青枯雷尔氏菌TN5转座子无致病力突变株插入位点的鉴定与分析

1、带格式的：字体:arial narrow, 小三带格式的：居中带格式的带格式的（带格式的m（带格式的:£带格式的f带格式的j带格式的：顶端：2.5网米，底 端：2.5厘米带格生的ctl带格多的匚二带格式的： 字体：arial narrow带格式的厂identification and analysis of tn5 transdosontransposed. insert smsites in avirulent mutants of ralstonia solanacearum che jiarvmeii, ma guimei2, liu bqzhu yuiingi,zheng x

2、uefanq!, tang jiarvvant丄(1. agricultural bioresource research institute, fujian academy of agricultural sciences, fujian fuzhou, 350003,=chinq； 2. kev laboratory of biopesticide and chemical biology fuiian agriculture and forest” university fuzhou350002, china)丄abstract： mulanis of rais伽ia sokmacwru

3、m strain fjap91 using tn5 iransposon mulagenesis were gol in (his daper, which were named fjatt582 and fjatt583 j?a/s伽bacterial will to obtain avielent nu4an&#sinqeztn5 并ansposon random insert rsobn/ebivm andfese审chinthe insert sites and ggigrv円o申holog米o口he4wosgb*viealeajffurtaftfscolony morphol

4、ogy and attenuation indexes showed that both of the mutants fjatt582 and fjatt583 were avirule" strains. and attenuation indexes of these 2 strains were over 0.8. a 681 bp fragment of the ranamycin resistance genq was amplified from the genome dna of the mutant strains jhe insertion sites of th

5、ese 2 avirulent mutants werq jocated 讥 4|tesulteihat-tfansposor-irseftiftputative diguanylate phosphodiesterase gene and type jll. effector protein gene, respectively-. it was suggested that mutations of ahese ihese 2 genes厂nurtatien- would affect the pathogenicity of the r solanacearum strainsjead

6、to sto佛 a曲enita护的洋伽間巒ifulen好ealthqkey wod、ralstonia solanacearunivirulent mutentmutanl 曲enuation attenuation index般式的：字体：aria. narrow,带格迭的i带格丢的：居中带格式的：字体:arial narrow, 四号带格式的带格式的：字体：（国际）arial narrow带格式的：屈中带格式的，带格式的带格式的 匚二青枯雷尔氏菌是引起植物细菌性枯萎病的病原菌，广泛分布丁热带、亚热带和温带，其寄主范i带格式的：字体：arial macow堆金项ii： “h 农村领域国家科技

7、汁划课題（no.2012aa101504）,国家星火计划项丨|（ no. s20110410006）和福建省财政”项福建 省农业科学院科技创新团队建设加金（nostlfy03）作者简介：乍加（1977），女，山东省乳山帀人，副研究閔，叫:，研究方向为生物技术与生物防治°tch059187882571：em“ihchcim2002163 com。拿通讯作者：刘波1957）.男.福建省惠安具人，研究员，博上，研究方向为微工物住物技术与农业生物药物。ibh emaihiubofaas ：彎式的：行距:多倍行距l25i域代码豆更改带格式的：術萄牙语（巴西）青枯雷尔氏

8、菌卩5,转座子无致病力突变株插入位点的鉴定与分析车建美i ,马桂美2 ,刘波，朱育菁1 ,郑雪芳i ,唐建阳丨（1.福建省农业科学院农业生物资源研究所，福建福州，350003 ; 2.福建农林大学生a物农药与化学生物学教育部重点实验室 福州350002 ）摘 爰：丄青枯雷尔氏阀（ra/s紬浴soaacea加傀是植物细胡性青枯病的病原胡，刑丿ij ez-tn5苗入强致病 力青枯雷尔氏菌fjat-91，获得究变株.fjat-t582,和.fjat-t583缈究且小5专座了随机插入晋牯雷尔氏 菌（fjat9.）,从而获得无致病力菌株,.°菌落形态观察及弱化指数测定结果农明，.突变株.fja

