茶叶内生菌的分离、鉴定及其生防功能初探

1、茶叶内生菌的分离鉴定及其生防功能初探陈璐，蓝江林，苏明星，刘波笃朱育菁*(福建省农科院农业牛物资源研究所，福建福州350003)摘要：对采白有机茶住产基地和加工厂的“大口毫”和“福云六号”茶叶样品进行内牛菌的分离和 脂肪酸鉴定。从7份样站中共分离到16株细菌，1株真菌。老叶中均未检测到内纶菌，芽叶 中内生细菌数量为26.0139.5xl06cfu/go冇机种植的“福云六号"芽叶的含菌量是“大白毫'啲 1.94倍；常规种植的“大口毫"的芽叶的含菌量为97.5139.5xl06cfu/g,明显高于有机种植的 26.52&3x106cfu/go 4<大白毫&

2、quot;带有红杆菌属(rhodobacter) > 微杆菌属(microbacterium )> 根瘤菌属crhizobium')和贪噬菌属(variovorax)的内生细菌，"福云六号”仅含有根瘤菌属和 贪噬菌属。对各内生菌的抑菌谱测定结果表明，有11株茶叶内牛菌对供试10种病原菌表现 出拮抗活性，其中放射根瘤菌eb659菌株有着最广的抑菌谱，貝有开发作为生防菌防治植物 病害的潜质。关键词：茶叶；内生菌；分离；脂肪酸鉴定；生物防治isolation, identification and the biocontrol potentialof endophyte

3、 in theasienensis (camellia sinensis)chen lu, lan jiang-lin, su ming-xing, zhu yu-jing*(institute of biotechnology, fujian academy of agricultural sciences, fuzhou 350003, china)abstract： the isolation, fatty-acid identification and inhibition ability against pathogeny of the endophyte in theasienen

4、sis (camellia sinensis) were conducted the theasienensis samples were collected from organic tea planting base and processing factory, and the varieties of the theasienensis were "dabaohao" and "fuyunliuhao". 16 strains of endophytic bacteria and 1 endophytic fungus were isolated

5、 from 7 theasienensis samples not any endophyte was detected in the old leaves, whereas the endophytic bacteria in the bud were 26.01395xl06cfu/g. the endophyte in bud of “fuyunliuhao" was 1.94 times higher than “dabaohao", while both were treated with organ planting. however, the endophyt

6、es in “dabaohact buds treated with normal planting were 97.5-139.5x 106cfu/g, obviously higher than 26.528.3x 106cfu/g of the buds treated with organic planting"dabaohao contained rhodobacter, microhacterium, rhizobium and variovorax. wheras the “fuyunliuhao" only had rhizobium, and variov

7、orax. 11 strains of the endophytic bacteria in theasienensis showed inhibition abilities to 10 pathogenies eb 659 (/?. radiobacter) had the biggest inhibition spectrum, and it has the potential to be developed as a biocontrol bacterium against plant diseasekeywords： theasienensis, endophyte, isolati

8、on, fatty-acid detection, biocontrol基金项目：国家高技术研究发展计划（863计划）（2006aa10a211）作者简介：陈璐（1982）,女，福建泉州人，研究实习员，硕士生，主要从事生物技术和植物病害生物防治研究 "通讯作者：刘波，男，研究员，博士朱育菁,女，副研究员，博士随着全球对资源和环境问题的广泛关注，实现可持续发展战略得到世界各国的认同和响 应。使用化学杀菌剂是控制农作物病害的有效方法，但化学杀菌剂污染环境，诱导病菌抗性 增强，破坏生态平衡，因此植物病害的生物防治研究越来越受到重视山。自1898年vogl从黑麦 草种子内分离出第一株内生真菌

