藿芪益肾颗粒剂醇提工艺优选探究

1、矍英益肾颗粒剂醇提工艺优选探究摘 要：目的：建立翟竄益肾颗粒剂的科学、合理的醇提最 佳工艺。方法：采用正交试验法，以黄英甲昔提取量和出膏量 为考察指标，进行了综合评分，确定其最佳工艺。结果：采用 75%乙醇为溶媒，提取3次,溶媒为10、8、8倍量，每次2h； 结论:本工艺稳定，重复性良好，适合工业化大生产。关键词：蕾茯益肾颗粒;提取工艺；正交试验中图分类号：r284. 2文献标识码：a文章编 号:1673-7717(2010)01-0190-03study on the optimization of ethanol extraction techniques for huoqi yishen

2、 granulesgu libyan, kang tingguo, chen cuiying,yuan zimin, cheng lan(school of pharmacy, liaoning university of traditionalchinesemedicine,dalian116600,liaoning,china)abstract：objective： to determine the extraction technology of huoqi yishen granules with ethanol.methods： the orthogonal design was u

3、sed to optimize the factors influencing the extractive technique with the content of astragaloside iv and theyield of extracts as comprehensive evaluation indexresuits： the best extraction condition was： extracted with 10, 8, 8times amount of ethanol, 2 hours for 3times with 75% ethanol. conclusion：

4、 this extraction method is st able and feasible, and is suitable for industrialization.key words：huoqi yishen granules； extraction； orthogonal design翟英益肾颗粒原方为多年临床应用的汤剂，具有补益脾 胃，益气固精的功效。用于脾胃气虚证急，慢性肾炎蛋白尿。 疗效显著,但临床应用、携带均不方便。为便于临床应用，拟 研制开发为疗效好、服用方便的颗粒剂。该方由黄竄、淫羊翟、丹参、当归等药材组成。为优选 其科学、合理的提取工艺，根据药物性质和化学成分，拟对处

5、 方中黄英、丹参、杜仲采用醇提取，提取后的药渣并入其余 药材再进行水提取，以保留全成分。本文主要对其醇提工艺 进行优化研究，以确定翟英益肾颗粒剂最佳醇提取工艺。1仪器与试药1.1仪器lc-10ap高效液相色谱仪（大连江申）；sedex lt-elsd model 75检测器（sede-re,法国）；空气泵xwk-iii（天津市分 析仪器厂）;js3050色谱工作站（江申，中国）;kq3200超声波 清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。1. 2试药黄竄、丹参、杜仲药材均符合药典规定品种；乙睛（色谱 纯），水重蒸馆水，其它均为分析纯；黄英甲昔对照品（购于中 国药品生物制品检定所，批号：781-940

6、4） o2方法与结果2.1醇提工艺的正交试验设计根据黄英、丹参、杜仲中所含的化学性质及参考有关文 献,确定乙醇浓度，乙醇用量，提取时间，提取次数4个影响有 效成分提取量的因素，选择了 3个水平进行试验考察，采用正 交设计试验l9 （34）表进行试验，因素水平见表1,试验设 计及结果见表2。2. 2实验方法及考察指标按处方称取黄英、丹参、杜仲，共计9份，每份重量为34g。 根据正交试验表2安排实验，进行回流提取，得乙醇提取液, 每份提取液加所用溶媒定容至1000mlo以黄英甲昔提取量和 出膏率为考察指标，进行综合评分。黄英甲昔提取总量综合 评分加权值为0. 6,出膏率综合评分加权值为0.4,二者

7、之和 为综合评分,作为考察指标，结果列入表2。2. 3黄英甲昔含量测定方法2. 3. 1 hplc 色谱条件 zorbax eclipse xdb-c 18 柱 （4. 6mmx150mm,5um），流动相乙睛-水（32 : 68）,室温；漂移 管温度 40°c,载气压力 3. 5bar（lbar=100kpa）o2. 3.2对照品溶液的制备黄茂甲昔对照品经五氧化二磷 低温真空24h后，精密称取适量，加甲醇制成每毫升含 0. 526mg的对照品溶液。2. 3.3供试品溶液制备 将各项试验的醇提取液加提取 溶媒定容至loooml,摇匀，精密量取150ml,回收乙醇至loml, 加甲醇4

