细胞周期调控-文档资料

1、1细胞周期调控细胞周期调控cell cycle regulation2 细胞增殖周期细胞增殖周期，简称，简称细胞周期细胞周期(cell cycle)(cell cycle)，是指连续分裂的细胞从上一次有丝分裂结束开是指连续分裂的细胞从上一次有丝分裂结束开始到下一次有丝分裂结束为止所经历的整个序始到下一次有丝分裂结束为止所经历的整个序列过程。这个过程所需要的时间称为细胞周期列过程。这个过程所需要的时间称为细胞周期时间。时间。3细细胞胞周周期期4 细胞周期周而复始地进行着，这种周期性细胞周期周而复始地进行着，这种周期性的重复过程受到严格地控制，使得不同的细胞的重复过程受到严格地控制，使得不同的细胞

2、周期事件在空间和时间上相互协调。周期事件在空间和时间上相互协调。5l 研究背景研究背景l 细胞周期的检验点细胞周期的检验点l 细胞周期蛋白细胞周期蛋白l CDKCDK及其调控及其调控l 生长因子、癌基因和抑癌基因生长因子、癌基因和抑癌基因l 细胞周期与肿瘤细胞周期与肿瘤内容提要内容提要6一、研究背景一、研究背景 1.MPF1.MPF19601960年，年，MasuiMasui和和MarkertMarkert研究爪蟾卵母细胞，提出研究爪蟾卵母细胞，提出了成熟卵母细胞中存在一种促成熟因子（了成熟卵母细胞中存在一种促成熟因子（maturation maturation promoting facto

3、rpromoting factor，MPFMPF）。）。 RaoRao和和Johnson(1970Johnson(1970、19721972、1974) 1974) 以以HelaHela细胞为材细胞为材料，发现料，发现M M期细胞具有某种促进间期细胞进行分裂的因子，期细胞具有某种促进间期细胞进行分裂的因子，即促细胞分裂因子即促细胞分裂因子(mitosis- promoting factor (mitosis- promoting factor ，MPF)MPF)。 7 2.cdc2.cdc基因基因Leland HartwellLeland Hartwell、 Paul NursePaul Nu

4、rse分别以不同的酵母为分别以不同的酵母为实验材料，发现了许多与细胞分裂有关的基因实验材料，发现了许多与细胞分裂有关的基因(cell (cell division cycle genedivision cycle gene，CDC)CDC)。如。如芽殖酵母的芽殖酵母的cdc28cdc28、裂殖裂殖酵母酵母cdc2cdc2基因。基因。 进一步研究发现：进一步研究发现：P34P34cdc2cdc2与与P34P34cdc28cdc28是同源物，二者本是同源物，二者本身并不具有激酶活性，只有当其与有关蛋白结合后，其激身并不具有激酶活性，只有当其与有关蛋白结合后，其激酶活性才能够表现出来。例如：酶活性才

5、能够表现出来。例如：P34P34cdc2cdc2必须与另一种蛋白必须与另一种蛋白P56P56cdc13cdc13结合后才具有激酶活性。结合后才具有激酶活性。 8 3.cyclin 3.cyclin 19831983年年Timothy HuntTimothy Hunt首次发现海胆卵受精后，在其卵首次发现海胆卵受精后，在其卵裂过程中两种蛋白质的含量随细胞周期剧烈振荡，在每一裂过程中两种蛋白质的含量随细胞周期剧烈振荡，在每一轮间期开始合成，轮间期开始合成，G G2 2/M/M时达到高峰，时达到高峰，M M结束后突然消失，在结束后突然消失，在下一个周期中又重复这一消长现象，故命名为周期素或周下一个周期

6、中又重复这一消长现象，故命名为周期素或周期蛋白期蛋白(cyclin)(cyclin)。随后。随后cyclincyclin很快被分离和克隆出来，证很快被分离和克隆出来，证明其广泛存在于从酵母到人类等各种真核生物中，而且在明其广泛存在于从酵母到人类等各种真核生物中，而且在功能上存在互补性。功能上存在互补性。9 4. 4. MPF P34cdc2Cyclin ？19881988年年M. J. Lohka M. J. Lohka 纯化了爪蟾的纯化了爪蟾的MPFMPF，经鉴定由，经鉴定由34KD34KD和和45KD45KD两种蛋白组成，二者结合可使多种蛋白质两种蛋白组成，二者结合可使多种蛋白质磷酸化。磷

