虎杖中白黎芦醇提取工艺研究

1、虎杖中白黎芦醇提取工艺研究虎杖(polygonum cuspidtum sieb)为蓼科葛属多年 生草本植物的干燥根茎，主要含有恵酿类、罠类、水 溶性多糖和棘质等成份【»白藜芦醇在植物中分布广, 目前至少己经在21个科、31个屈、70余种植物中发 现了白藜芦醇.足虎杖的主要功效成分。研究表明： 它对心肌细胞、血管平滑肌细胞、对改善微循环等有 显苦作用；此外白藜芦醇能减轻多种因素造成的组织 器官损伤，ji有保护胛脏、抑制血小板聚集、镇咳平 喘、抗菌、抗病秦、降血脂及抗脂质过氧化等作用hl 生物酶法越来越多的应用于中药有效成分提取.它具 有提取效率高，不易造成有限资源浪费和污染的特点,

2、成为现代提取方法的研究热点叭冃前捉取白藜芦醇主要以虎杖为原料，常用的捉 取方法是溶剂捉取法、碱提取法、酶提取法、微波提 取以及超声波提取。本实验通过比较酶法提取和溶剂 提取两种方法，选出白藜芦醇制备的最优方法，提髙 白按芦醉的得率，为白藜芦酹的进一步工业化生产提 供依据。1材料与方法1.1材料与仪器1.l1材料与试剂白藜芦醇对照品纯度99%,国家药品生物制品鉴 定所；虎杖块茎，湖南桑植县八大公山，粉碎后过筛; 纤维素酶，上海们奥生物科技有限公司；乙醉为分析 纯，广州化学试剂厂。i.l2仪器与设备tu-180紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器 有限责任公司；旋转蒸发器，上海虹析电了仪器仪表光度

3、注值,x为浓度mg/ml）, r2-0.9995,线性范倒:° °0204060fig.1 sundird cune of resveratrol 溶剂法提取工艺的优化2.22.2?!0.50 r3025仃限公司；shz-i1i循环水真空泵，上海钿华层析设笛 厂；便携式ph计，phb-5上海伟业仪器厂；电热恒 温水浴锅，北京ifj长风仪器仪农公司；分析天平，上 海天平仪器厂。1.2方法1.2.1原料处理将虎杖块茎粉碎，并筛分为一定粒径（60目）的 粉末。1.2.2溶剂法提取白鑿芦醉准确称取粒径60 h虎杖粉末l00 g,置尸100 ml 容虽瓶中，按一定的料液比加入60%乙

4、皤溶液，调节 样品溶液ph后邂封，称重。放到一定温度水浴锅中 水浴-定时间.放置冷却、补車、过滤，柿释后，以 提取溶剂为参比，在紫外分光光度计上测定濾液在波 长331 nm、333 nm的吸光度，计算提取得率。1.2.3酹解法提取白藜芦醇准确称取粒径60目虎杖粉末l.oog.g于100ml 容量瓶屮，按一定的料液比加入60%乙醉溶液.加入 不同蜀的纤维素购，调节样品溶液ph后密封，称瓦 放到一定温度水浴锅中酶解-定时间。放置冷却、补 龜、过滤，稀释后，以提取溶剂为参比，在紫外分光 光度计上测定滤液在波长331 nm. 333 nm的吸光度, 计算捉取得率。124白藜芦醇的测定与含量计算1.2.

5、4.1白藜芦卿标准曲线的绘制精确称取白藜芦醇对照品5.0 mg,用乙醇溶解于 50汕 容量瓶中.稀释刻度、摇匀.分别吸取此液0 ml、0.1 ml、0.3 ml、0.5 ml、0.7 ml 于 10 ml 容粗 瓶中，加乙醉稀释到刻度、摇匀，所得浓度为0.0 hg/mlx 1.0 pg/mls 3.0 pg/'ml, 5.0 pg/mls 7.0 |ig/ml 的溶液，以乙醉为参比，在紫外分光光度计上测定各 溶液在波长331 nm、333 nm的吸光度.以 a（ as” am对浓度作标准曲线及回归方程。1.2.4.2提取得率的计算在波长331 nnx 333 rnn处进行比色测定其吸光

6、 度后作差值aa（awrab3）»由回归方程计算口藜芦醉 浓度，再由稀释倍数计算出提取液中白藜芦醇的含量。 白藜芦醇的提取得率计算公式如下：门藜芦醇得率/%2结果与分析2.1白藜芦醇标准曲线的绘制对实验数据进行相关分析，白藜芦醇浓度和吸光 度差值的线性回归方程为：y=0.0072x+0.0002（y为吸80 100料渡比图2料液比对白葉芦薛提取得军的形响flgj influence of sottd-liquid ratio on the extraction yield ofresveratrolph图3 ph对白燥芦薛提取得率的影响fig3 influence of ph on

7、the extnetion yidd of resveratrol 准确称取粒径60目虎杖粉末1.00 g,置干100 ml 容星瓶中，加入60%乙肿，提取温度50匸、提取时 间2h,确定适宜的料液比（实验设计料液比为1:20、 1:35、1:50、1:65、1:80进行比较）.由图2可确定料 液比为1:50,然后分别进行ph、提取温度、捉取时间 单因素试验（图3图5）,试验结果表明，料液比、 ph.提取温度、提取时间对白藜芦醇提取得率有显苦影响，所以确定这四个因素进行正交试验。0 50ro.o.o.o.o.0 20 111'020406080100120wt/r图4温度対白魏芦酹捉取