9、以來，植物内牛菌作为一种新的微生物资源受到了广泛的关 注。人们发现植物体内存在大量有益的内生细菌和内生真菌，这些内牛菌在植物体内能产生 多种生物学作用，可以提供植物所盂要的营养物质如氮源(内生共生固氮)及一些激索，参与植 物的防卫功能，能够促进植物快速住长，增强植物抗逆境、抗病害、抗动物危害的能力。山于内生菌具有在植物体内独立自主的分裂繁殖和传递的特性，使之有可能成为牛物防 治中冇潜力的微生物农药和增产菌，因此分离并利用作物的内生菌控制作物的病虫害、开发 有益内牛菌以提高作物产量和品质对于可持续性农业具有重要意义。福建省是茶叶种植和生 产大省，全省共有茶园而积14.5万hi，居全国第三位，因此

10、开发茶叶内牛菌作为牛防制剂有 着良好的发展前景。本研究拟从茶叶上分离筛选具冇广谱抑菌活性的内生细菌，应用于植物 病害的生物防治。1材料和方法1.1材料1.1.1供试植物 茶叶样本于2006年3月釆白福鼎品品香茶业有限公司和福安市天香茶叶有限 公司的有机茶生产基地和加工厂，茶叶站种为大口毫和福云六号，种植方式为有机种植和普 通种植，加工工艺为杀青和未杀青，叶为老叶和芽叶。样木采回实验室后在24h内用于微生物 的分离。1.1.2供试病原菌猪大肠杆菌k88 ( escherichia coli),购自中国兽药监察所；棉花黄萎病大 丽轮枝菌(verticillium dahliae ),购自德国菌种中

11、心(dmsz)提供;西瓜细菌性果斑病菌 (acidovorax avenae subsp. citrulli,由福建农林大学提供；黄躺霉(aspergillus flams),由 福建师范大学捉供；番茄枯萎病尖孑包镰刀菌讪？? oxysponun f. sp. lycopersici)由浙江 大学提供;番茄青枯雷尔氏菌(ra 1st on ia so i an ace a rum )，甘蓝轮枝菌(verticillium long is porum), 西瓜枯萎病尖砲镰刀菌(fusarium oxysporum f. sp. niveum ),泽泻白斑病菌(ramularia al ism a

12、t is ),苦瓜炭疽病菌(colletotrichum orhiculare ),均由本实验室分离。1.1.3内生菌分离、增殖、拮抗测定培养基 细菌分离与增殖培养均采用na培养基，真菌培养 与拮抗测定均采用pda培养基，放线菌分离采用高氏一号培养基。1.1.4脂肪酸提取培养基与试剂tsba培养基：30 g胰蛋l1j东大豆肉汤(tryptic soy broth, tsb) +15 g琼脂+1 l水(tsb购于fisher公司)。皂化试剂：氢氧化钠45 g+甲醇150 ml+ 水150ml；甲基化试剂：6n盐酸325 ml+甲醇275 ml；萃取试剂：正己烷200 ml+甲基叔丁 基乙

13、4; 200 ml；洗涤试剂：氢氧化钠10.8 g+水900 ml (配制方法ill midi公司提供)。1.2方法1.2.1茶叶内生菌的分离 称取适量的不同茶叶样品，将样品冲洗t净，吸水纸吸去水分，分别用 75%乙醇浸5mim再转入1.0%次氯酸钠溶液中浸5min,无菌水反复漂洗，无菌滤纸吸干。将各部 分表ml与固体平板接触35min,然后将培养皿放在30°c的恒温箱中培养。若皿中无菌落出现， 证明灭菌彻底，否则，该分离结果不能使用。然后用无菌剪刀剪碎样品在无菌研钵屮，充分研磨匀 浆，稀释在无菌水中。按10= 10= 10梯度稀释样站，各1r100pl稀释液涂布于不同培养基进 行内