7、酸化。 1990 Paul Nurse1990 Paul Nurse进一步的实验证明进一步的实验证明P P3434实际上是实际上是P34P34cdc2cdc2的同源物，的同源物，P P4545是是cyclinBcyclinB的同源物，而且，对于的同源物，而且，对于P34P34cdc2cdc2的活性而言，的活性而言，cyclincyclin是必需的。从而将细胞周是必需的。从而将细胞周期三个领域的研究联系在一起。期三个领域的研究联系在一起。MPF = P34cdc2(CDK1)+Cyclin B（催化亚单位）（催化亚单位）（调节亚单位）（调节亚单位）10The Nobel Prize in Phy

8、siology or Medicine 2001for their discoveries of key regulators of the cell cycleLeland Hartwell Timothy Hunt Paul Nurse 11二、细胞周期的检验点二、细胞周期的检验点19891989年，年，HartwellHartwell通过构建酵母细胞突变模型证实通过构建酵母细胞突变模型证实了细胞周期检验点（了细胞周期检验点（check pointcheck point）的存在，并首次提）的存在，并首次提出检验点的概念。细胞周期的运行，是在一系列检验点出检验点的概念。细胞周期的运行，是在一

9、系列检验点的严格检控下进行的，它保证前一个事件完成之后，才的严格检控下进行的，它保证前一个事件完成之后，才启动下一个事件，检查点是细胞的错误监测机制。启动下一个事件，检查点是细胞的错误监测机制。12n G G1 1/S/S检验点：检验点：在酵母中称在酵母中称startstart点，在哺乳动物点，在哺乳动物中称中称R R点点(restriction point)(restriction point)，控制细胞由静止，控制细胞由静止状态的状态的G G1 1进入进入DNADNA合成期，相关的事件包括：合成期，相关的事件包括：DNADNA是否损伤？细胞外环境是否适宜？细胞体积是否是否损伤？细胞外环境是

10、否适宜？细胞体积是否足够大？足够大？ n S S期检验点：期检验点：DNADNA复制是否完成？复制是否完成？13n G G2 2/M/M检验点：检验点：是决定细胞一分为二的控制点，是决定细胞一分为二的控制点，相关的事件包括：相关的事件包括： 所有所有DNADNA都正确复制了吗？都正确复制了吗？DNADNA是否有损伤？细胞体积是否足够大？是否有损伤？细胞体积是否足够大？n 中中- -后期检验点（纺锤体组装检验点）：后期检验点（纺锤体组装检验点）：所有所有染色体都排列在纺锤体上了吗？任何一个着染色体都排列在纺锤体上了吗？任何一个着丝点没有正确连接到纺锤体上，引起细胞周丝点没有正确连接到纺锤体上，引

11、起细胞周期中断。期中断。14三、细胞周期蛋白三、细胞周期蛋白cyclin cyclin 的种类繁多，目前从芽殖酵母、裂的种类繁多，目前从芽殖酵母、裂殖酵母和各类动物中分离出的周期蛋白有殖酵母和各类动物中分离出的周期蛋白有3030余种，余种，在脊椎动物中为在脊椎动物中为A A1-21-2、B B1-31-3 、C C、 D D1-31-3、E E1-21-2、F F、G G、H H等。分别参与细胞周期中不同时相的调节。等。分别参与细胞周期中不同时相的调节。分为分为G G1 1型、型、G G1 1/S/S型型S S型和型和M M型型4 4类。类。15人类细胞周期蛋白线性结构示意图人类细胞周期蛋白线