8、0ml,振摇，放置lh,滤过,滤渣用10ml甲醇冲洗，洗 液并入滤液中，水浴蒸干。残渣加蒸馆水10ml,微热溶解，置 分液漏斗中，用水饱和正丁醇提取3次（每次20ml）合并正丁 醇液，正丁醇液用氨试液洗涤2次（每次20ml）,弃去氨液，正 丁醇液水浴蒸干，用水5ml微热溶解，放冷，通过d101型大 孔吸附树脂柱（内径1. 5cm,长12cm）,以水50ml洗脱，弃去水 液，用40%乙醇30ml洗脱，弃去40%乙醇洗脱液，再用70%乙醇 50ml洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至 2ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜滤过，取续 滤液作为供试品溶液。2. 3.4空白干扰

9、试验取实验用量的丹参、杜仲药材按上 述供试品溶液制备方法及测定方法试验，结果表明其它药材 成分对黄英甲昔含量测定无干扰，色谱图见图13。2. 3.5线性关系考察分别精密吸取0. 526mg/ml对照品 溶液2. 5,5. 0,10. 0,15. 0,20. oul,注入高效液相色谱仪，以 进样量的自然对数值为横坐标（x）,峰面积的自然对数值为 纵坐标(y),进行线性回归，得回归方程y=l. 54x+5. 7,相关 系数r二0. 999 7,黄茯甲昔的进样量在1. 31510. 52 p g范围 内呈良好的线性关系。2. 3. 6精密度试验精密吸取同一供试品溶液10 u l,注入 高效液相色谱仪

10、，连续进样5次，测定色谱峰峰面积，结果表 明，精密度良好,rsd为1.7%(n=5)o2. 3. 7重复性试验精密量取同一批样品各5份，分别按供 试品溶液制备方法操作，精密吸取各供试品溶液10ul,分别 注入高效液相色谱仪，测定。结果样品平均含量为 6. 43 u g/ml, rsd 为 2. 7%(n二5)。2. 3. 8稳定性试验精密吸取同一供试品溶液，按0、2、4、6、8h时间间隔，分别进样，测定色谱峰面积，结果表明，样溶液在8h内保持稳定,rsd为1.6%(n=5)o2. 3. 9回收率试验精密量取已知含量的样品液，准确加入黄英甲昔对照品一定量，照试品溶液的制备方法操作，用 所建立的方

11、法进行测定，计算回收率。结果平均回收率：97. 2%,rsd 为 2. 7%o2. 3. 10样品含量测定精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10 p l,按上述色谱条件，注入高效液相色谱仪，进行测定，结果见表2o2. 4出膏率测定精密量取50ml定容后的醇提液，于已干燥至恒重的蒸发 皿中，水浴蒸干后于105£干燥3h,取出，立即放入干燥器中 冷却0. 5h,称重，计算出膏率，结果见表2o2. 5结论从试验结果的方差分析表3得出,d因素对提取工艺的影 响有显著性，其它因素影响均不显著。从直观分析中可看出, 影响本实验的主要因素依次是d>c>a>b,故最佳条件为 a2blc3d3o即以75%乙醇为溶媒，提取3次,溶媒为10、8、8 倍量，每次2h。2. 6提取工艺的验证为确证该工艺的优劣和稳定性，考虑到实验误差和实际 生产，在上述正交试验的基础上，按筛选的最佳工艺条件，进 行了重复验证实验。投料量同正交试验，按正交试验结果重 复3次，结果见表4。由表4可知，验证结果表明该工艺基本稳定可靠。3讨论(1) 醇提正交试验时曾考虑以丹参酮iia为考察指标，但 实验中丹参酮iia受热不稳定，提取时易破坏,所以以黄英甲 昔提取量作为指标性成分