9、tt582 决.fjatt583,表现为典型的无致病力繭落形态，冃芻化指数均在0.8 .以i;。.刑用卡那特素抗性丛i大肘 异性引物从突变菌株fjatt582,和fjatt583川均扩增出片段大小为681 bp,的条带，而野型菌株 fjat9,木扩增出任何条带，说明tn5.转座了工插入其基因组中屮册究g抹无致病山辖株的:对.这.2林 无致病力突变株进行反向,pcr测序和序列比对，分析鉴尢出的入位占及茵落形态观察结果农唄， 转座了分别插人插入位点了i编码putative diguanylate phosphodiesterase基因和川型效应蛋h基两中，推 測瑾込,2个.基因的突变致使强致病力菌

10、株表现出无致病力特征。 关键词：青枯雷尔氏菌，无致病力突变株，弱化指奴带格式的围相当广辺妆特别是对茄科植物的危害史大。番茄青枯病在我国台湾及长江流域均跆发避1,通 常情况下，由青枯雷尔氏菌引起的番茄青枯病一般在,20-30%,严重时可引起,80%植株的死亡，甚至 绝收坠h前对青枯病的防治手段二般有药剂防治、嫁接、生物防治等措施。药剂防治见效快，效果 好，但易造成环境污染、农药残留及抗药性等问题理。嫁接对疾病的控制起到积极的作川，但操作方 法复杂。生物防治具有是无毒、安全、无公害等优点，符合绿色农业的要求，因此越来越多的人将 11光转移到生物防治一i理。般普遍的生物防治的方法是利用生防菌对青枯病

11、进行防治，如利用易培 养、有抗菌活性的蜡状芽胞杆菌进行青枯雷尔氏菌的防治尸雲也有报道利川无致病力菌株对青枯病 进行防治，弱无致病力菌株与醪病力菌株间存在干扰现裂治。弱么湫病力的菌株不仅可以抑制致病菌的生长,还可以诱导植物的抗性驼讐因此无致病力青 枯雷尔氏菌对致病力蔺株的在青枯病的.防治i为广泛的应用的潜力。带格式的本实验室在前期研究屮利用ez-tn5入从番茄植株上分离得到的强致病力青枯雷尔氏菌fjat-91?构建工青枯雷尔氏菌突变体库,共保存了004,株青枯雷尔氏菌突变株,获得了多株无致病/ 力青枯雷尔氏菌苗落形态的突变株，前期研究对具小戸,株无致病力青枯雷尔氏菌遴存插入位点皑 舲分析,经反向

12、.pcr,测序和序列比对，分析鉴定山这,5 ,株青枯雷尔氏菌突变株的插入位点分別位 于phca*因和肿cs岸因上理 但其它无致病力突变株的插入、是否还它致病性相关的插入位点还冇待于进-步深入研究。冷研究的舁的昱通过检测无致病力.責枯雷尔氏菌晁致病书突变株的插入位点,分析其与菌株致 病和关性，从而为研制植物疗枯病疫苗茁剂提供遗传稳定且基因突变位点明确的无理边青枯宙尔 氏菌无谿曲菌株捉供依据）同时，也为番茄青枯病的生物防治奠定基础。带格式的带格式的带格式的j材料与方迭一j.1，菌株来源，一淸枯雷尔氏菌fjat-1582. fjat4583菌株来源于青枯雷尔氏菌fjat-91她,e§tn5

13、龄朋无插入突变 体库。i带格式的带格式的j.2 .试剂与仪器，一（1）试剂与培养基：ttc培养基：每升含匍萄糖5g,蛋白blog,水解酪蛋白1 q, 琼脂17g,每200 ml培养基中加入1 ml 1%ttc, ph7.0-7.2： spa培养基:每升含蔗糖20 g,蛋白腺5 q, k也po卫.5 / q, ,mgso025q, ph7.0-7.2； 0ntp购鬥英骏生物技术有限公司：taq解购h北京天根生化科技有限公 司；卡那霉素抗性基因的引物 kna£：rggtgcgacaatctatcga-3：和,kna&,5'-ctcatcgagcatcaaatg-3：； 青