14、生细菌、真菌和放线菌的分离，匝复3次。根据菌落形态、颜色等随机挑取单菌落，按 常规方法纯化后保存，供测试鉴定。1.2.2茶叶内生细菌的脂肪酸鉴定1.2.2.1脂肪酸的提取细菌培养条件：tsba平板培养基，四线划线法，培养温度28±1 °c, 培养时间24±2 ho获菌：用接种环挑取35环(约40 mg湿重)的菌落置入一个干净、干 燥的冇螺旋盖的试管中(最佳的获菌区域为第3区)。皂化：加入1.0±0.1 ml皂化试剂，拧 紧盖子，振荡5-10 see,放入95-100 °c的沸水中5 min,室温冷却，振荡5-10 see,再水浴25 min,室

15、温冷却。甲基化:开盖加入2.0±0.1 ml甲基化试剂,拧紧盖子,振荡5-10 see, 80±l°c 水浴10 min,移开且快速用流动自来水冷却至室温。萃取：加入1.25±0.1 ml的萃取试剂， 拧紧盖子，温和混合旋转10 min,打开管盖，利用干净的移液管取出每个样本的下层水相部 份。基本洗涤：加入3.0±0.2 ml洗涤试剂，拧紧盖了，温和混合旋转5 min,打开管盖，利 用干净的移液管移出约2/3体积的上层冇机相到干净的气相色谱检体小瓶，用于气相检测。1.2.2.2脂肪酸的气相色谱检测 气相色谱系统采用的是美国agilent 689

16、0n型，包括全自动进 样装置、石英毛细管柱及氮火焰离子化检测器；分析软件应用美国midi公司开发的基于细菌 细胞脂肪酸成分鉴定细菌的软件 sherlock mis4.5 (microbial identification system)和 lgs4.5 (library generation software)0在卜述色谱条件卜平行分析脂肪酸甲酯混合物标样和待检样 本:二阶程序升高柱温,170 °c起始,升至260 °c,而后40cmi升温至310 °c , 维持90 sec；汽化室温度250 °c、检测器温度300 °c；载气为氢气(2mlm

17、i()、尾吹气为 氮气(30 ml-min-1)；柱前压 10.00 psi ( lpsi=6.895 kpa)；进样量 1 卩1,进样分流比 100:1。1.223脂肪酸鉴定系统根据各组分保留时间计算等链长(ecl)值确定hl标组分的存在、采用 峰面积归一化法计算各组分的相对含量，再将二者与系统谱库中的标准菌株数值匹配计算相 似度(similarityindex, si),从而给出一种或儿种可能的菌种鉴定结果。一般以最髙si的菌种名 称作为鉴定结果，但当其报告的儿个菌种的si比较接近时，则根据色谱图特征及菌落生长特 性进行综合判断。以脂肪酸混合标样校止保留时间。1.2.3茶叶内生细菌抑菌谱的

18、测定 将1.2.1中分离得到的15株茶叶内牛细菌进行抑菌谱测定。 供试菌株发酵液的制备：将各供试内生菌株在na平板上活化后，用na培养液于30c、170振荡培养48 h备用。拮抗测定试验采用改良的琼脂扩散法。7株病原真菌在pda平板 上培养25d后，用无菌水冲洗菌苔，配成砲子悬浮液。吸取制备好的孑包子悬浮液1 ml,加 入到熔化并冷却到45°c左右的6 ml pda培养基(琼脂含虽为0.9%)中，混匀，倾覆在已凝 固的pda平板上。待上层培养基冷却凝固后，在平板上打孔(直径为6mm),在每个孔内加 内生菌发酵液40卩l,每处理设3个重复，以无菌水为对照，将平板置于25 °c

19、恒温培养箱内 培养24 d后观察抑菌情况及抑菌圈大小。3株病原细菌在na培养液中发酵培养至对数生 长期，吸取制备好的发酵液1 ml,加入到熔化并冷却到45 °c左右的6ml na培养基(琼脂 含量为0.9%)中，混匀，倾覆在已凝固的na平板上。待上层培养基冷却凝固后,在平板上 打孔(直径为6 mm),在每个孔内加内生菌发酵液40pl,每处理设3个重复，以无菌水为对 照，将平板置于25 °c恒温培养箱内培养12d后观察抑菌情况及抑菌圈大小。2结果与分析2.1茶叶内生菌的分离供试茶叶样本内牛菌分离培养的试验结果见表1、2。从7份样品小共分离到16株细菌， 1株真菌，没有分离到放

