药理学实验指导：利尿药对麻醉家兔尿量及尿中钠、氯离子含量的影响

1、实验九利尿药对麻醉家兔尿量及尿中钠、氯离子含量的影响【目的和原理】学习急性利尿的实验方法，观察咲塞米对麻醉兔的利尿作用；学习测定尿液屮钠离了和 氯离子的方法。冰液屮的钠离子与醋酸铀镁试剂作用，被沉淀为醋酸铀镁，然后以亚铁氟化钾和试剂中剩 余的醋酸铀作用，使成形棕红色的业铁亂化铀。尿液屮钠的含最越多，剩余的醋酸铀越少，显色 越淡。反z,钠的含量越少，剩余的醋酸铀越多，则显色越深。故从剩余的醋酸铀量，町间接计 算出钠的含量反应式如下:nacl+3 (u02) (ch3coo) 2+mg (chcoo) 2+chcooh -(u02) ；algna (chcoo) g+hcl2(u02) (ch3c

2、oo)2+k4 (fe(cn)e)(u02) 2 (fe(cn)6)+4ch3c00k 棕红色用硝酸银试剂将尿液屮的氯离了沉淀为氯化银。如硝酸银略有过量，便与倂酸银作用, 成形桔红色的俗酸银。其反应式如下:nacl + agn03 - agcl i +nan032agn0s+k2cr04-* agcro., i +2kn03【实验对象】家兔，152.5 kg一.家兔尿量的测定【实验药品】25%乌拉坦、1%咲塞米【实验器材】兔手术台、量筒、注射器、手术器械【实验方法】1. 水负荷：灌胃给与自來水40 ml/kg,避免灌至气管。2. 麻醉：耳缘缓慢i.v. 25%乌拉坦4 ml/kg,随时观察角膜

3、反射，反射消失即停止注射。3. 手术：背位固定家兔，剪去下腹部被毛，于耻骨联合上方切开皮肤约45 cm,并沿腹 口线剪开肌肉，暴露膀胱，在少血管区作荷包缝合后行膀胱插管，在插管前要将插管里充满 生理盐水。4. 记录每2 min的正常尿量，连续记录10 min。5. 耳缘静脉注射1%咲塞米4 mg/0. 4 ml/kg,记录给药后2、4、6、8、10、12、14、16、 18、20 min的尿量(每2 min的尿量)【实验结果】结果汇总，计算不同吋间尿量的均值，以尿量毫升数为纵坐标，给药后吋 间为横坐标作图。二.尿液中钠离子和氯离子的含量测定测定体液中的钠离子以火焰光度法为最简便可靠，在没有火焰

4、光度计的场合，也可用醋酸 铀镁比色法來进行。测定体液小的氮离子则多用银滴定法。(一)尿中钠离子的醋酸铀镁比色测定法【实验试剂】1. 醋酸铀镁试剂:取醋酸铀(u2(ch3c00)2-2h20)4g.醋酸镁(mg(ch3c00)2 4h20) 15 g. 冰醋酸15ml、加蒸锚水75 ml,加热溶解,并煮沸2分钟。放冷后加蒸锚水至100 ml,再加无 水乙醇至500ml,于冰箱小过夜。除去底层的微量沉淀，将上清液贮存于棕色试剂瓶屮，置冰 箱中备用。2. 1%醋酸溶液(v/v) o3. 10%亚铁鼠化钾溶液。4. 钠标准溶液：当量钠溶液：取氮化钠(a. r.)少许置于烧杯屮，放置110120

5、76;c烘箱内4小时, 取出后置于干燥器内待冷，精密称取5.845 g置于100 ml容最瓶内，加蒸钿水至刻度。%1 150 meq/l钠标准液：准确吸取当量钠溶液15.0 ml,置于100 ml容量瓶内，加蒸锚水 至刻度。%1 250 meq/l钠标准液:准确吸取当量钠溶液25. 0 ml,置于100 ml容量瓶内, 加蒸锚水至刻度。%1 200 meq/l钠标准液：准确吸取当量钠溶液20. 0 ml,置于100ml容量瓶中,加蒸锚水至刻度。【实验器材】光电比色计、冰箱、离心机、烧杯、试管、吸管。【实验方法】1收集各实验组相应时间内的丿求液，分别合并混匀，测量总量。分别吸取各组尿液5眉，加入

6、蛍氧化钙0.2g,摇匀，放置15分钟，过滤，以除去磷酸盐类。2.滤过z尿液与等量200 meq/l钠标准液混合吸取0. 1 ml,按表5.1操作。表1尿钠测定快速比色法操作步骤步骤管别空白管(ml)标准管(ml)测定管(ml)与200meq/饰标准液混合的尿液0. 1150meq/l标准液0. 1250meq/l标准液0. 1酷酸铀镁试剂5.05.05.0以玻棒充分搅拌，使生沉淀，试管加塞,置冰箱中10分钟，离心沉淀。分别吸取上清液于另外三只试管中0.20.20.21%醋酸溶液8.08.0&010%亚铁亂化钾溶液0.40.40.4混匀后，10 min内用520 nm或绿色滤光片光电比色

7、，以250 meq/l钠标准管作空白管，校正光密度到0点，读取标准管(150 mq/l钠溶液)及测定管的读数。计算cn 测定管光密度 inn 1aa c nt + c /t250 -_x 10() 100 x 2 = na meq /ll 标准管光密度4na meq/l x 2. 3=na+ mg/100 ml【注意事项】1. 醋酸铀镁的加入量必须准确，否则将影响实验结果。2. 操作时试管放入冰箱及离心沉淀时，均需加塞，以免试剂中乙醇浓度变化而影响结果。3. 醋酸铀镁试剂中所含醇的浓度必须为80%(v/v),否则影响钠的沉淀。4. 尿中钾的浓度较高，与醋酸铀镁试剂作用后能与钠共同发牛沉淀。但如

8、将丿求钠浓度提 高至150meq/l以上时，则钠的t扰就不明显，因此宜在丿求液小事先加入适当浓度钠标准液, 然麻测定之。测定尿液与200 meq/l钠标准液作等量混合，标准液与尿液均同时被稀释2倍， 故须将测定结果扣除100 meq/l后冉乘以2。5. 本法测定尿钠z浓度范周为0250 meq/lo如尿钠过高，加入钠标准液后测定结果超 过250 meq/l吋，则应不加钠标准液重行测定，或将尿液稀释后测定。(二)尿中氯离子的银滴定法【实验试剂】1.硝酸银标准液(每1 ml相当于氯化纳1 mg或氯离子0. 606 mg):准确称取纯硝酸银2. 063 g,置于1000 ml容量瓶内,加蒸锚水少许使其溶解，再以蒸镭水稀释至刻度。2. 20%铅酸钾溶液：称取銘酸钾(k2cro.,)20 g,用蒸锢水溶解并稀释至100 ml.【实验器材】 滴定管、吸管、自瓷蒸发皿【实验方法】 用吸管准确吸取尿