14、枯雷尔氏菌突变株侧翼序列扩增引物fp-： p申cctacaacaaagctccataacq3 ”p1 ,5'£caatgtaacatcagagatntgaq3也上海博尚生物技术冇限公司合成。带格式的（2）仪器:美国biometra梯度pcr仪；德国bio-rad电泳仪：淡国jvp凝胶成像仪；德国leica m165 fc体视显微镜。带格式的带格式的带格式的j.3，试验方法，”1.3.1,枯雷尔氏菌，菌落形态观察，无-80 °c,冰箱屮取出c经构建的突变体.菌株,在jtc （含有.50|jg/ml,卡那霉索）平板上划线。再 丁*0 °cjh温培并:箱屮培笄尹

15、占厂挑取单菌落转接到上?0 ml spa液体培养基中（含有rug/ml卡那/ 霉素），30 q j70 r/min振荡培养4-16 ho将过夜培养物稀释到严稀稔涂布jtc,平板（含冇,50 pg/ml 卡那霉素），g-t30 °c;恒温培养箱中培养48 h加进行菌落形态观察。/1带格式的带格式的1.3.2清枯雷尔氏菌，弱化指数的测定一，对的涂巒板获得的涓枯雷尔氏闽单菌落进行弱化指数！测迄 忑体视显微镜下分别测量菌落 的白边直径和红边直径，计算弱化指数耳。°/弱化指数=瓷鸞a白应直径j.3.3，青枯雷尔氏菌突变拯的鉴定附转座手满入序列及其侧翼序列的;rgr护堰,3）卡那抗性基

16、周的扩堰 _ 参照promega试剂缺作方迭提取野牛型菌株和突变菌桂-基因组总 dna。卡那耗索航性基因扩增25plpcr,反应体系巴包範:2.5 pl wxbuffer, 0.5 pljo mmotldntp j pl 10 pm mol/lknafu knari物,0.3 pl2.5 utaq側,j pl25ng,模板pn&°扩增程序:预谜 3 min； 然后进入他030 q,他030 q,化。cj miq,共,35个循环；最后涎伸jo min,。采用卫创琼脂糖 凝胶电泳检测,pcr产物，上样量为,6叫，电压为j0qx电泳时问,50miq,用,uvpj疑胶成像仪拍摄。 .

17、1.3.4青枯雷尔氏菌突变株插入序列及其侧翼序列扩增., 限制性内切睥插入位点的侧與序列扩罐一pst 聖切反应体系为忽叭 共中包括：joxbuffer q2叫,dnajm版叫,ps（lj叫。捋上述溶剂加入,pcr管中丁,胫混匀,07jc遍育80jcjm 育,20 min,终止酶反应°,25pl能"4连接酶连接体系包括，：酶切后dnioyl, ,t4,连接酶,2.5叫,j0xt4 buffepm于？三七温育jh后t6丫（温育jo min到昶翠育总尹时，终止酶反図 采用，反向 引物进行反向,pcr扩增,25 plpcr反应休系x： 2.5 pl wxbuffer, 0.5 pl

18、jo mmoldntps.j pl 10 pm mol/l fp-1和,rp-2$|物，,0.3 pl 2.5 u taq脚,dn/： j% 扩增程彫为，:他。q,预变性,3miq；然后施入现;q ,30 q, ,5lq30q,建兀规q, 共个循环；最后72；c伸omiq。采用齡琼脂糖凝胶电泳检测 ,pcr,产物，上样量那山 电压为jo（1x，电泳时间50出;uvp,凝胶成像仪扌ii摄。j 34-5.侧翼序列测定及比对,分析，不同致病性青枯雷尔氏菌，插入位点侧翼序列,pcr剖泸增结果进行ja,克降测序，由上海博尚 生物技术佇限公司完成。利用,ncbi,数据库对插入位危基因测序结果比对分 析。2

