疑血型鉴定中若干问题1

1、疑难血型鉴定中若干问题疑难血型鉴定中若干问题输血前免疫学检测 输血前检测要求做abo血型（正反联合）、rhd抗原鉴定，抗体筛选和交叉配血 。 血型定型是基础 。 目的：准确定型，选择相容血液。 意义：输血安全、有效。 “ “疑难血型疑难血型”的定义的定义 “疑难血型”是指一种血型难以判定的“现象”实质不是一种独立的血型 在临床输血中,只要求查abo,rhd,不要求查其它血型,因此,疑难血型只涉及abo和rhd abo疑难血型一般是因为正,反定型不合而发现的 红细胞血型系统简介红细胞血型系统简介 血型系统：29个血型系统，已检出的抗原超过200个。 血型集合：达不到血型系统命名标准的血型抗原，但

2、在血清学、生化、或遗传学上有相关性。 血型系列：一个高频组（90%），一个低频组（1%）。红细胞血型系统简介红细胞血型系统简介 最具临床意义：abo、rh 重要临床意义：输血安全、器官移植、新生儿溶血病。abo血型临床意义血型临床意义 溶血性输血反应 abo抗体与相应抗原结合后，能够激活补体，导致红细胞在血管内立即被破坏。轻者仅表现为发热、腰背痛、血红蛋白尿或手术野弥漫性渗血。 重者可表现为dic、休克、急性肾衰竭，甚至死亡。abo血型临床意义血型临床意义 新生儿溶血病 器官移植 abo抗原的发育抗原的发育 在胚胎早期a a和b b抗原就开始产生，到出生时，他们比成人的抗原数目要少，大约是成人

3、2550%。 与抗a a和抗b b试剂血清反应比成人弱，18个月后才能充分表现出抗原性。 24岁时，抗原逐步发育成熟，并终生基本保持恒定。abo血型抗体 正常情况下存在于缺少相应抗原的人血清中。 新生儿abo抗体很少；无抗体成人罕见。 自然产生抗体：igm（主要是a和b型）、igg类（主要是o型）。 igm可被唾液中血型物质中和。 o型-抗a,b：识别a和b抗原表位共同的结构部分具有交叉反应性。abo血型系统的独特性质血型系统的独特性质血清中常存在反应很强的抗体，而红细胞上缺乏血清中常存在反应很强的抗体，而红细胞上缺乏相应的抗原。相应的抗原。许多组织细胞上有规律地存在着许多组织细胞上有规律地存

4、在着a、b、h抗原抗原（消化道呼吸道泌尿系统上皮细胞）以及分泌型（消化道呼吸道泌尿系统上皮细胞）以及分泌型人的分泌液（唾液、眼泪、尿液、消化液、胆汁、人的分泌液（唾液、眼泪、尿液、消化液、胆汁、乳液、羊水、卵巢囊肿液、腹水）中存在着乳液、羊水、卵巢囊肿液、腹水）中存在着a、b、h血型血型物质。物质。abo血型的鉴定血型的鉴定 完整的完整的abo定型必须包括定型必须包括正定型正定型和和反定反定型型两种方法，并互相核对其结果是否一致。两种方法，并互相核对其结果是否一致。 正定型正定型 用已知型特异性的抗体试剂检查用已知型特异性的抗体试剂检查被检红细胞抗原。试剂血清常规用抗被检红细胞抗原。试剂血清常

5、规用抗a、抗抗b两种标准血清。两种标准血清。 反定型反定型 用已知血型的红细胞检查血清中用已知血型的红细胞检查血清中的抗体。试剂细胞常规用的抗体。试剂细胞常规用a、b和和o型三种型三种 红红细胞。细胞。血型鉴定方法 玻片法（瓷板法、纸片法） 试管法：经典的试管离心方法仍被认为是最可靠的abo定型方法。 微量板法(u型或v型板)：大量标本 微柱凝胶免疫实验技术（卡式） pcr方法 注意：细胞浓度、血清与细胞比例abo正反定型不符合原因 试验因素假阴性：未加试剂；红细胞与血清比例不当；试验温度不当；离心速度不够；未判明结果为溶血；试验结果解读不准确。假阳性：试剂血清、红细胞或生理盐水污染；应用不洁

