实验五、叶绿体的分离与观察ppt课件

1、实验六实验六 叶绿体的分别与察看叶绿体的分别与察看 叶绿体是植物细胞所特有的能量转换细胞器，光协作用就是在叶绿体中进展的。 实实 验验 目目 的的 1. 经过植物细胞叶绿体的分别经过植物细胞叶绿体的分别, 了解细胞了解细胞器分别的普通原理和方法。器分别的普通原理和方法。 2. 察看叶绿体的自发荧光和次生荧光察看叶绿体的自发荧光和次生荧光, 并并了解荧光显微镜的运用方法。了解荧光显微镜的运用方法。 实验原理实验原理 组织匀浆后悬浮在等渗介质中进展差速离心，组织匀浆后悬浮在等渗介质中进展差速离心，是分别细胞器的常用方法。是分别细胞器的常用方法。 一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大一个颗粒在

2、离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、外形和密度，也同离心力以及悬浮介质的粘小、外形和密度，也同离心力以及悬浮介质的粘度有关。在一给定的离心场中，同一时间内，密度有关。在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。依次添加度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。依次添加离心力和离心时间，就可以使非均一悬浮液中的离心力和离心时间，就可以使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批搜集即可获得各种亚细胞组分。分批搜集即可获得各种亚细胞组分。 Low speedHigh speedDifferential centrif

3、ugation 试剂与器械试剂与器械 1. 器材器材 : 普通离心机、组织捣碎机、粗普通离心机、组织捣碎机、粗天平、荧光显微镜。烧杯天平、荧光显微镜。烧杯2个个, 250ml量筒量筒1个个, 滴管滴管20支支, 10ml刻度离心管刻度离心管20支支, 试试管架管架5个，纱布假设干，载片和盖片各个，纱布假设干，载片和盖片各4片。片。 2. 试剂试剂: 0.35mol/L氯化钠溶液，氯化钠溶液，0.01%吖吖啶橙啶橙(acridine orange)。三三. .实验步骤实验步骤一叶绿体的分别与察看一叶绿体的分别与察看 1.1.选取新颖的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗脉，称选取新颖的嫩菠菜叶，洗净擦干

4、后去除叶梗脉，称30g30g于于150ml 150ml 0.35mol/L NaCl 0.35mol/L NaCl溶液中，装入组织捣碎机。溶液中，装入组织捣碎机。 2. 2. 利用组织捣碎机低速利用组织捣碎机低速(5000r/min)(5000r/min)匀桨匀桨3-5min3-5min。 3. 3. 将匀浆用将匀浆用6 6层纱布过滤于层纱布过滤于500ml500ml烧杯中。烧杯中。 4. 4. 取滤液取滤液4ml4ml在在1000r/min1000r/min下离心下离心2min2min，弃去沉淀。，弃去沉淀。 5. 5. 将上清液在将上清液在3000r/min3000r/min下离心下离心5

5、min5min。弃去上清液，沉淀即是叶绿体。弃去上清液，沉淀即是叶绿体 ( (混有部分细胞核混有部分细胞核) )。 6. 6. 将沉淀用将沉淀用0.35mol/LNaCl0.35mol/LNaCl溶液悬浮。溶液悬浮。 7. 7. 取叶绿体悬液一滴滴于载玻片上，加盖玻片后即可在显微镜下察看。取叶绿体悬液一滴滴于载玻片上，加盖玻片后即可在显微镜下察看。 二菠菜叶手切片察看二菠菜叶手切片察看 新颖菠菜叶新颖菠菜叶 刀片切出一斜面置于载玻片上刀片切出一斜面置于载玻片上 滴加滴加12d12d氯化钠溶液氯化钠溶液 盖上盖片显微镜下察看盖上盖片显微镜下察看 实实 验验 结结 果果 一叶绿体的分别和察看一叶绿

6、体的分别和察看 1. 普通光镜下，可看到叶绿体为绿色橄榄形，在普通光镜下，可看到叶绿体为绿色橄榄形，在高倍镜下可看到叶绿体内部含有较深的绿色小颗高倍镜下可看到叶绿体内部含有较深的绿色小颗粒，即基粒。粒，即基粒。 2. 以以Olympus荧光显微镜为例，在先用荧光显微镜为例，在先用B(bule)激激发滤片、发滤片、B双色镜和双色镜和O530(orange)阴断滤片的条阴断滤片的条件下，叶绿体发出火红色荧光。件下，叶绿体发出火红色荧光。 3. 参与吖啶橙染色后，叶绿体可发出桔红色荧光，参与吖啶橙染色后，叶绿体可发出桔红色荧光，而其中混有的细胞核那么发绿色荧光。而其中混有的细胞核那么发绿色荧光。 二

7、菠菜叶手切片察看二菠菜叶手切片察看 1. 在普通光镜下可以看到三种细胞在普通光镜下可以看到三种细胞 (1)表皮表皮细胞细胞: 为边缘呈锯齿形的鳞片状细胞为边缘呈锯齿形的鳞片状细胞; (2)捍卫捍卫细胞细胞: 为构成气孔的成对存在的肾形细胞；为构成气孔的成对存在的肾形细胞；(3)叶肉细胞叶肉细胞: 为陈列成栅状的长形和椭圆形为陈列成栅状的长形和椭圆形细胞。叶绿体呈绿色橄榄形，在高倍镜下还细胞。叶绿体呈绿色橄榄形，在高倍镜下还可以看到绿色的基粒。可以看到绿色的基粒。 2. 在荧光显微镜下，叶绿体发出火红色荧光，但其荧光强度要比游离叶绿体弱, 气孔发绿色荧光，两捍卫细胞内的火红色叶绿体那么环绕气孔陈

8、列成一圈。表皮细胞内的叶绿体数量要比叶肉细胞少。 3. 用吖啶橙染色后，叶绿体那么发出桔红色荧光，细胞核可发出绿色荧光, 气孔仍为绿色。 3. 用吖啶橙染色后，叶绿体那么发出桔红色荧光，细胞核可发出绿色荧光, 气孔仍为绿色。 NoImageNoImage 作作 业业 1. 根据荧光察看结果，绘制菠菜叶气孔根据荧光察看结果，绘制菠菜叶气孔的构造方式图。的构造方式图。 思索题：思索题： 1. 叶绿体分别的实验原理是什么？在分叶绿体分别的实验原理是什么？在分别叶绿体时应留意些什么问题？别叶绿体时应留意些什么问题？ 五五. . 实验结果实验结果1. 1. 普通光镜下，可看到叶绿体为绿色橄榄形，在高倍镜下可看到叶绿体普通光镜下，可看到叶绿体为绿色橄榄形，在高倍镜下可看到叶绿体内部含有较深的绿色小颗粒，即基粒。内部含有较深的绿色小颗粒，即基粒。2. 2. 用目微尺和台微尺丈量一下叶绿体的长轴和短轴，分别丈量用目微尺和台微尺