19、，结果与分析：2.1，青枯雷尔氏菌黑变菌株与聞生型歯桃菌落形态比找育枯雷尔氏菌野生型菌株fjat-91 勺突变菌株fjat-t582j1ifjat-t583落形态如图所示。从菌 落形态上可以看出野生型菌株fjat-91为原始斛z菌落表面较湿sk，月流动性强,菌落中间为粉 红色，门边较宽,，为典型的强致病力青枯雷尔氏瓯琵突变株,fjat-t582,和,fjat-t583出菌落表面较干 燥,无流动性，屮间为暗红色，并且白边较窄.，为典型的无致病力青枯雷尔氏蝕°带格式的 二2带格式的带格式的带格式的：缩进：许行缩进：0字 :符，定义网格后不调整右缩进 带格式的三带格式的匸二带格式的匸=|f

20、jatt582fjat4583fjat-91，图青枯雷尔氏菌笑变菌株爭生型菌檢的画落彤态fig.1 colony morpholoa比of the wild woealssnia solancearum strain and itsfvieulent mutants片带格式的:字体:arial narrow, .字体颜色：红色带格式的一.带格式的2?，青枯雷尔氏菌黑变菌株与宵生型菌株弱化指数差尾为了进二步分析疔枯宙尔氏菌突变菌株与野生型菌株致病性的差并，采用体视显微锐进行了不 同菌株弱化指数的测辽（图丸。从表h中可以看出，不同菌株皑弱化指数也发宠了明显的发化，涓带格式的枯雷尔氏直突变株fjat

21、-t582ifjat-t583/i<j弱化指数均在,0.8&以上，分别为0.8611 p.84,均人于野生带格式的醴菌株的弱化指数a0.65, 推测冋能曲于jn5,的插人引起戦基因功能改变，如册除盼物质的 / 泌董迄，导致致病性发生改瓷。50 0(.25 76亦e21 952md1fjat45835 00 mm4 257mm周2 样视显微镜平青枯雷尔氏菌突变菌株与野生型画籾弱化指数的差异测定带格式的determinatio n of attenuation indexes of the wild tvoe ralstonia solancearum strain and its

22、avieulent mutant带格式的，表淸枯雷尔氏菌来变菌株与営生型逋抵弱化指数的比较带格式的(.)fjat-t582fjat-91i带格式的：字体:arial narrow2.612mm:字体:arial narrow菌株编号哲边直径白边直径弱化指数(strain number)直(diameter of red edqe) x(diameter of white edqe) x 二二一 t(attenuation indexes)直fjat 迪 8223.3 翌.9527.1.80厲阻）.01fjat 谑 8314.1.65j6jq+p-48p.tp.oi'fjat-00912

23、7鉀0£27±pm0 觀).02(table 1 8mdarisor)of attenuation indexes of the wild type ralstonia solancearum strain and its avieulent mutants带格式的:字体：arial marrow带格式表格带格式的：字体：arial narrow 带格式的：字体：arial narrow2.q，青枯雷尔氏菌突变菌株插入侧舅序列的扩增的鉴定.w別丿u卡那霉素抗性基因特异性引物对青枯雷尔氏菌野生型菌株和突变菌悔进行,pcr扩増，结果表明，从突变菌株,fjat-t582和,fja

24、t-t583中丄垃扩増加段人小为,681 bp,的条带，而野生型菌株fjat-91未扩增出任何条带，说明tn5转座了已经插入其基因组中.（图w24青枯雷尔氏菌突变菌株插入侧翼序列的扩增.粋变菌株fjat-t582/iifjat-t583j基因组,dna。采用尸sil进行iw切，经j4,连接酶连接，利用反 向fcr幼物进行扩增。扩增结果如图,6丙示，从突变菌株fjat-t582/'增得到约,200 bp的片段，从 fjat-t583/ ifi得到约,300 bp的片段，由此可以证明，在青枯雷尔氏菌突变菌株fjat-t582jh fjat-t583 中均存在jn5ifi入序列。厶|t582