20、线菌。不同胡种间、不同种植方式和不同加工方式的茶叶样木的内纶 菌种类和含虽均存在着一定的差异。茶叶品种“福云六号”和“大白毫”的新鲜采摘的老叶中均未检测到内生菌，而芽叶中均存在着大量的内生菌，分离到的内生细菌数量为26.0 139.5xl06cfu/go同样是有机种植，“福云六号”芽叶的含菌量是“大口毫”的1.94倍。常规种植 的“大口毫''的芽叶的含菌量为97.5 - 139.5xl06cfu/g,明显高于有机种植的26.5 28.3%xl06cfu/go杀青工艺对冇机种植“大白毫”芽叶内生菌含量没冇明显影响，但却使常规种 植芽叶的内牛菌含量降低30.10%。表17种茶叶样本

21、内生菌的分离结果table 1 endophytes isolated from 7 different theasienensis samples样品品种名采集地点类型内生细菌内生真菌内生菌总量samplevarietycollectiontypeendophytic bacteriumendophytic fungustotalsite种含菌量种含菌屋种含菌虽类(xl06cfu/g)类(xl06cfu/g)类(xl06cfu/g)i大白亳福鼎常规种植,杀青期长,芽叶497.500.0497.5ii大白亳福师常规种植,杀青期短, 芽叶3139.500.03139.5iii大白奄福鼎有机种植，

22、杀青过， 芽叶326.012.3428.3iv福云六号福安有机种植,新鲜采摘,芽叶351.500.0351.5v福云六号福安有机种植，新鲜采摘，老叶00.000.000.0vi大白臺福鼎有机种植,新鲜采摘,芽叶326.500.0326.5vii大白亳福鼎冇机种植，新鲜采摘， 老叶00.000.000.0样品i号分离到4株不同菌落形态的细菌，样晶ii号与、iii号、iv号和vi号各分离到3株不同菌落形态的细菌。同时，iii号样品还分离到真菌1株。上述菌株分别编号为eb646-eb662o内生 细菌在茶叶中的含量差界显苦，含量最小的eb656仅为2.0x106cfu/g,含量最髙的是eb651,高

23、达 115.0xl06cfu/go表2各个茶叶样本分离到的内生菌的含菌量table 2 population of each endophyte isolated from the theasienensis samples样品编号菌株编号内生菌类型含菌量(xl06cfu/g)iiieb646真菌2.3ieb647细菌22.0ieb648细菌52.5ieb649细菌9.0ieb650细菌14.0iieb65l细菌115.0iieb652细菌14.511eb653细菌10.()iiieb654细菌21.0iiieb655细菌3.0iiieb656细菌2.0iveb657细菌32.0iveb658

24、细菌9.0iveb659细菌10.5vieb660细菌7.5vieb661细菌13.0vieb662细菌6.02.2茶叶内生细菌的脂肪酸鉴定由茶叶样本中分离出来的15株细菌的脂肪酸气相色谱检测与midi数据库比对的结果见 表 3。从表中可见，在 tsba50 数据库中，eb648、eb650、eb651、eb652、eb653、eb654、 eb658、eb660这8株菌株si在0.500以上，表明为典型菌种，其中eb648为类球红杆菌 (rhodobacter sphaeroides ) ； eb650 为放射根瘤菌(rhizobium radiobacter ), eb651 为 micr

25、ohacterium testaceum, eb652、eb658 为争论产碱菌(vh川"osx paradoxus')-, eb653 为 rhizobium rubi, eb654 为树状微杆菌(microbacterium arborescens ), eb660 为蛾微杆菌 (microbacterium imperiale')o表3茶叶内生细菌的脂肪酸气相色谱检测与midi数据库比对的结果table 3 comparison results between the acid gc detections of theasienensis endophytic

