实验DNA的粗提取与鉴定

1、【实验】dna的粗提取与鉴定一、实验原理1. dna在nacl溶液中的溶解度随nacl浓度的不同而不同。当nacl的浓度为0. 14mol/l ibf, dna的溶解度最低。 利用这一原理，可使溶解在macl溶液中的dm析出。2. dna不溶于酒精溶液，但是细胞屮的其他许多物质溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取含杂质较 少的dnao3. dna遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色；dna还冇遇甲基绿溶液被染成蓝绿色的特性。上述两种方法均可用于鉴 定dm的存在。二、材料用具鸡血细胞液；铁架台，铁环，银子，三脚架，酒桔灯，石棉网，载玻片，玻璃棒，滤纸，滴管，量筒（looml, 1个）.烧杯（loo

2、ml, 1个，50ml> 500ml各2个），试管（20ml, 2个），漏斗，试管夹,纱布;体积分数为95%的 酒精溶液（实验前置于冰箱内24h）,熬他水，质最浓度为0. lg/ml的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2mol/l 和0.015mol/l的氯化钠溶液，二苯胺试剂三. 方法步骤步骤制备鸡血细胞液提取细胞核物质溶解dxa析出dna并滤取操作方法100ml鸡血100ml0.1g/ml柠檬酸钠上清液鸡血细胞液 鸡血细胞液过滤含dna的黏稠物原理収 0. lg/ml 的 柠檬酸钠溶液 looml,与新鲜 的鸡血混介并 搅拌，然片渺置 一天或离心机 离心约2 3min,除去上清 液取2

3、0ml蒸锚水 与约510ml 的鸡血细胞液 混合并充分搅 拌，然后用单层 纱布过滤，収滤 液于烧杯屮取2mol/l的 nacl 溶液 40ml 与上述滤液混 介后，用玻璃棒 沿一个方向搅 拌 lmin防止血 液凝 固，使 血细胞 与血浆 分离使细胞 过度吸 水而破 裂dna在 高浓度 氯化钠溶液中溶解度最人沿烧杯内壁慢 慢加入蒸懈水dna的并轻轻搅拌，至溶解度白色丝状粘稠随氯化物不再增加时钠溶液停止加水，然后浓度的用多层纱布过降低而滤，取纱布上的降低粘稠物dna的再溶解川锻子夹取纱 布上的粘稠物 放入20ml浓度 为2mol/l氯化 钠溶液屮，搅拌 至完全溶解，然 后用两层纱布 过滤，取其滤液

4、 放入小烧杯屮在度钠中度 a浓化液解大dn高氯溶溶故提取较纯净的dna取95%的、冷却 的酒精50nil与 滤液混合搅拌, 待出现丝状物 时用玻璃棒将 其卷起dna 彳、 溶于酒 粘，出 现沉淀dna的鉴定5ul0 0l5mol/l 应化饷涪懣提取物 缶匚苯胺取两支20 ml的 试管，各加入物 质的量浓度为 0. 015mol / l 的nacl溶液 5ml,将丝状物 溶解。然后放入 其中一支试管 中，川玻璃棒搅 样，使丝状物溶 解。然后，向两 支试管中各加 入4 ml的二苯 胺试剂。混合均 匀后，将试管置 丁沸水中加热 5min,等试管冷 却后，观察并il 比较两支试管 中溶液颜色的 变化。

5、遇胺水会蓝 a苯沸成 臥二浴染色卩q、常见问题分析1. 从鸡血细胞核屮提収的物质是dna吗？在鸡血细胞中加入蒸懈水，并且搅拌，利用渗透作用原理使鸡血细胞破裂，搅拌进-步促进了鸡血细胞的破裂, 丁是释放出其中的dna,当然也有少量的rna,还的蛋口质。因此，释放出的物质是dna、rna和蛋口质的混合物， 不仅仅只有dnao2. 怎样提高血细胞因低渗而破裂的效率？血细胞的细胞膜对低渗溶液冇一定的抵抗能力，这称为渗透脆性。一般而言，血细胞与蒸饰水相混合而使血细 胞处于极度的低渗环境之中，细胞因大量失水而致最终破裂并释放出胞内物（包括细胞核）。为促进细胞在低渗条件 下破裂，可以辅以快速而有力的搅拌，使