25、 t583 91 mt582 t583 m3000 bp3000 bp（带格式的： 字体：ariol narrow 带格式的：字体：.arial narrowi带格式的：字体：arial narrowi带格式的：字体：arial marrow ® i带格式的_带格式的 般g带格式的 聊磴带格式的 獗带格式的 g朋我格式的带格式的_册qi带格式的带格式的一0*,'带格式的1000 bp1(x)0 bp带格式的带格式的：字体：加粧（国际） arial narrow50() bp50() bp陳格式的:缩进:首行缩进字 j带格式的带格式的带格式的 带格式的 周a清枯雷尔氏菌突变菌株

26、与，野生型園株丰那基因检测 周£，青枯雷尔氏菌黑变菌株尸sfl禹切，图谱（m：分子 带格式的query42sb jet1538407query102sbjcr1538347query162sbjct1538287tcggcctcttcgcgctgcagg 182llllllllllllllllllllltcggcctcttcgcgctgcagg 1538267tgggcatccgacagattcactgcggcgtgcaggtccggttggcgggccgtgccggcacgctgggcatccgacagattcactgcggcgtgcaggtccggttggcgggccgtgccg

27、gcacgc图a，青枯雷尔氏菌突变菌株fjat-t582插入位点侧翼序列的blast结果fig.6 blast result of the flank of insertion of avirulent mutant fjatt58410115383481611s38288gcaatgtaacatcagagattttgagacacaattcatcgatgatggttgagatgtgtataagagacaggcttgccagtcaggtcatgcto gaccagcaggcgccggaacttcagcagcgtggtcgcgtccggcacgttctcgaccgccagatcaatgccggcg

28、aacgcacgcatcg ccatgctgtcgtacaacgcatcttccagtccttcgtccgacagcccgtaccactgctgcaagaaataaatgcgcagcatcctctgcag gtcgactctagaggatccccgccacggttgatgagagctttgttgtaggt带格式的带格式的：字体:arial narrow带格式农格 带格式的鉴定zm：分子虽标准？00皿5 2°°帥以、jsooj) j20.星标准poooj)f>.j500j) j20> jopopooj)jopox foqj)5 oqj) 7ooj) foqj)$

29、凱啦：400) ooj) 7ooj) ooj) ooj) 少观 p0 ooj)3呱 mm jow/fiq.3 identification of the wild tvoe ralstonia solancearum strain fig.4 fs【idjpn enzyme mapdiriqwithf s i jf the wild tge and its avieulent mutants (m: marker, 3000 bp、2000 bp、1500 bp、 ralstonia solanceaivm strain and its avieulent mutantsl(m: marker

30、, 1200 bp、1000 bd、900 bd、800 bd、700 bd、600bs 500bp、 3000 bq、2000bp,、1500 bp,、1200 bd、1000 bp、900bp、800400 bd、300 bx 200 bp、100 bd、bp、700 bp、600 bp、500 bp、400 bx 300 bp、200 bo、100 bp i2.青枯雷尔氏菌黑变菌株插入侧翼序列的分机;1色反向fcr矿增的青枯雷尔氏菌突变菌株插入侧灭序列进行ja克隆测序并在"cbl数据库小进 行比对（图,5®。结果农明，突变株fjat-t582jfti入位点的侧翼序歹i