12、性结构示意图实心方框代表实心方框代表“cyclin box ”cyclin box ”，方框代表方框代表“destruction box”destruction box”圆形框代表圆形框代表PESTPEST序列序列16cyclin boxcyclin box：各类周期蛋白均含有一段约各类周期蛋白均含有一段约100100个氨基酸的保守序列，称为周期蛋白盒个氨基酸的保守序列，称为周期蛋白盒(cyclin box)(cyclin box)，介导周期蛋白与，介导周期蛋白与CDK(cyclindependent kinase)CDK(cyclindependent kinase)结合。结合。 Cycli

13、nCyclin也含有降解盒（也含有降解盒（destruction boxdestruction box）或或PESTPEST（脯氨酸谷氨酸丝氨酸苏氨酸）（脯氨酸谷氨酸丝氨酸苏氨酸）序列，它可以通过定时降解或恒定地迅速周转序列，它可以通过定时降解或恒定地迅速周转来调节这些蛋白质的水平，起着来调节这些蛋白质的水平，起着CDKCDK的调节亚的调节亚基的作用。基的作用。17n G G1 1期期：细胞在生长因子的刺激下，细胞在生长因子的刺激下，G G1 1期期cyclin cyclin D D表达，并与表达，并与CDK4CDK4、CDK6CDK6结合，使下游的蛋白结合，使下游的蛋白质如质如RbRb磷酸化

14、，磷酸化的磷酸化，磷酸化的RbRb释放出转录因子释放出转录因子E2FE2F，促进许多基因的转录。，促进许多基因的转录。 18Cyclin DCyclin D与与CDKCDK结合使结合使RbRb释放结合的转录因子释放结合的转录因子E2F E2F 19n G G1 1/S/S期期：cyclinEcyclinE与与CDK2CDK2结合，促进细胞通过结合，促进细胞通过G G1 1/S/S限制点而进入限制点而进入S S期。向细胞内注射期。向细胞内注射CyclinECyclinE的的抗体能使细胞停滞于抗体能使细胞停滞于G G1 1期，说明细胞进入期，说明细胞进入S S期需要期需要CyclinECyclin

15、E的参与。的参与。n S S期期：将将CyclinACyclinA的抗体注射到细胞内，发现的抗体注射到细胞内，发现 能抑制细胞的能抑制细胞的DNADNA合成，推测合成，推测CyclinACyclinA是是DNADNA复复 制所必需的。制所必需的。20n G G2 2/M/M期期：cyclinAcyclinA、cyclinBcyclinB与与CDK1CDK1结合，结合，CDK1CDK1使使底物蛋白磷酸化底物蛋白磷酸化, ,如将组蛋白如将组蛋白H H1 1磷酸化导致染色体磷酸化导致染色体凝缩，核纤层蛋白磷酸化使核膜解体等下游细胞凝缩，核纤层蛋白磷酸化使核膜解体等下游细胞周期事件。周期事件。 21n

16、 M M期期：在分裂中期当在分裂中期当MPFMPF活性达到最高时，通过一活性达到最高时，通过一种未知的途径，激活后期促进因子种未知的途径，激活后期促进因子APC APC (anaphase promoting complex) (anaphase promoting complex) ，负责将泛素，负责将泛素连接在连接在cyclinBcyclinB上，导致上，导致cyclinBcyclinB被蛋白酶体被蛋白酶体（proteasomeproteasome）降解，完成一个细胞周期。）降解，完成一个细胞周期。22哺乳动物细胞周期中各时相不同哺乳动物细胞周期中各时相不同cyclincyclin的作用的

17、作用 23四、四、CDKCDK及其调控及其调控 CDKCDK即细胞周期蛋白依赖性激酶即细胞周期蛋白依赖性激酶 (cyclindependent kinase,CDK)(cyclindependent kinase,CDK)，控制着细，控制着细胞周期各期之间的顺序转换。胞周期各期之间的顺序转换。CDKCDK是一组相关联是一组相关联的的Ser/ThrSer/Thr蛋白激酶，蛋白激酶， 酵母中细胞周期的进程酵母中细胞周期的进程主要由单一的主要由单一的CDKCDK（P34P34cdc2/ cdc28cdc2/ cdc28）所控制。多细）所控制。多细胞生物中，细胞周期各期之间的转换需要不同胞生物中，细胞

