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文档简介

1、学习资料HPLC测定发酵液中氨基酸的含量、主要试剂及配置方法衍生试剂溶液：0.5% 2,4-二硝基氟苯（DNFB）乙醇溶液衍生缓冲溶液的配制：称取衍生缓冲溶液固体组分（NaHCO3）4.2g加入至100mL 容量瓶中，定容并摇匀后备用。定容缓冲溶液的配制：称取定容缓冲溶液固体组分（磷酸二氢钾）3.4g,加入至500mL 容量瓶中，加入 0.1mol/LNaOH145.5mL 定容。流动相A的配制：乙腈一水（1: 1）:相同体积的乙腈与水混合，超声波脱气 10-15mi n。流动相B的配制：流动相B固体成分（NaAc） 8.2g加水至2000mL,超声波脱 气 10-15mi n。氨基酸标样：每

2、种色谱纯氨基酸标品秤取 0.5g,用水溶解后，定容至100mL, 配成5g/L的氨基酸标准溶液。发酵液预处理：用可调微量移液器吸取1.0mL发酵液于1.5mL小离心管中，高速离心（10000r/min，2min）沉淀菌体等固形物。二、衍生方法准确量取发酵液原液2微升，加入装有0.2mL衍生缓冲溶液的5mL塑料离 心管中，然后加入0.1mL衍生试剂溶液，摇匀，注意不要漏液，将塑料离心管 置于60°C水浴中暗处恒温加热60min后取出，注意不要让水进入离心管，放置 待溶液冷至室温后，加入定容缓冲液 0.7mL并摇匀，放置15min后可以开始进 行色谱分离。三、色谱分离条件色谱柱为依利特公

3、司氨基酸分析专用 ODS柱或C18柱；检测系统为：紫外 检测器，柱温：33C ;米用二兀梯度分析，梯度程序如表所示；波长 360nm检 测；流动相总流量为1mL/min。流动相梯度时间表序号流量/mL/min时间/mi n流动相A/%流动相B/%线性设定备注1101684Li ne初始状态210.31684Li ne3143070Li ne4173466Li ne51124357Li ne学习资料61225545Li ne71255545Li ne8134982Li ne91381684Li ne系统开始重新平101401684衡，恢复到初始 状态四、计算方法定性和定量方法(1) 根据保留时间和紫外吸收谱进行定性分析。(2) 外标峰面积法进行定量测定。计算a.标准曲线的绘制以不同浓度的氨基酸标准液测得的峰面积为纵坐标，氨基酸含量为横坐标 绘制标准曲线，得到回归方程：Y=kX式中Y :峰面积X:氨基酸标准品浓度b.发酵液中氨基酸含量计算方

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