31、位无青枯雷尔氏菌gmi1000大质 粒匕，但未表明其基因功能。进一步将该基因与青枯雷尔氏菌gmi1000的基因组序列进行比对，比 对结果为t衣明,该慕因t主要.用斗编码putative diguanylate phosphodiesterase丄转座了在该基因的1538406 bd处插入（图6儿。淡变株fjat-t583/ffi入位点的侧翼序列位于青枯雷尔氏菌的ype iii effector protein 基因上，转座了在type iii effector protein2074 bp处插、（图8）。因而推测,，青枯雷尔氏菌的 大质粒上 putative diguanylate phosp

32、hodiesterase 和 jtype 111 effector protein可能打其致病力相关，一旦这些 族因受到外源基因的干扰，可能会影响致病相关物质剧的衣达攻分泌,从而表现，出无致病力的筛 gcaatgtaacatcagagattttgagacacaattcatcgatgatggttgagatgtgtataagagacaggcaccgcgtggcgcgcggcaa* tgtcgcgtaccacctcgctcagctgcgggtcgagcagttgggcatccgacagattcactgcggcgtgcaggtccggttggcgggcc gtgccggcacgctcggcctcttc

33、gcgctgcaggtcgactctagaggatccccgccacggttgatgagagctttgttgtaggt图q清枯雷尔氏菌突变菌株fjat-t582插入位点的侧翼序列 亘 下划线部分为引物序列:阴影部分为me序列)f ig.q $quence of the flank of insertion of avirulent mutantf jatt58?f equence olunderlinqis primeqand sequence of gray shadow istn5 transdosase recoqnition seauence/me). me=mosaic end. 5

34、：人gatgtgtataagagacag3'.注，下划勢分为引物序列，>厂 qnfcal6460531! e3 ralstonia solanacearum gmi100d xegaplasand complete sequence length=2094509features in this part of subject sequence:probab2e signal 二三aasduunoxieal-qqdef domannsscore =261 bits (141), expect = le-66identities = 141/141 (100%)r gaps = 0/

35、141 (0%) strand=plus/minustn5 transposase recognition sequence (me). me二mosaic end. 5 agatgtgtataagagacag3；井. 下廿绪軀令泊引物岸不ila厂 11 slsonxa aolanace&rwn rxpc7for cype xxx effector prorexn,uocapl“ cdsl«enghw4815scexe 363 bxs (196), ebcpect 4e-97id«nciie0 « 199/200 (»»%># g

36、ep * 1/200 (1%) 3xaadoplud/hxnuaque"acaggcttgccaotcagotcatgctcgaccagcagocgccggaacttcagcagcgtootc98sbjut2070aca-gcttoccagtcaggtcatgctcgxccagcaggcgccgoaxcttcagcagcgtogtc2012qixxy158sbj"2011gcgtccggcjicgttctcgaccgccjigatcaatgccggcgaacgcacocatcgccatgcto1952(xxry159tcgtacjukcgcatcttccagtccttcgt

37、ccgacaocccotaccactgctgcaagaaataa218sbjc1951tcgtacaacgcatcttccagtccttcgtccgxcagcccgtacckctgctgcaagaaxtaa1892qi>ery219atocgcagcatcctctgcag 23618913讨论带格式的带格式的：字体:arial narrow貝带格灵的一(带格式的t7t冰带格式的f带格式的,带格式的atgcgcagcatcctctgcao 1872图艮 清枯雷尔氏菌突变菌株fjatt邂揷入位点侧翼序列的blast结果 f®.8 blast result of the flank

38、of insertion of avirulent mutant fjatt583带格式的：字体：.arial narrow带格式的青枯雷尔氏菌尚落形态我现出种的多态性，种的分类方法也呈现多样性，如不同的生理小种巴、带格式的生化卿叫、血斜脂肪酸魏啤和致病型警1 等。致病性检测将青枯宙尔氏菌分为强致病/ 力菌株和，无致病力菌株期？类。|就，青枯雷尔氏菌菌株致病力检测的二般方法为l依据青枯雷尔 氏菌侵入植株后，观察植株的发病情况，并参照病害严重度的分级标准門世行分类叫该方法的缺 点是复杂费本实验室建立了二和噺的分类致病性检测方法,即弱化指数沟咚 翁化指数与青枯 雷尔氏菌的致病性存在特定的相关性，弱