6、z受机械震荡而更易破裂。3. 怎样才能把血细胞释放的dna滤入收集的滤液屮？这一步较难处理，在过滤过程中常常发生因粘稠的果豚样物质堵塞过滤纱布的网眼而使后续的过滤难以完成， 很多dna没能滤入滤液中，这是造成失败的主要原因z-o解决的方法冇：过滤时待过滤溶液倒入漏斗的速度应缓慢，以免沉积于溶液屮层的胶状物-讣就把纱布堵住， 使过滤不能完成；一旦出现人量胶状物使过滤不能进行卜去，切忌用力挤压而使胶状物也滤入滤液z中，可以把胶状物重新用适 量的2mol nacl溶液进行搅拌，使其屮的dna得到溶解，然后再进行过滤。4. 实验中看到的丝状物的粗细是不是dna分子的直径呢？不是。因为dna分子直径只有

7、2nm。丝状物是多个dna分了聚在一起形成的。5. 盛放鸡血细胞液的容器,最好是槊料容器。鸡血细胞破碎以后释放出的dna,容易被玻璃容器吸附，山于细胞内 dna的含量本來就比较少再被玻璃容器吸附去一部分，提取到的dna就会更少。因此，实验过程中最好使用蜩料的烧 杯和试管，这样可以减少提取过程中dna的损失。同理，玻璃棒有吸附dm的作丿ij,可通过缓缓旋转玻璃棒的方法卷 起浓缩后的dna丝状物。6利用dna在浓度较低的氯化钠溶液屮溶解度小的原理，向含有dna的浓度较高的氯化钠溶液屮加入大量（300 ml ）蒸饰水，稀程氯化钠溶液，使dna的溶解度下降，而蛋白质的溶解度增窩（这就是蛋白质的盐溶现象

8、），从而使二者 分离。7鉴定时溶液蓝色的深浅，与溶液屮dna含量的多少冇关。演练高考1、破译生物基因组dna的遗传信息或进行基因操作，首先要提取细胞核臥a。下列不适宜作为d：a提取的实验材料 是（）a. 鸡血细胞 b、蛙的红细胞 c、人的成熟红细胞 d.菜花2、做dm粗提取和鉴定实验时，实验材料用鸡血而不用猪血的原因是a. 鸡血的价格比猪血的价格低b.猪的红细胞没冇细胞核，不易捉取到d7ac.鸡血不凝固,猪血会凝固d用鸡血提取dna比用猪血提取操作简便3. 下列实验小所用试剂错误的是（）a、在观察植物细胞冇丝分裂实验屮，使川酣酸洋红溶液使染色体看色b、在提取叶绿体色素实验屮，使用丙酗提取色素c

9、、在dna的粗提取与鉴定实验屮，使用氯化钠溶液析ip. dnad、在蛋白质的鉴定实验中，使用苏丹iii染液鉴定蛋白质4. 下表是关丁dna粗提取与鉴定实验中所使用的材料.操作及其作川的表述。正确的是（）试剂操作作用a柠檬酸钠溶液与鸡血混合防止血液凝固b蒸锚水与鸡血细胞混合保持细胞形状c蒸馅水加入到溶解有dna的nacl屮加速dna的溶解d冷却的酒精加入到过滤后dna的nacl中产生特定的颜色反应5在采用鸡血为材料对dm进行粗提取的实验小，若需进-步提取杂质较少的dma,可以依据的原理是a. 在物质的量浓度为0. 14 mol /l的氯化钠溶液中dna的溶解度最小b. dm遇二苯胺在沸水浴的条件

