光动力疗法对鼻咽癌细胞的抑制作用

1、光动力疗法对鼻咽癌细胞的抑制作用【摘要】 目的研究光动力疗法对鼻咽癌细胞（CNE2 ）在体外抑制作用的影响。方法采用不同能量密度的氦氖激光对添加不同浓度光敏剂5-ALA 的鼻咽癌细胞进行照射， 用MTT 比色法检测光动力疗法对体外肿瘤细胞的抑制作用，结果 经 0.1、 0.5、 1.0、 2.0、 2.5 和 3.0mmol/L的 5-ALA孵育的鼻咽癌细胞在氦氖激光辐照强度2mW15S 、30S、60s、120s、300s 照射后肿瘤细胞的抑制率随着照射强度和5-ALA的剂量的增加而增加（ P0.05）。【关键词】光动力mtt 鼻咽癌【中图分类号】R739.63 【文献标识码】B【文章编号】

2、1004-4949（ 2014） 05-0531-01引言鼻咽癌是我国高发的恶性肿瘤之一。由于肿瘤生长部位比较隐蔽，症状也不明显，患者就医时已为中晚期。虽然目前采用的放、化疗为主的治疗方法能使患者的5 年生存率达到 70% 左右，但其并发症也严重影响患者的生活质量。 因此，需要寻找一种新的治疗方法来改善并提高患者的生存和生活质量。近年来， 光动力疗法 （ photodynamic therapy ，PDT ）因其选择性好，毒性低，起效快的特点越来越受到人们的重视，在临床工作中也取得了一些进展。本研究旨在探讨PDT对体外鼻咽癌细胞的影响，并为临床治疗提供理论依据。1 材料与方法1.1 试剂、仪器

3、鼻咽癌细胞（ CNE2 ）由广西医科大学耳鼻咽喉实验室惠赠。 5-ALA 和 mtt 粉剂购自美国Sigma 公司；氦氖激光照射仪为广西科学院物理研究所提供的血管内照射治疗仪；1.2 方法1.2.1 细胞培养CNE2 常规培养于细胞培养瓶中，并置于细胞培养箱中培养。1.2.2 细胞分组及处理方法对照组（无 5-ALA无血清孵育、无光照）， 实验组（ 5-ALA 孵育无血清、光照） 。5-ALA按 0.1、0.5、1.0、2.0、2.5、3.0mmol/L 的浓度配制。将各组细胞按一定浓度接种于孔板，避光孵育24 小时，然后以波长 632.8nm 的红光（功率 5mw ），从上至下照射在单层细胞

4、上，照射时间分别为 15s、30s、60s、120s、300s。照射培养箱内培养 6 小时。1.2.3 MTT法测定细胞的存活率各组以1× 104个细胞每孔、每孔200ul培养基接种于96 孔板，每组4 个复孔。在经PDT后培养6 小时的96 孔板里，每孔加入5mg/ml MTT溶液 20ul ，培养箱内避光培养4 小时，小心弃去孔内上清液，再加入 150ulDMSO （二甲基亚砜） ，振荡器震荡10min ，使溶液结晶充分溶解。 选择 492nm 单波长的酶联免疫检测仪测定各孔 OD 值（吸光度值） 。抑制率 =（对照组 OD 值 -实验组 OD 值） /对照组 OD 值×

5、; 100%。1.3 统计学分析所有数据均用统计软件 SPSS16.0 处理，数据以均数 标准差（ s）表示，组间差异比较采用单因素方差分析 （ one-way ANOV A ），组间两两比较用 SNK 法，以 P<0.05 差异具有统计学意义。2 结果2.1 MTT 法检测细胞活力如下表所示， 5-ALA-PDT对CNE2 的抑制作用在照光时间上有依赖关系，照光时间越长，抑制率越高；在5-ALA 浓度上也有依赖关系，但超过2.0mmol/L 时，抑制率变化不明显。3 讨论PDT 又称光化学反应疗法，由光敏剂、光源和氧三部分组成，基本原理是光敏剂在光的激发下，吸收一定波长的可见光后光敏剂

6、分子释放能量并产生多种活性氧物质，使蛋白变性，发生结构上的变化，酶活性降低或者消失，另外，还能损伤 DNA 分子结构，从而引起细胞的坏死和凋亡。5-ALA 是原卟啉物质的合成前体，它本身不具有光敏性，但会在体内合成一种强光敏物质-原卟啉。 经过一定波长的光照以后，原卟啉以基态形式转化为活化形式，将产生的光子能量传递给周围的氧和自由基，并生成多种氧化物，如氧自由基，单态氧等，从而诱导肿瘤细胞的坏死和凋亡。光源是 PDT 疗法不可或缺的一部分。 有研究表明， 光的波长在 600-800nm 的范围内穿透力和产生单态氧的能力最强，实验中所选光源波长为 632.8nm 的氦氖激光，在光源选择上可行。此次实验结果显示，在同一光照强度条件下，细胞的抑制率随着光敏剂浓度的增加而增加，但当浓度>2mmol/L 时，抑制率变化不明显。当光敏剂浓度一定时，抑制率随着光照时间的增加而加强。提示： 1、光敏剂在细胞内有一个饱