实验三十六葡萄糖中一般杂质检查

1、实验三十六 葡萄糖中一般杂质检查一 目的要求1. 掌握目视比色和比浊法进行杂质检查的操作方法及要点。2. 掌握杂质限量计算方法。3. 熟悉进行药物中杂质检查的手段、目的、意义, 二 实验原理1氯化物检查法氯化物在硝酸性溶液中与硝酸银作用，生成氯化银白色浑浊，与一定量的标准氯化钠溶液和硝酸银在同样条件下处理生成的氯化银浑浊相比较，测定供试品中氯化物的限量。 Cl + AgNO3 AgCl 2铁盐检查法 三价铁盐在酸性溶液中与硫氰酸盐生成红色可溶性硫氰酸铁络离子，与一定量标准铁溶液用同法处理后进行比色，判断供试品中铁盐是否超过标准。Fe3+ +6SCN¯ Fe (SCN)63¯

2、 红色在酸性条件反应，可防止Fe3+水解，加入过硫酸铵氧化供试品中Fe2+成Fe3+,同时可防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色。 在有些药物的检查中（如葡萄糖）需要用硝酸氧化供试品中Fe2+成Fe3+，则不再加入过硫酸铵和盐酸。但因硝酸中可能含有能和硫氰酸根离子显色的亚硝酸，所以必须加热煮沸，除去氧化氮 HNO2 + SCN + H+ NO·SCN +H2O3重金属检查法重金属是指在实验条件下，能与S2作用生成硫化物而显色的金属杂质,如:银、铅。汞、铜、镉、鉍、砷、锑、锡、锌、钴、镍等。在药品生产过程中遇到铅的机会较多，且铅在体内易积蓄中毒，故检查时以铅为代表。硫代乙酰胺(thioac

3、etamide)在弱酸性(pH约3.5)溶液中水解，产生硫化氢，可与重金属离子结合生成有色硫化物的均匀沉淀，可与对照标准液同法处理比较。本方法的适宜目视比色范围为27mL溶液中含铅10g 20g，相当于标准铅溶液12mL，检查中根据规定含重金属的限量确定供试品的取用量。 CH3CSNH2+H2OCH3CONH2+H2S Pb 2+ + H2SPbS4. 砷盐检查法中国药典主要采用古蔡氏(Gutzeit)法检查砷盐。其原理是利用金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中的微量砷盐作用生成具挥发性的砷化氢，遇溴化汞(或氯化汞)试纸，产生黄色至棕色的砷斑，与定量标准砷溶液所生成的砷斑比较，可判定药物中含

4、砷盐的限量。其反应如下： AsO 3Zn+ +9H+ AsH3 + 3Zn 2+3H20 AsH3+2HgBr 2HBr + AsH(HgBr)2 黄色 AsH3 + 3 HgBr 3HBr+As(HgBr)3 棕色五价砷在酸性溶液中也能被金属锌还原为砷化氢，但生成砷化氢的速度较三价砷慢，故在反应液中加入碘化钾及酸性氯化亚锡将五价砷还原为三价砷，碘化钾被氧化生成的碘又可被氯化亚锡还原为碘离子。 AsO + 2I + 2H+ AsO+ I2 + H2O AsO + Sn 2+ +2H+ AsO +Sn 4+ + H2O I2 十Sn 2+ 2I+ Sn 4+溶液中的碘离子，与反应中产生的锌离子能

5、形成络合物，使生成砷化氢的反应不断进行。 4I 十Zn2+ ZnI42氯化亚锡与碘化钾存在，可抑制锑化氢的生成，因锑化氢也能与溴化汞试纸作用生成锑斑，在试验条件下100mg锑存在不会干扰测定。氯化亚锡又可与锌作用，在锌粒表面形成锌锡齐，起去极化作用，从而使氢气均匀而连续地发生。由于葡萄糖具有环状结构，可能与砷盐杂质呈配合物形式存在，所以在检查前，加溴化钾溴试液进行破坏。由于溴是较强的氧化剂，所以在加入反应一段时间后必须除去残留的溴方可进行下面的操作，否则残留的溴可能氧化碘化钾生产碘干扰检查。5. 葡萄糖酸度的检查 图16 验砷仪葡萄糖是用淀粉以无机酸水解或在酶催化下，经过水解得稀葡萄糖液，再经