26、bacteria andmidi library菌种名称librarysimilarity index*entry nameeb647moore50.199prevotella-loescheiieb648tsba500.729rhodobacter-sphaeroides (rhodopseudomonas sphaeroides)eb649tsba500.328variovorax-paradoxus-gc subgroup a (alcaligcncs paradoxus)eb650tsba500.799rhizobium-radiobactcr (agrobactcrium tumcf

27、acicns)eb651tsba500.774microbacterium-testaceum (aureobacterium, curtobacterium)eb652tsba500.607variovorax-paradoxus-gc subgroup a (alcaligenes paradoxus)eh653tsba500.527rhizobium-rubi(agrobacterium)eb654tsba500.618microbaclerium-arborescens (flavobacterium)eh655clin500.253pseudoinonas-fluorescens-b

28、iotype a & feb656clin500.454rhizobium-radiobactcr (agrobactcrium tumcfacicns)eb657tsba400.486ccllulomonas-llavigcna*eb658tsba500.740variovorax-paradoxus-gc subgroup a (alcaligenes paradoxus)eb659tsba500.421rhizobium-radiobacler (agrobacterium tumefaciens)eb660tsba500.609microbacterium-imperialee

29、b66ltsba500.338variovorax-paradoxus-gc subgroup a (alcaligenes paradoxus)eb662tsba500.374rhizobium-radiobacter (agrobactcrium tumefaciens)*细菌霁定仪对于similarity index 诠释：大于0.500：说明匹配性很面，为典型的菌种,大于0.300小于0.500：说明匹配性絞低,为非典型菌种,小于0.300：说明数据库没有此菌种的数据,给出的是最接近的相关菌种。eb649、eb656、eb657、eb659、eb661、eb662这6株菌株分别在tsb

30、a50、tsba40、clin50 数据库里si介于0.300与0.500z间，匹配性较低，为非典型菌种。结合平板菌落形态，除去eb657 以外的其他5株菌的鉴定结果可确认为止确的。而eb647、eb655这2株菌在所有数据库中找到 的si都很低，数据库没有这些菌种的数据，有可能为新种。eb657、eb647和eb655菌株启待于 进一步的鉴定。将上述已确认的13株菌株根据样本来源进行分类的结果见表4。“大白毫”(样本i、ii、iii、 vi)带有红杆菌属(rhodobacter)、微杆菌属(microbacterium)根瘤菌属(rhizobium)和 贪噬菌属(vh川omsx)这4个属的内

31、住细菌。"福云六号"(样本iv)仅含有根瘤菌属和贪噬 菌属。两种茶叶品种含有的相同的内生细菌为放射根瘤菌(/?. radiobacter)和争论贪噬菌(v. paradoxus)。表4茶叶样本中所含的内生细菌菌株种类table 4 varieties of endophytic bateria in different theasienensis samples样本号rhodobacter-sphaeroidesmicrobacteriumrhizobiumvariovorax-paradoxus gc subgroup atestaceumarborescensimper

32、ialeradiobacterrubiieb648eb650eb649iieb651eb653eb652iiieb654eb656iveb659eb658vieb660eb662eb6612.3茶叶内生细菌抑菌谱的测定试验结果见表5。有eb648在保存中缺失，因此仅有15株茶叶内牛菌用于抑菌谱的测定。 供试的15株菌中,有11株对供试病原菌表现出拮抗活性。内生菌eb656、eb657、eb658> eb659 都对番茄青枯雷尔氏菌表现出很强的拮抗作用，抑菌圈人小为33.0043.00 mm,其屮抑菌效 果最好的是菌株eb 656。eb656、eb657、eb659菌株对四瓜细菌性果斑病菌