18、周期各期之间的转换需要不同的的CDKCDK。 24脊椎动物的脊椎动物的CDKCDK CDKCDK结合的相应结合的相应cyclin cyclin 作用的细胞周期作用的细胞周期 CDK1CDK1CDK2CDK2CDK3CDK3CDK4CDK4CDK5CDK5CDK6CDK6CDK7 CDK7 CyclinA,BCyclinA,BCyclinACyclinACyclinD1,D2,D3CyclinD1,D2,D3CyclinECyclinECyclinD1,D2,D3CyclinD1,D2,D3P35P35* *, , CyclinD1,D2,D3CyclinD1,D2,D3CyclinD1Cycl

19、inD1CyclinH, P36CyclinH, P36* *G G2 2/M/M转换；转换； M M早期早期S S期期G G1 1期期G G1 1/S /S 转换转换G G1 1期期G G0 0/G/G1 1转换、转换、G G1 1期期神经纤维的磷酸化、神经纤维的磷酸化、G G1 1期期G G0 0/G/G1 1转换转换活化活化CDKCDK* P35P35，P36P36的结构与细胞周期蛋白无相似性的结构与细胞周期蛋白无相似性 25 1 1CyclinCyclin的结合是的结合是CDKCDK激活的第一步激活的第一步 CDKCDK活性的最初调节者是活性的最初调节者是cyclincyclin亚单位

20、。亚单位。 CyclinCyclin与相应的与相应的CDKCDK结合后，引起结合后，引起CDKCDK空间构象改空间构象改变，暴露其催化亚基。各种细胞周期蛋白程序化变，暴露其催化亚基。各种细胞周期蛋白程序化的合成和降解保证各对应的合成和降解保证各对应CDKCDK适时的活化，维持适时的活化，维持细胞周期的正确时序。细胞周期的正确时序。26 2 2CDKCDK的磷酸化与去磷酸化的磷酸化与去磷酸化 以以P34P34cdc2 cdc2 (CDK1)(CDK1)为例，如果对为例，如果对P34P34cdc2cdc2磷酸化磷酸化作用位点不同，则对该酶的活性分别产生正向和作用位点不同，则对该酶的活性分别产生正向

21、和负向的控制。完整的负向的控制。完整的P34P34cdc2cdc2-cyclin-cyclin复合物需要复合物需要磷酸化才能被激活，驱动细胞进入有丝分裂。磷酸化才能被激活，驱动细胞进入有丝分裂。27P34P34c d c 2c d c 2的的Thr14Thr14和和Tyr15Tyr15的的磷酸化磷酸化引起引起P34P34cdc2cdc2-cyclin-cyclin复合物的失活，复合物的失活，WeelWeel是催化是催化Tyr15Tyr15磷酸化的激酶，另有一个是磷酸化的激酶，另有一个是Thr14Thr14磷酸化的激酶；磷酸化的激酶；催化催化Thr14Thr14及及Tyr15 Tyr15 脱磷酸

22、化的蛋白磷酸酶为双脱磷酸化的蛋白磷酸酶为双特异性磷酸酶特异性磷酸酶Cdc25Cdc25蛋白。蛋白。28 P34P34cdc2cdc2的的Thr161Thr161的的磷酸化磷酸化是酶的活性所必需是酶的活性所必需的。的。CDKsCDKs活化激酶活化激酶CAKCAK（CDKs activiting kinaseCDKs activiting kinase）应答应答Thr161Thr161的磷酸化，这是另一种蛋白激酶的磷酸化，这是另一种蛋白激酶CDK7-CDK7-Cyclin HCyclin H复合物。当磷酸酶复合物。当磷酸酶-1-1将此位点的磷酸水将此位点的磷酸水解，解，P34P34cdc2cdc2

23、又失去激酶活性。又失去激酶活性。29 3 3CDKCDK抑制剂的作用抑制剂的作用除了磷酸化去磷酸化可以调节除了磷酸化去磷酸化可以调节MPFMPF活性外，活性外，另有一类另有一类CDKCDK抑制因子（抑制因子（CDC kinase CDC kinase inhibitor,CKIinhibitor,CKI）可与）可与CDKCDK结合抑制其活性。结合抑制其活性。 30（1 1）Ink4(Inhibitor of cdk 4)Ink4(Inhibitor of cdk 4) 如如P16P16ink4aink4a、P15P15ink4bink4b、P18P18ink4cink4c、P19P19ink4