8、得率的影晌fig.4 influence of bath temperature on the extraction yield ofresveratrol0.30 r0 00.结合单因素的试验结果，在单闵素的基础上设计 了以ph、料液比、提取温度、提取时间为因素，做四 因索三水平的正交试验，正交试验结果如表由表1可知提取虎杖中白藝芦醇的最佳工艺参数 为:a2b3c2d）.即ph-5,料液比1:65,提取温度是 60-c.提取时k2h是溶剂法提取的躍隹工艺条件。 四因素中料液比对白藜芦醇扭取得率影响最显苦，其 次为ph值，然后是提取温度，提取时间影响最小。 2.3溶剂提取法优化工艺的验证准确称

9、取粒径60冃虎杖粉末l.oog,各五份，分 别誉flooml容最瓶中，加入60%乙醇65ml,调 节ph为5,在60 *c水浴中提取2 ho放置冷却、补重, 稀释后，以60%乙醇为参比，在紫外分光光度计上测 定提取液在波长331 nm、333 nm的吸光度，计算平 均提取得率为0.496%rsd为3.3%。2.4酶解法提取】艺的优化2.4.1单因素试验0.80 r0.25时(bj/h圏5时间对白藝芦ii提取碍率的影响flg5 influence of dme on the extraction yield of resveratrol 222正交试验605040ao.o.0.30 0叫1020

10、3040506070礎- 号a(ph)因素d（提取叶r/b）提取卑/%b （料凌 比）c (捉取混</v)11(3)1(1:35)1(40)10391212(1:50)2(60)2(3)0.482313(1:65)3(80)3<4)0.45542(5)1230.436522310.464623120.46«73(7)1320.357832130361933210.46213281.184l2201.3171368l3071.3801.3071.1801.385l2761.2520.44303950.4070.4390.4560.4360.4600.4370 3930.46

11、10.4250.4170.0630.0660.0530.022表1溶剂提取法正交试验结果table 1 results of the orthogonal experiment for solvent extraction optimizetioaresveratrolq.3q 卜0.80 r料液比0b 6料液比对白藜芦酵提取得率的影响hg.6 influence of solid-liquid ratio on the extraction yield ofph图7 ph对白專芦酢提取得率的影响fig.7 influence of ph on the extnetion yieki of r

12、esveratrol 准确称取粒径60目虎杖粉末1.00 g,宜于100ml 容量瓶中.加入60%乙醇，加入10 mg的纤维素酶， 提取温度50 0提取时间2 h,确定适宜的料液比（实 骏设计料液比为1:20、1:30、1:40、1:50、1:60进行比 较人由图6可确定料裁比为1:40,然后分别进行ph.80.70.60.50406o.o.o.c0.30号因素提取犁/%a(ph)b溝解 时剛h)c (群解aji/xj)d (着液比)!h5)10)1(40)1(1:30)0.496212(1.5)2(50)2(1:40)0.662313(2)3(60)3(1:50)0.61942(6)1230

13、.654522310.680623120.77373(7)1320.801832130.619933210.676k.1.7771.9511.8881.852k：2j071.9611.9922.236k)2.0962.0682.1001.892h0.5920.6500.6290.6170.7020.6540.6640.745kj0.6990.6890.7000.631r0.1100.0390.0710.128«2曲解法正交试验结果table 2 hesuks of the orthogonal experiment for enzy maticextraction酚解温度、酶解时间用

14、因素试验.试验结果表明.料 液比、ph、瞬解温度、悔解时间对白藜芦醇提取紂率 有显著彫响，所以确定这四个因素进行正交试验。0.90 r0300.20*111'1'10203040506070 m湿度,p图8図解温度对白蔡芦舒提取得军的影响fi斗8 influence of enzymatic temperature on the extractionyield of resveratrol0.90 r°叫.00.51.01.52.02-53.03.5时树/hffl8酶解时间对白娶芦醇提取得率的影响eig.8 influence of enzymatic time on

15、 the extraction yield ofresvcmtrol2.4.2正交试验结合单因素的试验结果，金单因素的基础上设计 了以ph、料液比、酶解温度、酶解时间为因素，做四 因素二水平的正交试验，正交试验结果如表2。由表2可知提取虎杖中白藜芦醇的最佳工艺参数 为：a2b3cq2,即ph=6,料液比1:40,晦解温度足 60酶解时间2 h足酶解法提取的最佳工艺条件.四因素中料液比对白藜芦醇提取得率影响是显若.其 次为ph ffb然后是龄解温度，酶解时间影响垠小。 2.5酶解法优化工艺的验证准确称取粒径60目虎杖粉末.00g,各五份，分 别置于100 ml容量瓶中，加入50%乙醇40 ml,调 节ph为6,在60 *0水浴中酶解2爪 放迸冷却、补稀释后.以50%乙醉为参比.在葉外分光光度计 上测定提取液在波长331 rnn、333 run的吸光度，计 算平均捉取樹率为0.942%, rsd为25%°3结论 3.1在单因素试验的基础上，通过正交试验，确定了 溶剂袪提取口藜芦