微生物培养及保藏标准操作规程_第1页
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文档简介

1、微生物培养及保藏标准操作规程1 .目的规范微生物使用及保藏的相关操作，避免二次污染。2 .范围适用于企业内所有微生物的使用及保藏3 .职责微生物保管人员负责保藏，质量监督员监督执行情况。4 .内容4.1 培养基需经验证合格后准许使用，使用前需灭菌。4.2 质检菌种的培养及菌种保藏4.2.1 大肠埃希菌，金黄色葡萄球菌，枯草芽泡杆菌，白色念珠菌的活化及培养固体平板法：选用适用细菌培养的培养基（如：LB培养基；营养琼脂培养基等）灭菌。 酒精灯旁打开融化的无菌培养基瓶口，在酒精灯火焰上通过23次后，打开无菌平皿上盖，在 酒精灯火焰上在开口处灼烧23次，将培养基到入平皿中，盖上平皿上盖，水平放在超净台

2、上 冷却完全凝固后使用。每次倒平板尽量将培养基到完，并及时放回冰箱4。（2保存。点燃酒精灯，酒精灯外焰灼烧接种针（环），烧至通红，冷却后，在酒精灯旁用接种针（环） 轻轻挑取待活化的菌种，进行划线培养。待长出单菌落，挑取单菌落进行液体振荡培养过夜。第1页共4页微生物培养及保藏标准操作规程斜面固体培养基的制备接种环的灼烧示意图试管斜面的接种示意图4、接种环挑取菌种5、接种子试管斜面上，接种环由内向外划 6、灼烧试管口，并塞回桃塞.接种换灼烧/良形.灭曲4.2.3 菌种的保藏菌种保藏可分为液体甘油保藏及试管斜面保藏。大肠埃希菌，金黄色葡萄球菌，枯草芽泡杆菌，白色念珠菌都采用甘油菌保藏法。黑曲霉 袍子

3、悬液可做甘油保藏。甘油保藏：接种环灼烧冷却后，挑取单菌落进行过夜增值培养16-18h。移液器吸取1ml 新鲜培养物于1.5ml离心管中，4500r/min常温离心5min,弃上清。重复吸取并离心,向沉淀 中加入4 00可新鲜LB培养基，然后加入4 00m40%的甘油，振荡混匀并稍稍离心。在离心管 上注明菌种，日期放置在-80C冰箱保存。甘油菌，每年进行活化复苏一次。试管斜面保藏：配制固体琼脂培养基，分装于试管中，灭菌处理。待培养基未凝固前摆斜 面。依照斜面接种的方法，接种斜面。接种后，放在生化培养箱中进行培养，直到菌落长成。 放置在4。（2冰箱中进行保藏。试管斜面的保藏的菌株至少3个月复苏一次。5 .支持文件无6 .相关记录无7.文件修改记录序

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