24、dink4d，专，专一地与一地与CDK4CDK4、CDK6CDK6结合，阻止结合，阻止CDKCDK和和cyclinDcyclinD的结的结合。使细胞周期不能从合。使细胞周期不能从G G1 1期的调控点进入到下一期的调控点进入到下一个时相。个时相。31（2 2）Cip/KipCip/Kip 包括包括P21P21cip1cip1 (cyclin inhibition protein (cyclin inhibition protein 1)1)、P27P27kip1kip1(kinase inhibition protein 1)(kinase inhibition protein 1)、P57P

25、57kip2kip2等，能与多种等，能与多种cyclin - CDKcyclin - CDK复合物包括复合物包括cyclinECDK2cyclinECDK2、cyclinDCDK6cyclinDCDK6、cyclinDCDK4cyclinDCDK4结合，抑制结合，抑制cyclin - CDKcyclin - CDK复合物的复合物的蛋白激酶活性，使一些细胞增殖所需要的蛋白质蛋白激酶活性，使一些细胞增殖所需要的蛋白质磷酸化受阻，细胞停留在磷酸化受阻，细胞停留在G G1 1期。期。32此外此外P21P21cip1cip1还可与还可与DNADNA聚合酶聚合酶亚单位亚单位PCNAPCNA (prolif

26、erating cell nuclear antigen, (proliferating cell nuclear antigen, PCNA )PCNA )相互作用，相互作用， 抑制抑制DNADNA复制，但不影响复制，但不影响DNADNA修复。修复。33CDK1CDK1的激活需要的激活需要Thr14Thr14和和Tyr15Tyr15去磷酸化和去磷酸化和Tyr161Tyr161的磷酸化的磷酸化 34 五、生长因子、癌基因和抑癌基因五、生长因子、癌基因和抑癌基因1 1生长因子生长因子 生长因子是促细胞周期运行的重要因子。生长因子是促细胞周期运行的重要因子。RTK-Ras-RTK-Ras-MAPK

27、MAPK信号传递途径是细胞外的信号传递到细胞核内最基信号传递途径是细胞外的信号传递到细胞核内最基本的途径。本的途径。 35 2 2癌基因癌基因 原癌基因被激活，其编码蛋白大量表达，这原癌基因被激活，其编码蛋白大量表达，这些蛋白对细胞周期具有促进作用。些蛋白对细胞周期具有促进作用。36 癌基因癌基因 癌蛋白癌蛋白种类种类来源来源存在存在功能功能类型类型1：生长因子：生长因子sis逆转录病毒逆转录病毒分泌分泌生长因子（生长因子（PDGF)类型类型2：生长因子受体：生长因子受体erbB逆转录病毒逆转录病毒膜膜表皮生长因子（表皮生长因子（EGF)受体受体fms逆转录病毒逆转录病毒膜膜集落刺激因子集落刺

28、激因子1（CSF-1)受体受体trk肿瘤肿瘤膜膜神经生长因子（神经生长因子（NGF)受体受体类型类型3：细胞内信号蛋白：细胞内信号蛋白Src逆转录病毒逆转录病毒细胞质细胞质酪氨酸激酶酪氨酸激酶Raf逆转录病毒逆转录病毒细胞质细胞质丝氨酸激酶丝氨酸激酶Ras逆转录病毒、肿瘤逆转录病毒、肿瘤细胞质细胞质GTP/GDP结合蛋白结合蛋白类型类型4：核转录因子：核转录因子Jun 、Fos逆转录病毒逆转录病毒核核转录因子（转录因子（AP-1)Myc逆转录病毒、肿瘤逆转录病毒、肿瘤核核DNA结合蛋白结合蛋白erbA逆转录病毒逆转录病毒核核类固醇受体家族成员类固醇受体家族成员癌基因的主要类型及其表达产物癌基因