6、的器皿；离心过度；试验结果解读不准确。 患者本身患者因素 红细胞（正定型）：红细胞抗原减弱：亚型、疾病 红细胞抗原增多：获得性b抗原 细菌污染造成多凝集现象 红细胞被自身抗体致敏 wharton胶 混合外观凝集： 骨髓移植、近期输血患者因素 血清方面的原因（反定型） 血清抗体减少：年龄因素 低丙种球蛋白血症 血清抗体增加：自身抗体的存在 同种抗体的存在 血清被细菌污染造成多凝集现象 球蛋白过高造成的缗钱状凝集 近期内血浆置换 溶血素 （溶血反应）常见问题处理方法常见问题处理方法 了解患者一般情况。了解患者一般情况。在做进一步试验之前，先进行重复试验。在做进一步试验之前，先进行重复试验。用试管法

7、用试管法, ,洗涤细胞洗涤细胞。更换新的试剂。更换新的试剂。灭活补体。灭活补体。常见问题处理方法常见问题处理方法 初步检查：再取一份患者新鲜标本；初步检查：再取一份患者新鲜标本； 红细胞洗涤后配成红细胞洗涤后配成25%浓度；浓度； 重复进行各项试验；重复进行各项试验； 直接抗人球蛋白试验；直接抗人球蛋白试验； 用用o及自身细胞检测血清，怀疑抗及自身细胞检测血清，怀疑抗i，用脐血细胞，用脐血细胞检查；检查； 判定结果之前，实验管至少在室温和判定结果之前，实验管至少在室温和4放置放置30分钟，阴性者用显微镜观察结果。分钟，阴性者用显微镜观察结果。进一步实验 增加试剂血清：抗a1 抗h 抗a,b 增

8、加细胞：自身、o细胞、脐血细胞 唾液血型物质鉴定 吸收试验 放散试验 直接抗球蛋白试验 分子生物学实验特殊特殊abo正反定型不一致的正反定型不一致的解决方法解决方法异常正定型（红细胞问题）异常正定型（红细胞问题） 抗原弱 获得性b抗原 混合凝集视野 cisab抗原弱 当患者血清中存在抗a或抗b时，而红细胞不与相应的抗血清凝集，高度怀疑是缺乏抗原或抗原弱。此时有两种情况：亚型；疾病（急性白血病、骨髓增生异常综合症等）所致。 对策：以a亚型为例用抗a、抗a1、抗a,b、抗h，重复检查洗涤后的被检红细胞，并在室温及4放置至少30min。注意按试剂说明书操作。做吸收放散试验，放散液与3个a细胞和3个o

9、细胞反应。若与a细胞呈阳性反应，与o细胞呈阴性反应，证明被检细胞有a抗原。检查唾液中abh物质。如果有条件，当疾病缓解后复查abo血型。获得性b抗原 当红细胞正定型似乎是ab型，而血清中又含有抗b时，应该考虑是获得性b抗原。常发生于a1型个体。疾病导致的。 对策：仔细观察红细胞与抗a抗b的凝集强度，与抗b血清反应要弱。核对患者诊断，获得性b抗原常与结肠癌、直肠癌、革兰氏阴性细菌感染有关。自身的血清与自身红细胞不发生凝集。即获得性b抗原者的血清与获得性b抗原无凝集反应。酸化人源性抗b血清至ph6.0，与获得性b抗原不出现凝集反应。唾液中血型物质鉴定，可有a物质，无b物质。混合凝集视野 一份血液中

10、含有两种不同的、可以分开的红细胞。 如近期非o型的患者，接受了o型红细胞；abo不合造血干细胞移植；异卵双胞胎的嵌合体；a3亚型或白血病所致抗原减弱。 按照阳性结果报。cisab 双亲中一人为o型，一人为ab型。 a和b基因位于同一条染色体上。两个基因可同时继承和同时遗传。 a抗原强度强于a2b，弱于a1b。较难区分。 b抗原弱，类似b3表型。 h抗原性很强。 分为四种表型：a2b3、a1b3、a2b、a2bx异常反定型（血清问题）异常反定型（血清问题） 缗钱状假凝集：血清中含有异常的大量的蛋白质，使受检红细胞发生聚集，形成具有钱串样特征的团块。疾病或某些药物。 这种聚集通常形状不规则，与正常

11、的凝集很难区分，常采取以下对策：核对患者诊断和用药情况。盐水替代。 异常反定型（血清问题）异常反定型（血清问题） 强反应性自身冷凝集素：血清中常有自身抗i、抗ih、抗ia、抗ib，在室温能凝集所有成人的红细胞，给血型鉴定带来困难。多数情况下，自身冷凝集素比抗a抗b所致凝集反应为弱。 对策：在37下做试验。由于37不是最佳反应温度，患者抗a抗b较弱时，可能凝集强度会更弱。采用冷自身吸收法，去除自身冷凝集素。用吸收后的血清做反定型。用0.01m dtt处理血清。注意正常的igm类抗a抗b也被破坏。 异常反定型（血清问题）异常反定型（血清问题） 意外同种抗体：如抗p1、抗m、igm抗e等，注意与冷凝

