DNA提取各种缓冲液的配制

1、植物总 DNA的提取、所需仪器设备及消耗品剪刀、塑料袋（封口）、冰箱、棕色广口瓶（1000、500、200、100、50ml）、量筒（1000、 500、100、10ml）、烧杯（ 1000、500、200、100ml）、pH试纸、电子天平、高压灭菌锅、 研钵、液氮罐（液氮） 、水浴锅、离心机、移液器（ 1套）、枪头（1ml、200ml、20l ）、 枪头盒、离心管（1.5ml ）（包括盒和架）、一次性手套、电泳仪、电泳槽、塑料胶带（宽）、 微波炉、凝胶成像系统、垃圾桶、冰盒（自制） 、记号笔、单面刀片二、所需化学药品及试剂CTAB、NaCl、EDTA-N2a·2H2O、Tris 、

2、冰乙酸、硼酸、 -巯基乙醇、 NaAc、氯仿（三 氯甲烷）、异戊醇、无水乙醇、溴酚蓝、琼脂糖、蔗糖、溴化乙锭（ EB）、RNase、 NaOH、 HCl（浓）、ddH2O三、各种缓冲液的配制一） 2%CTAB提取缓冲液（ 300ml）（高压灭菌）4mol/L 的 NaCl1mol/L 的 Tris-HCl0.5mol/L 的 EDTACTAB 2g35ml ×3=105ml10ml ×3=30ml4ml ×3=12ml×3=6g1×TE（母液 pH8.0）（50ml）（高压灭菌）1mol/L 的 Tris-HCl （ pH8.0） 500 l

3、0.5mol/L 的 EDTA（pH8.0） 100 l 工作液为 0.1 ×TE（45ml灭菌的 ddH2O中，加入 5ml已灭菌的 1×TE）三）4mol/L 的 NaCl（150ml）（高压灭菌）35.055g 的 NaCl，加 ddH2O120ml 溶解，再加水定容到 150ml四）1mol/L 的 NaCl（400l ）（用于配制 RNase储存液）取 4mol/L 的 NaCl（已灭菌） 100 l ，加 300 l 灭菌的 ddH2O。五）3mol/L 的 NaAc溶液（ pH5.2）（50ml）（高压灭菌）NaAc·3H2O20.405g加 ddH

4、2O30ml用冰乙酸调节 pH至 5.2加 ddH2O 定容到 50ml六）RNase储存液（ 10mg/ml）（1ml）1mol/L 的 Tris-HCl （ pH7.5） 10 l1mol/L 的 NaCl 15 lRNase 10mg沸水浴 1520min七）EB储存液（ 1mg/ml）EB 30mgddH2O 30ml 磁力搅拌至完全溶解，装入棕色瓶，铝箔包裹，保存于室温。制胶时 EB终浓度为 0.5 g/ml （30ml加 15l、40ml加 20l）八）10×TBE缓冲液（电泳缓冲液） （高压灭菌）Tris 碱 54g硼酸27.5g0.5mol/L 的 EDTA（pH8.

5、0） 20ml以上溶于 400ml 的 ddH2O中，在定容到 500ml工作液为 1×TBE或 0.5 ×TBE九）6×上样缓冲液（ 4保存）0.25%的溴酚蓝（ 2.5mg/1ml 40%（w/v）的蔗糖水溶液）40%（ w/v）蔗糖水溶液（ 2g/5ml 的 ddH2O，加热溶解，注：温度不能太高）十） 1mol/L 的 HCl溶液（不用灭菌）8.62 ml 的浓盐酸，加灭菌 ddH2O 91.38ml ，混匀，室温保存（ 100ml）1g 的 NaOH磁力搅拌器剧烈搅拌十一） 5mol/L的NaOH溶液（ 50ml，10g的NaOH溶于50ml灭菌的 dd

6、H2O中）（不用灭菌）200g的 NaOH，溶于灭菌的 ddH2O中，定容至 1000ml 十二） 1mol/L 的 Tris-HCl （pH8.0）（100ml）（高压灭菌） 12.11g 的 Tris 碱80ml 的 ddH2O加浓盐酸调节 pH值至 8.0 （大约加 4.2ml ）十三） 0.5mol/L 的 EDTA（ pH8.0）（50ml）（高压灭菌）9.305g的 EDTA-Na2· 2H2O40ml 的 ddH2O最后加水定容到 50ml，用 NaOH调节 pH 值至 8.0DNA定量用紫外分光光度计法， 1 OD26050g/ml 双链 DNA。PCR（聚合酶链反应

7、）一、所需仪器设备及消耗品冰箱（ 4、 20）、高压灭菌锅、离心机、移液器（ 1套）、枪头、枪头盒、 PCR管（包括盒和架）、PCR仪、离心管（包括盒和架）、一次性手套、 电泳仪、电泳槽、 塑料胶带（宽）、微波炉、凝胶成像系统、垃圾桶、冰盒（自制） 、记号笔、单面刀片、所需化学药品及试剂质粒（阳性对照）、引物（ 1、2）、4×dNTP、DNA模板、 buffer （MgCl2）、TaqDNA聚合 酶、ddH2O、琼脂糖、DNA标准样品（DNAla dder ）、溴化乙锭（EB）、5×TBE电泳缓冲液（Tris 、 硼酸、 EDTA）三、 PCR反应体系与反应程序仅供参考成分

8、母液浓度各成分加入量（l/ 20 l ）各成分终浓度无离子水9.7缓冲液（ buffer ）10×21×MgCl225mmol/L1.21.5 mmol/L4×dNTP2mmol/L20.2 mmol/L引物5pmol/L20.5pmol/LTaqDNA聚合酶5U/l0.63U模板 DNA20ng/ l2.550ng操作顺序： 水、 4×dNTP混合 buffer 、 taqDNA聚合酶混合，、混合 加入引物 混匀、分装 PCR管 向每个 PCR管加入模板 DNAPCR扩增反应程序：94预变性 35min。进入循环： 94变性 30s56退火 3045s

9、72延伸 12min，3036 个循环。循环结束后再 72延伸 7min外源脱水应答转录因子 DREB基因在转基因小麦中的诱导型表达与抗旱生理效果Induced Expression of DREBTranscriptional Factor and Study on Its PhysiologicalEffects of Drought Tolerance in Transgenic Wheat成分母液浓度各成分加入量(l/25 l )各成分终浓度无离子水13？缓冲液( buffer )10×2.51×4×dNTP2mmol/L20.2 mmol/L引物 15？1mol/L ？引物 25？1mol/L ？TaqDNA聚合酶5U/l0.2？1U模板 DNA20ng/ l1？50ngPCR扩增反应程序：94预变性 5min。进入循环： 94变性 45s45退火 45s72延伸 1min，35 个循环。循环结束后再 72延伸 10min。一般 PCR反应中引物的终浓度为 0.21.0 mol/L ，1.0 mol/L 时，特异性降