29、的主要类型及其表达产物37 3 3抑癌基因抑癌基因 抑癌基因可抑制细胞周期于静止期，并使抑癌基因可抑制细胞周期于静止期，并使DNADNA复制不完全或损伤的细胞不能进入分裂期，复制不完全或损伤的细胞不能进入分裂期，避免细胞的癌变。避免细胞的癌变。 38（1 1）P53P53一般情况下，细胞中很少有一般情况下，细胞中很少有P53P53蛋白。蛋白。DNADNA损伤会引起损伤会引起P53P53蛋白浓度和活性的提高。蛋白浓度和活性的提高。P53P53蛋白可同蛋白可同P21P21基因调节区结合，激活基因调节区结合，激活P21P21基因转录。基因转录。使细胞停滞在使细胞停滞在G1G1期的调控点处不能进入期的

30、调控点处不能进入S S期。这期。这样，即可有足够的时间修复样，即可有足够的时间修复DNADNA。 3940 P53P53蛋白可促进蛋白可促进GADD45GADD45基因（基因（growth growth arrest and DNA damage inducible genearrest and DNA damage inducible gene）表达）表达生成生成GADD45GADD45蛋白，后者与蛋白，后者与CDKCDK及及PCNAPCNA形成的复合形成的复合物，参与物，参与DNADNA损伤的修复。损伤的修复。 当当DNADNA损伤不能修复时，损伤不能修复时，p53p53基因的过量表达基因

31、的过量表达导致导致P34P34cdc2cdc2的过早激活，结果使核膜破裂，引起的过早激活，结果使核膜破裂，引起细胞凋亡。细胞凋亡。41（2 2）RbRbRbRb基因位于人染色体基因位于人染色体13q1413q14，由，由2727个外个外显子构成，分布在总长显子构成，分布在总长180-200kb180-200kb以上的以上的DNADNA片片段上。段上。RbRb基因转录的基因转录的mRNAmRNA大小为大小为4.7 kb4.7 kb，编码，编码一个分子量为一个分子量为105kD105kD的蛋白质，由的蛋白质，由928928个氨基酸个氨基酸残基构成，定位于细胞核内，是多种残基构成，定位于细胞核内，是

32、多种cyclin-cyclin-CDKCDK的底物，具有多个被磷酸化的位点。的底物，具有多个被磷酸化的位点。42RbRb有高、低磷酸化两种状态。低磷酸化的有高、低磷酸化两种状态。低磷酸化的RbRb蛋白可与一些转录因子如蛋白可与一些转录因子如E2FE2F结合，抑制这些结合，抑制这些转录因子的活性，阻止细胞的生长。而高磷酸化转录因子的活性，阻止细胞的生长。而高磷酸化状态则失去这种功能，使状态则失去这种功能，使E2FE2F游离，进入核内，游离，进入核内，发挥转录活性，促进细胞周期进行。发挥转录活性，促进细胞周期进行。43RbRb在细胞周期内的磷酸化在细胞周期内的磷酸化 44六、细胞周期与肿瘤六、细胞

33、周期与肿瘤肿瘤细胞最显著的特点是生长失控和肿瘤细胞最显著的特点是生长失控和幼稚化（即不分化）。幼稚化（即不分化）。 45（一）肿瘤细胞周期失控的分子基础（一）肿瘤细胞周期失控的分子基础 1 1细胞周期蛋白异常细胞周期蛋白异常 G1cyclinG1cyclin基因突变、重排，使这些基因突变、重排，使这些cyclincyclin异异常表达，从而使细胞通过常表达，从而使细胞通过G1G1期，进入期，进入S S期，细胞期，细胞即自发增殖，出现转化特征。许多人类肿瘤中，即自发增殖，出现转化特征。许多人类肿瘤中，均发现有均发现有cyclin D1cyclin D1基因的扩增。基因的扩增。46B B型肝炎病毒

