设不纯，需进一步挑取此落接种斜面，假设不纯，需进一步挑取此菌落采取稀释平板法或划线分别法分别，菌落采取稀释平板法或划线分别法分别，直至获得纯培育。直至获得纯培育。分别平板分别平板u制备土壤稀释液时，要留意使土样均匀制备土壤稀释液时，要留意使土样均匀分散在稀释液中。分散在稀释液中。 u留意无菌操作。留意无菌操作。u平板划线要留意染菌，同时留意划线深平板划线要留意染菌，同时留意划线深度和密度。度和密度。五、本卷须知五、本卷须知1分别土壤中的细菌时为什么要稀释？分别土壤中