大鼠溃疡性结肠炎模型的建立与观察

1、大鼠溃疡性结肠炎模型的建立与观察2021/3/102一、材料与方法一、材料与方法1.实验动物实验动物:Wistar大鼠系大鼠系,体重体重120 1 30g,雌雄各半。雌雄各半。共用鼠共用鼠86 只只,其中其中70只用作免疫实验只用作免疫实验;另另16 只不免疫只不免疫,用作正常对用作正常对照。照。2.细菌菌株细菌菌株:取一只健康大鼠的结肠内容物取一只健康大鼠的结肠内容物,划线于伊红划线于伊红美蓝平板美蓝平板,37 C培养培养24 小时小时,取典型菌落扩增取典型菌落扩增,并作数值鉴定并作数值鉴定,确定为大肠杆菌后确定为大肠杆菌后,冰箱冰箱保存备用。保存备用。免疫前取菌种扩增免疫前取菌种扩增,用福

2、马林杀死细菌用福马林杀死细菌,生理盐水洗两次并调浓度生理盐水洗两次并调浓度为为1.2 x108/ ml2021/3/1033.免疫过程免疫过程:免疫动物分别于第免疫动物分别于第1、1 0、17、24 天共接受天共接受4次免疫。次免疫。第一次于后足肠处注射细菌悬液第一次于后足肠处注射细菌悬液0.2m l;第第2、3次分别于腹部甸背部皮下多点注射次分别于腹部甸背部皮下多点注射0.4ml和和0.6ml;第第4次腹腔内注射次腹腔内注射1.2m l,其中半数动物在第其中半数动物在第2 次免疫前给口服活次免疫前给口服活菌菌1.5m l(浓度同前浓度同前)。4.检查项目与方法检查项目与方法:用常规方法每用常

3、规方法每3天检查便潜血一次天检查便潜血一次,用形态法测定淋巴细胞转化率用形态法测定淋巴细胞转化率;用比浊法测定循环免疫复合物用比浊法测定循环免疫复合物;在不同时间处死动物在不同时间处死动物,取各段结肠各取各段结肠各0.5c m 及肝、心、脾、肺、及肝、心、脾、肺、肾等脏器作病理切片肾等脏器作病理切片,HE染色、光镜观察。染色、光镜观察。一、材料与方法一、材料与方法2021/3/104二、结果二、结果1.便潜血及主要症状便潜血及主要症状:被免疫大鼠从第二周开始出现软便及便潜血阳性被免疫大鼠从第二周开始出现软便及便潜血阳性,但仅为部分大鼠但仅为部分大鼠且程度较轻且程度较轻;到第四周时所有接受免疫的

4、大鼠均表现为便潜血阳性。到第四周时所有接受免疫的大鼠均表现为便潜血阳性。在继续饲养过程中在继续饲养过程中,便潜血有加重倾向。便潜血有加重倾向。在加服活菌的半数免疫动物在加服活菌的半数免疫动物,便潜血表现得更为严重便潜血表现得更为严重,但与单纯免但与单纯免疫组比较无统计学差异疫组比较无统计学差异(P0.0 5)。免疫大鼠从第三周开始出现粘液便免疫大鼠从第三周开始出现粘液便,并伴有食欲减退并伴有食欲减退,消瘦消瘦,倦怠、倦怠、毛松等症状。毛松等症状。2021/3/105二、结果二、结果2.淋巴细胞转化率淋巴细胞转化率:第第31 天时取各组大鼠处死天时取各组大鼠处死,测定淋巴细胞转化率。测定淋巴细胞

5、转化率。正常对照组为正常对照组为35.9士士11.7;单纯免疫组为单纯免疫组为24.1士士7.4;免疫同时加服活菌组为免疫同时加服活菌组为22.8士士3.8;免疫组与正常对照组比较差异显著免疫组与正常对照组比较差异显著(P0.0 5)。2021/3/106二、结果二、结果3.循环免疫复合物循环免疫复合物:在第在第31 天测定淋巴细胞转化率的同时天测定淋巴细胞转化率的同时,测定循环免疫复合物。测定循环免疫复合物。正常对照组为正常对照组为3.7士士1.7;单纯免疫组为单纯免疫组为9.3 士士4.6;免疫同时加服活菌组为免疫同时加服活菌组为11.0士士3. 4。免疫组与正常对照组比较差异显著免疫组与

6、正常对照组比较差异显著(P0.0 5)。2021/3/107二、结果二、结果4.病理改变病理改变:16 只正常对照鼠结肠各层组织结构完整只正常对照鼠结肠各层组织结构完整,除除2份标本粘膜层可以看份标本粘膜层可以看到极少数的嗜酸性粒细胞浸润外到极少数的嗜酸性粒细胞浸润外,其余标本无异常。其余标本无异常。而在免疫的而在免疫的70 只鼠中只鼠中,均可见粘膜及粘膜下层水肿均可见粘膜及粘膜下层水肿,炎细胞浸润及炎细胞浸润及血管炎改变。血管炎改变。粘膜内可见多处隐窝脓疡及溃疡形成粘膜内可见多处隐窝脓疡及溃疡形成;溃疡有的深达粘膜下层或达溃疡有的深达粘膜下层或达浆膜浆膜,甚至形成粘膜下或浆膜下脓肿。甚至形成

7、粘膜下或浆膜下脓肿。无论是否加服活菌无论是否加服活菌,病理改变基本相同病理改变基本相同,并随时间的延长并随时间的延长,溃疡的形溃疡的形成率在增加。比较各段结肠病变情况成率在增加。比较各段结肠病变情况,可见病变在横结肠与降结肠可见病变在横结肠与降结肠更为多见更为多见,但与升结肠比较并无明显统计学差异。肝、心、脾、肺、但与升结肠比较并无明显统计学差异。肝、心、脾、肺、肾等重要脏器未发现有意义的病理变化。肾等重要脏器未发现有意义的病理变化。2021/3/108三、讨论三、讨论本文结果说明本文结果说明,随着免疫次数的增加随着免疫次数的增加,在大鼠的结肠壁上逐渐出现在大鼠的结肠壁上逐渐出现溃疡或弥漫性炎

8、症溃疡或弥漫性炎症;同时可以看到细胞免疫机能下降和循环免疫复同时可以看到细胞免疫机能下降和循环免疫复合物增加。合物增加。说明细胞免疫机能低下及循环免疫复合物的形成可能是溃疡性结说明细胞免疫机能低下及循环免疫复合物的形成可能是溃疡性结肠炎发病的重要因素。肠炎发病的重要因素。此外加服活菌并不能影响结肠壁上溃疡形成的数量此外加服活菌并不能影响结肠壁上溃疡形成的数量,说明单纯免疫说明单纯免疫即可达到造型的目的即可达到造型的目的,使实验操作变得简单。使实验操作变得简单。本模型由于造型方法简便本模型由于造型方法简便,抗原来源方便抗原来源方便,而便于推广应用。本模而便于推广应用。本模型的深入研究型的深入研究,可能为非特异性溃疡性结肠炎的病因学、发病机理可能为非特异性溃疡性结肠炎的病因学、发病机理及治疗药物的研究提供一个很好的模型。及治疗药物的研究提供一个很好的模型。2021/3/1092021/3/1010人有了知识，就会具备各种分析能力，明辨是非的能力。所以我们要勤恳读书，广泛阅读，古人说“书中自有黄金屋。”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识，培养逻辑思维能力；通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平，培养文学情趣；通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。有许多书籍还能培养我们的道德情操，给我们巨大的精神力量，鼓舞我们前进。人有了知识，就会具备各种分析能力，明辨是非的能力。