33、具有拮抗作用，抑 菌圈大小分别为22.50、2&00和53.00 mm。8株内生菌eb652、eb653、eb654、eb655、eb659、 eb660、eb661、eb662对棉花黄萎病人丽伦枝菌具拮抗作用，其屮抑菌效果最好的是660号菌 株，抑菌圈可达35.00 mm。此外，eb660、eb661、eb662菌株对西瓜枯萎病尖抱镰刀菌具有 拮抗作用；菌株eb658对番茄枯萎病尖孑包镰刀菌具有拮抗作用。这15株内牛菌都没有表现岀对 猪人肠杆菌k88.黄曲霉、甘蓝伦枝菌、泽泻白斑病菌和苦瓜炭疽菌这5株病原菌的抑制活性。表515株茶叶内生菌抑菌谱测定结果table 5 inhibiti

34、on spectra of the 15 endophytic bacteria against 10 pathogenies内生i莉抑菌圈直径(mm)番茄青猪大肠西瓜细枯雷尔杆菌菌性果氏菌k88斑病菌黄曲霉枯尖刀 瓜病镰 西萎抱谊轮蓝菌片枝棉花黄番茄枯萎病大萎病尖丽轮枝他镰)苦瓜炭泽泻白 斑病菌eb647-eb649eb650eb651eb65218.50eb65315.50eb654 13.50eb65513.00eb65643.0022.50eb65737.0028.00-eb65833.00-12.75eb65938.0053.0025.00eb660-13.7535.00eb6611

35、2.75-20.00eb662-13.75-21.50*“"代表没有拮抗活性。在15株供试的内生细菌屮，eb659号菌株有着最广的抑菌谱，能够抑制3种病原菌，番茄 青枯雷尔氏菌、西瓜细菌性果班病菌和棉花黄萎病大丽轮枝菌株；eb656、eb657、eb658、 eb660、eb661、eb662这6株菌株各能抑制2种病原菌;eb652、eb653、eb654、eb655号这4 株菌株各能抑制1株病原菌；fiieb647、eb649、eb650、eb651没有对供试的10株病原菌表现 出扌吉抗活性。3结论植物内生菌生活在活体植物纟r织屮，其生长代谢受多方面因素制约，包括彳首主植物和外 界

36、环境因子等等。谢丽华等(2006)研究了茶树甜种、叶片龄期及叶片化学成份对茶树内纶 真菌分布影响的研究，发现在供试的毛蟹、铁观音、黄旦和福云六号这4个茶树品种内，黄旦 的内生真菌分离频率达100%,而福云六号只有7.5%,表明茶树品种不同或遗传背景不同，其 叶片中内生真菌的发生存在明显差异；同时随着茶树叶片的成熟，叶片中内生真菌的种类与 数量逐渐增多，与叶片龄期呈正相关，叶片龄期影响茶树内生真菌的种群结构。并且还发现, 在成熟的茶树叶片组织中，内生细菌的分离频率很低回。本研究在大口毫屮样本小分离到一株 内生真菌，但在福云六号中未分离到内牛真菌。同样地，在福云六号和大白毫的老叶中均未 分离到内生

37、细菌，而两种茶叶品种的芽叶中均分离到34种的内生细菌。上述结论也表明内生 菌在茶叶的种类与分布会因茶叶品种和叶片龄期的而存在着差异。此外，本研究还发现不同 的种植方式和杀青工艺也会影响茶叶的内生菌的存在，常规种植的“大口毫"的芽叶的含菌量 为97.5139.5xl06cfu/g,明显高于冇机种植的26.5-28.3xio6cfu/go杀青工艺使常规种植芽叶 的内生菌含量降低30.10%。脂肪酸是生物体内不可缺少的能量和营养物质，是生物体的基本结构成分之一，在细胞 中绝大部分脂肪酸以结合形式存在，构成具冇重要生理功能的脂类，它是构成生物膜的重要 物质；是冇机体代谢所盂燃料的贮存形式；作