10、下会染成蓝色c. dna不溶于酒精而细胞中的一些物质易溶于酒精d. 质屋浓度为0. lg/ml的柠檬酸钠溶液具冇抗凝血作用6萝卜贮藏根组织细胞中是否存在蛋白质和dna?某生物小组对此进行研究，他们从网上查阅资料得知：蛋白质 在10%nac溶液屮可沉淀析;lh在蛋口质溶液屮，加入双缩脈试剂，溶液呈现特有的颜色；d7a溶于10%nacl溶液 但在95%酒粘中呈口色絮状沉淀，析出。实验材料：白萝卜。实验用具：粉碎机、烧杯、漏斗、试管、滤纸、玻棒、银子、载玻片、天平、纱布。药品及试剂:蒸係水、nacl. 95%酒精、甲基绿染液、双缩服试剂、蛋白质标准样品。请你根据所提供的条件参与实验设计并完成实验。一

11、、材料处理：二、提取：三、鉴定及结果：四、讨论：、蛋白质在萝卜贮藏根组织细胞中所起的作用是。2、dna主耍來自萝卜贮藏根纽.织细胞的。参考答案1. c木题考查的是dna的粗提取实验材料的选取。dna主要分布于真核细胞的细胞核屮，而人的成熟红细胞屮无细 胞核，故无dna,因而不能用人的成熟红细胞用为dna提取的实验材料。2b哺乳动物成熟的红细胞没冇细胞核和其他膜结构，因此常用作植被细胞膜的实验材料，而dma的粗提収和鉴定 实验必须获取较多dm,因此常用鸡血而不能用猪血，鸟类的红细胞中含有细胞核。3.d本题考查的知识点是四个实验屮冇关试剂的正确使用。在观察植物细胞冇丝分裂实验屮，常用龙胆紫溶液染色

12、, 但也使川醋酸洋红溶液使染色体着色；bc选项均正确；在蛋口质的鉴定实验中，使川双缩丿求试剂鉴定蛋口质。 久a木题考查的是dna粗提取与鉴定实验小柠檬酸钠溶液、蒸饱水、冷却的酒精的作用。柠檬酸钠溶液是抗凝剂， 与鸡血混合后可防止血液凝固；第一次使用蒸锚水是讣蒸锚水与鸡血细胞混合，作用是讣血细胞吸水膨胀，加速血 细胞破裂；第二次使用蒸绸水是将蒸馆水加入到溶解冇dna的2mol/l的nacl屮，作用是使nacl溶液的浓度降低至 0. 142mol/l,此时dm在nacl中的溶解度绘小，从而使dna析出；冷却的酒精对dna的凝集效果址亿 加入到过滤 后dna的nacl中的作用是让dna分子凝集。5.

13、 c该题考查了实验的基本原理，属丁记忆层次的考点，由t dna不溶丁酒粘:，而混杂在dna中的某些细胞中的物 质易溶于酒秸，因此向含有杂质的dna屮加入95%的冷却酒粘能进一步提纯dnao6i解析本题为验证性实验设计题，鉴定萝卜贮藏根细胞组织中是否存在蛋口质和dna。其关键是分别从萝卜贮藏 根细胞纽织屮提取出蛋白质和dna,实际上在题干上已非常明确地给出了提取的方法，只要稍加幣理即可。然后分别 用双缩腺试剂和甲基绿染液进行鉴别，同时在进行实验的过程中要注意对照实验的设磴。答案一. 材料处理：称取50g萝卜冼净切块，加水30ml,粉碎机粉碎，将匀浆经纱布过滤。（萝卜和加水的量可以不作要求）二. w：1. 提取蛋白质：向经纱布过滤得到的滤液屮加入10%nacl, 直至沉淀析出。经滤纸过滤，将滤纸上的沉淀物放入试 管中，加入lml蒸饴水，振荡，用于蛋白质鉴定。2. 提取dm：向除去蛋白质的滤液中，加入95%酒粘，用玻棒轻轻搅拌，见有白色絮状沉淀产生，经滤纸过滤，用