39、化指数0.60时，菌株冋接发病率为100%,弱化指数0.80, 菌株回接发病率为啤。利用弱化指数对青枯雷尔氏菌的强弱致病力进行分类，方法简单方便,易 操作°通过弱化指数的测运，结合菌落形态观察，可以确足依据弱化拒数法对首枯需尔氏苗突变体 副心磁砂网砌曲扮类l青枯雷尔氏菌fjat4582和fjat-t583 缈无致病力菌株。，无致病力菌株右淸枯病的牛物防治屮起君乖耍作用，儿获得途径多样,较直接的方法就足分离 白发突变株h黑,j耳工作疑较大，而fl较肓目。随着生物技术的发展，人们选择使用基因工程，氐获得 无致病力菌桃,如利用愆km interposon插入hrp因获得/)咗突变体以及利川

40、pm075:tn5转座/插入 fop。基因获得胞外蛋门输出功能丧失的突变株等7$理。木实验室采用tn5转座子插入的方法构建工 青枯雷尔氏菌突变体咋，tn5,转座子插入只令随机性，突变株较易获得，并且突变株具佇较高的遗传 稳定性径 讶枯雷尔氏曲突变体fjatm582和fjat-t583即却碍随机播入构建的无致病力菌株。根据青枯雷尔氏菌插入基因的ncbi比对发现，fjat-t582的插入丛因为卉枯雷怎兵菌丹人口582 禺卡utaliveaguaaytet&phosphgdiestefase+mrjtative diguanylate phosphodiesterase,该刚是 eal 信号

41、转导的结构域。eal在细菌中普遍存在陶独电，用于环状双鸟昔酸(gyelig-cxc!ic_dimericgmp)降 解【初到。i2有研究我明，青枯雷尔氏菌厂putative diguanylate phosphodiesterase因的缺失将影响细歯的 行为，包括生物膜的形成国誓駕、细胞的生长国型、菌体细胞的运动固马及基因表达的调节等警!。推 u青枯雷尔氏菌fjat-t582因putative diguanylate phosphodiesterase因发生的插入突变,阻断具基因表 达，致便其致病力发生改变。tf枯雷尔氏菌fjat4583是编码 type 111 effector prolei

42、n基|孔的突变，转座了于 type hl effector protein冲的2074邮处jfutbpe iii effector protein是青枯雷尔氏菌致病力相关蛋门陋冯 多数植物致病菌 一貝带格式的亍均是通过tvoe-lj/pe泌系统的毒力效应蛋白侵入植牧严理，瞬女匹iii效应蛋白的缺失将导致致病菌的致病力下降，因此突变株fjat-t583表现出无致病力的特征的主要原因是其 me iii effectorprotein的插入突变。本实验室构架的青枯甫尔氏菌突变休库中存在较多的无致病力突变株，因血亦 后续研究中还将继续进行插入位点的检测及致病件分析，以期为作物青枯病的丫物防治提供依据.

43、带格式的齐祐：acal narrow参考文献一一带格式的：字体：arial narrow丹 m 刘蜕体孑色护抗苑泊將叫爲慈碼卅注料申另利性研殉沖胡做业科洱加07亍40(報 15534566：2)2誇海陽邦庆逍，卢书文等.番茄宵松病的研究进展j冈艺学执2的山8艸刊:64昶5役厶曲3疗柏也朱疗苛 烤赛陌周涵护l別巍 坤状芽砲杆甬对番茄青枯雷n氏苗致病性的彫嗨j用门人学？眾 007460)57?；沖尔氏胡在杭株体内分布娛其致病刃的异质带格式的：字体:arial narrow,带格式的:万百符号和编号4)3d55'、5-lgvfekgvigh_l7_fafka_s_g_lr_lndued

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