38、为细胞表面物质与细胞识别、种族特异性和细 胞免疫等有密切关系。脂肪酸和细菌的遗传变界、毒力、耐药性等有极为密切的关系°细 菌的细胞结构中普遍含冇的脂肪酸成分与细菌的dna具冇高度的同源性，各种细菌具冇其特 征性的细胞脂肪酸指纹图谱。国内外己有把脂肪酸用于细菌鉴定的报道l，0-12o故本研究使 用脂肪酸分析的方法鉴定分离得到的15株茶叶内生菌。目前，在各种农作物及果树等经济作 物中发现的内生细菌已超过120种(隶属于54个属)。这些内生细菌大多为土壤微生物种类，英 中假单胞菌属(pseudomonas)、芽胞杆菌属(bacillus)、肠杆菌属(eterobacter)以及土壤杆菌属

39、(agrobacterium)为最常见的属四。本研究分离到的内生细菌经脂肪酸鉴定从属于带有红杆菌 属(rhodobacter > 微杆菌属(m i c ro ba c 忆 ri itm )、根瘤菌属(rhizobium )和贪噬菌属(variovorax 这4个属的内生菌。关于植物内生菌在防治病害、促进植物生长发育以及固氮方而的作用，国内外都有研究, 我国冇从棉花、水稻、马铃黑、番茄、辣椒等植物中分离到内生菌，并证明了某些内生菌对 植物病害具有防治效果的报道。吴蔼民(2000)报道了内生菌73a和ala对棉花黄萎病的田 间防效及增产作用，其中73a的田间防效达51.28%,表现出18.1

40、5%的增产效果”】。袁军等(2002) 报道了防治马铃蒋环腐病冇益内生菌的分离和筛选及防病效果，筛选出5个比较好的菌株，其 中118菌株定殖、促生、拮抗3种作用兼备。黎起秦等(2003)报道了番茄青枯病内牛拮抗细菌 的筛选及防病效果。其中内生菌b47对番茄青枯病的大田防效达74.98%叫 何红等(2004) 报道了辣椒内生拮抗细菌的筛选及防病效果。其中bsj和bs2菌株对辣椒灰疽菌的防效10d 以后为57.34%94.08%叭 张立新等(2005)报道了番茄内生真菌对多种植物病原菌的抑制 效呆。其中fq72菌株的培养滤液对灰霉和菌核病菌的抑制效果分别达到75.68%和66.11 %切。洪永聪等

41、(2005)进行了从茶叶上分离筛选对茶树叶斑病防病效果好、对拟除虫菊酯类 农药降解效能高的内住细菌的研究。对福建茶树优良品种铁观音、黄口、毛蟹、肉桂4种茶叶 站种的芽叶、老叶和叶斑病的内生细菌进行分离和筛选，结果表明，茶叶内存在大量的内生 细菌，分离到的内生细菌数量为2.939.4xl06cfu/g,不同品种间冇一定的差异，同一品种间病 叶与健叶的内生细菌数量差异显著。所有的分离菌株屮有14株对四种茶树叶斑病菌都有不同程 度的拈抗效果，且在氯孰菊酯平板上牛长良好，但是仅鉴定了其中效果最好的一株菌tl2,为 枯草芽砲杆菌(bacillus subtilis)】。木研究从福云六号和人白毫的芽叶中分

42、离到的内生细菌数量为26.0139.5xl06cfu/g,供试的15株菌中，冇11株对供试10种病原菌表现出拮抗活性。 放射根瘤菌eb659号菌株有着最广的抑菌谱，能够抑制3种病原菌，番茄青枯雷尔氏菌、西瓜 细菌性果班病菌和棉花黄菱病大丽轮枝菌株，尤其是对西瓜來斑菌具有极好的抑菌效果，抑 菌圈能达到53.00 mm,对于作为生防菌防治植物病害具冇一定的应用和开发价值。英在植株 体内的定殖效果以及田间防效冇待于进一步的试验。参考文献：俞晓平，陈列忠，申屠旭，等.植物内生菌及其代谢物在生物农药创制屮的应用j浙江农业学报,23456891011121314152006, 18(5)： 289-293

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