扫描电镜细菌制样方法_第1页
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文档简介

1、细菌样品前处理取液体或固体培养基中培养 20h 左右、旺盛生长的菌体。(1) 收集菌体 : 液体培养基中的菌体 , 可取培养液 8000rpm 离心 35min, 弃上清 , 倒入 2.5%戊二醛固定液 ; 固体培养基上的菌体 , 可在菌落表面滴几滴戊二醛固定液 , 轻刮菌落 (注意不要刮下培养基 ) 。将菌液吸入小离心管 , 离心后换入新鲜戊二醛固定。(2) 固定，脱水按常规方法。2.5%戊二醛，24h t磷酸缓冲液清洗 3 次 1%我酸46h缓 冲液清洗 3次t乙醇梯度脱水，30%,50%,70%,85%,95%各一次,100%乙醇2次,1520min/ 次 乙酸异戊酯置换 2次,20mi

2、n/次(注意：每步均需离心，8000rpm,35min,弃上清，倒入下一种 试剂,滴管来回吸几下 ,打散菌块) 。(3) 临界点干燥：普通定性滤纸裁成 35mm< 18mm的纸条，将长边35mm平均分成3份，对 折成小纸包 , 用订书钉将一端订牢 , 成小口袋状。将离心浓缩后的菌液滴入小纸包 , 立即用钉 书器将另一端钉牢。放入临界点干燥器样品室 , 进行 CO2 临界点干燥。一般每次可同时处理 1020种不同菌样(注意，需用液态C02置换23次)。(4) 离子溅射金 ： 沿两端书钉剪开滤纸包 , 将干燥后粉末状纯菌体倒入平皿 , 轻摇尽量分 散菌体。碳导电胶带一面粘在 1/4 盖玻片上

3、 ,另一面倒扣轻压在菌体粉末上 ,翻正后用镊子或 牙签将菌体轻轻刮薄铺平。离子溅射金后 , 即可进行扫描电镜观察。细菌样品特殊制备方法；1， 固体培养基中的菌体 用镊子夹一小块盖玻片， 轻轻放在旺盛生长的菌体上， 粘附一定的细菌。 然后用双面胶 将此盖玻片贴在棕色瓶瓶盖内壁，在棕色瓶内加入适量1%锇酸，盖上含有样品的瓶盖，熏蒸固定2h以上。然后用双面胶将盖玻片粘在样品台上，喷金，进行扫描电镜观察。2， 液体培养基中的菌体取一定的培养液，8000rpm离心35min，弃上清液，加入 2.5%戊二醛固定2h, pH 7.2磷酸 盐缓冲液清洗， 然后加入蒸馏水稀释， 充分混合后用滴管取混合液一滴于小块盖玻片上， 吸 附2min，用滤纸吸去多余溶液。然后用双面胶将此盖玻片贴在棕色瓶瓶盖内壁，在棕色瓶 内加入适量1%我酸，盖上含有样品的瓶盖，熏蒸固定2h以上。然后用双面胶将盖玻片粘在样品台上，喷金，进行扫描电镜观察。0.2M 磷酸缓冲液的配制： 磷酸二氢钠( Na H2P04 . 2 H 2 0) 磷酸氢二钠( Na2HP04.12H20) 纯水500mLpH调至7.42.94克29克2.5%戊二醛固定液的配制：2

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