12、集素鉴别。 对策：抗体筛选；与多个o型细胞反应；了解患者疾病诊断、输血史、生育史等。异常反定型（血清问题）异常反定型（血清问题） 缺乏预期抗体：反定型均为阴性。 对策：核对患者年龄、诊断。延长反应时间，或增加血清量。血型定型以抗原为主。 abo正反定型不符病例分析正反定型不符病例分析 抗a 抗b 抗a,b ac bc oc 4 4 分析：患者血型可能是b型。 患者年龄（老人/婴儿）、疾病诊断（mm、免疫球蛋白缺乏、慢淋等） 输血：b型红细胞、血小板abo正反定型不符病例分析正反定型不符病例分析 抗a 抗b 抗a,b ac bc oc mf mf 3 / 3 分析：患者血型可能是a亚型。 如果是

13、急性白血病患者，抗原减弱的可能性很大。 输血：a型红细胞、血小板abo正反定型不符病例分析正反定型不符病例分析 抗a 抗b 抗a,b ac bc oc 4 4 2 4 2 分析：患者的血型可能是a型。 巨球蛋白血症或部分多发性骨髓瘤患者，血液中异常球蛋白升高，导致缗钱状凝集。输血：a型红细胞、血小板abo正反定型不符病例分析正反定型不符病例分析 抗a 抗b 抗a,b ac bc oc 3 3 2 分析：患者血型可能是o型，血清中有意外抗体。 输血：o型相容红细胞abo正反定型不符病例分析正反定型不符病例分析 抗a 抗b 抗a,b ac bc oc 4 2 4 3 分析：患者血型可能是a型，获得

14、性b。 核对患者诊断，进行相关试验。输血：a型红细胞abo正反定型不符病例分析正反定型不符病例分析 抗a 抗b 抗a,b 2 2 2 分析：患者是新生儿，只做正定型。血型可能是o型，脐带血中有wharton胶。洗涤被检细胞。 输血：o型血abo正反定型不符病例分析正反定型不符病例分析 抗a 抗b 抗a,b ac bc oc 3 分析：患者血型可能是b亚型。 吸收放散试验、血型基因输血：b型红细胞abo正反定型不符病例分析正反定型不符病例分析 抗a 抗b 抗a,b a1c bc oc 3mf 3 3 3 抗a1 抗h 4分析：a2型，有抗a1抗体。输血a2/o型红细胞。abo正反定型不符病例分析

15、正反定型不符病例分析 抗a 抗b 抗a,b ac bc oc 4 4 4 3分析：ab型，有不规则抗体（抗h）输血：同型输血，不能输o型红细胞交叉配血 交叉配血中遇到的问题如果在血型鉴定中做了反定型，在血型鉴定中就能发现问题，如果血型鉴定中找到原因，配血问题自然能解决。试验结果试验结果 可能的解释可能的解释 讨论解决讨论解决主主 侧侧 + +自身对照自身对照 - -抗体筛选抗体筛选 - -（1 1）患者或献血者的）患者或献血者的aboabo定型不正确定型不正确（2 2）患者血清中的同种）患者血清中的同种抗体与献血者红细胞上的抗体与献血者红细胞上的抗原发生反应，但在筛选抗原发生反应，但在筛选细胞

16、上无此抗原存在。细胞上无此抗原存在。（3 3）献血者细胞可能有）献血者细胞可能有datdat阳阳（1 1）重复）重复aboabo实验：查对抗体是否一致。实验：查对抗体是否一致。（2 2）增加抗体筛选和鉴定的细胞，进一步检）增加抗体筛选和鉴定的细胞，进一步检查病人血清中的抗体查病人血清中的抗体（3 3）做献血者直抗，如阳性，此血不能用于）做献血者直抗，如阳性，此血不能用于临床，废弃。临床，废弃。主主 侧侧 + +自身对照自身对照 - -抗体筛选抗体筛选 + + 患者血清中的同种抗体与患者血清中的同种抗体与献血者红细胞及筛选细胞献血者红细胞及筛选细胞上的抗原发生反应上的抗原发生反应 对患者血清进行抗体鉴定，筛选对应抗原对患者血清进行抗体鉴定，筛选对应抗原阴性的红细胞重做交叉配血。阴性的红细胞重做交叉配血。主主 侧侧 + +自身对照自身对照 + +抗体筛选抗体筛选 + + （1 1）患者血清内可能有