34、（型肝炎病毒（hepatitis B virus ,HVBhepatitis B virus ,HVB）感染人）感染人体后成为导致肝癌的因素之一，有研究发现，体后成为导致肝癌的因素之一，有研究发现，HVBHVB基因基因组整合入组整合入cyclinAcyclinA基因的一个内含子中，产生异常、过基因的一个内含子中，产生异常、过量表达的转录物。和正常的量表达的转录物。和正常的cyclinAcyclinA相比，它缺少相比，它缺少N N端的端的“destruction box”destruction box”，逃脱了对它的降解，大量异常，逃脱了对它的降解，大量异常的的cyclinAcyclinA刺激细

35、胞增殖。刺激细胞增殖。47 2 2CDKCDK和和CKICKI基因的突变基因的突变 研究中发现肿瘤细胞研究中发现肿瘤细胞CDKCDK的水平一般较高，的水平一般较高，而而CKICKI基因常见纯合性缺失突变，细胞内缺少基因常见纯合性缺失突变，细胞内缺少CKICKI，或，或CKICKI抑制抑制CDKCDK功能的丧失。功能的丧失。 48 3 3抑癌基因突变抑癌基因突变 不少癌细胞中发现不少癌细胞中发现RbRb或或P53P53基因发生了突变，基因发生了突变，使使RbRb失去了阻断失去了阻断mRNAmRNA转录，转录，P53P53失去了使细胞休失去了使细胞休止在止在G G1 1后期的功能，造成细胞周期失控

36、。后期的功能，造成细胞周期失控。 49（二）细胞周期与肿瘤的基因治疗（二）细胞周期与肿瘤的基因治疗 1 1抑制抑制G1G1期期cyclinscyclins的过度表达的过度表达 G1G1期期cyclinscyclins反义核酸，在体外和裸鼠体内都可抑制反义核酸，在体外和裸鼠体内都可抑制肺癌的增殖。反义肺癌的增殖。反义DNADNA可以与基因结合而阻止基因的转录，可以与基因结合而阻止基因的转录，反义的反义的RNARNA可与可与mRNAmRNA结合，而抑制其翻译，都可以达到抑结合，而抑制其翻译，都可以达到抑制肿瘤细胞增殖的目的。制肿瘤细胞增殖的目的。 RNARNA干扰干扰(RNA interferen

37、ce (RNA interference ，RNAi )RNAi )是将双链是将双链RNARNA导入细胞内引起特异基因的导入细胞内引起特异基因的mRNAmRNA降解的一种细胞反应过程。降解的一种细胞反应过程。属于转录后基因沉默的一种。属于转录后基因沉默的一种。50 2 2促使肿瘤细胞表达正常的促使肿瘤细胞表达正常的CKIsCKIs有报道用正常的有报道用正常的P16P16、P21P21、P27P27基因与腺病基因与腺病毒载体重组，将重组的腺病毒导入肿瘤细胞，重毒载体重组，将重组的腺病毒导入肿瘤细胞，重组的腺病毒在肿瘤细胞内表达有功能的组的腺病毒在肿瘤细胞内表达有功能的P16P16、P21P21和

38、和P27P27蛋白，抑制蛋白，抑制CDKsCDKs的活性，使肿瘤细胞停止的活性，使肿瘤细胞停止在在G0G0G1G1，抑制肿瘤细胞增殖。，抑制肿瘤细胞增殖。513 3抑制抑制E E2 2F F的活性的活性把对把对E2FE2F有高度亲和性的双链有高度亲和性的双链DNADNA片段导入细片段导入细胞，该胞，该DNADNA能够结合游离状态的能够结合游离状态的E2FE2F生成一种复合生成一种复合物，复合物中的物，复合物中的E2FE2F不再与有关基因的启动子结不再与有关基因的启动子结合，从而阻断这些基因的表达，抑制细胞增生。合，从而阻断这些基因的表达，抑制细胞增生。52思考题思考题名词：名词：cyclin boxcyclin box、R R点点问答：问答：1.1.简述细胞周期各时相简述细胞周期各时相cyclincyclin的种类及作用。的种类及作用。2.2.简述细胞周期的主要检验点（简述细胞周期的主要检验点（check pointcheck point）及功能。）及功能。 53非洲爪蟾卵