6、脱色、浓缩结晶制得，所以需要检查其酸性杂质的量。酸碱性杂质的检查可采用指示剂法、酸碱滴定法和pH指示剂法。中国药典采用酸碱滴定法控制葡萄糖中酸性杂质，规定在酚酞指示剂存在下，葡萄糖中酸性杂质消耗氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）不得超过0.20ml。三 仪器与试剂水浴锅，50mL比色管，量筒，50mL烧杯；葡萄糖，稀硝酸，硝酸银，硝酸，硫氰酸铵，醋酸盐缓冲液(pH3.5)，硫代乙酰胺，甘油，氢氧化钠，溴化钾，碘化钾，20目无砷锌粒，氯化亚锡，醋酸铅，溴化汞试纸， 贝诺酯 ，对氨基酚，甲醇溶液(12)，碱性亚硝基铁氰化钠试液，氢氧化钠滴定液(0.02mol/L)，1ml吸量管四 操作步骤1葡萄

7、糖中氯化物取本品0.6g，加水溶解使成25mL (如被检药物溶液呈碱性，可滴加硝酸使遇石蕊试纸显中性反应)，再加稀硝酸10mL，溶液如不澄清，可滤过；置50mL纳氏比色管中，加水使成约40mL，摇匀，即得供试液。另取标准氯化钠溶液(10mg ClmL ) 6.0mL置50mL氏比色管中，加稀硝酸10mL，用水稀释使成约40mL，摇匀，即得对照液。向供试液与对照液中分别加硝酸银试液1.0mL，用水稀释使成50mL，摇匀，暗处放置5分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，如发生浑浊，样品管不得比对照管更浓。 (0.01)。2葡萄糖中铁盐检查取本品2.0g，置50ml烧杯中，加水20ml溶解后，

8、加硝酸3 滴，缓缓煮沸5 分钟，放冷，定量转移至50mL纳氏比色管中，加水稀释使成45ml，加硫氰酸铵溶液(30 100)3ml ，摇匀，如显色，与标准铁溶液2.0ml 用同一方法制成的对照液比较，不得更深(0.001) 。4葡萄糖中重金属的检查 取本品4.0g置25mL纳氏比色管中，加23mL水溶解后，加醋酸盐缓冲液(pH3.5) 2mL，加硫代乙酰胺试液2mL，放置2分钟后，与标准铅溶液(10mg Pb 2+m1)一定量用同一方法制成的对照液同置白纸上自上向下比较，不得更深。 (5ppm)。附：硫代乙酰胺试液配制：取硫代乙酰胺4g，加水使溶解成100mL，置冰箱中保存。临用前取混合液(由氢

9、氧化钠液(1molL)15mL，水5.0mL及甘油20mL组成)5.0mL，加上述硫代乙酰胺溶液1.0mL，置水浴上加热20秒钟，冷却，立即使用。5. 葡萄糖酸度检查取本品2.0g，加水20ml溶解后，加酚酞指示液3 滴与氢氧化钠滴定液(0.02mol/L)0.20ml ，应显粉红色。6.葡萄糖中砷盐的检查 取本品2g，置检砷瓶中，加水5mL溶解后，加稀硫酸5mL与溴化钾溴试液0.5mL，置水浴上加热约20分钟，使保持稍过量的溴存在，必要时，再补加溴化钾溴试液适量，并随时补充蒸发的水分，放冷，加盐酸5mL与水适量使成28mL，加碘化钾试液5mL及酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌

10、粒2g，迅速将瓶塞塞紧(瓶塞上已安放好装有醋酸铅棉及溴化汞试纸的检砷管)，保持反应温度在25 40，反应45分钟，取出溴化汞试纸，将生成的砷斑与标准砷溶液(1mg As3+/m1)一定量制成的标准砷斑比较，颜色不得更深，含砷量不得超过百万分之一(1ppm)。 标准砷斑的制备：精密吸取标准砷溶液(1mgm1)2mL置另一检砷瓶中，加盐酸5mL与水21mL，自“加碘化钾试液5mL及起”依法操作即可。五 操作注意事项1纳氏比色管的选择与洗涤 比色或比浊操作，一般均在纳氏比色管中进行，因此在选用比色管时，必须注意使样品与标准管的体积相等，玻璃色质一致，最好不带任何颜色，管上的刻度均匀，如有差别，不得相

11、差2mm。纳氏比色管用后应立即冲洗，比色管洗涤时避免用毛刷或去污粉等洗刷，以免管壁划出条痕影响比色或比浊。2平行操作原则进行比色、比浊、砷盐检查时，样品液与对照液的实验条件应尽可能一致，严格按照操作步骤平行操作，按规定顺序加入试剂。比色，比浊前可利用手腕转动360°的旋摇使比色管内试剂充分混匀。比色方法一般是将两管同置于白色背景上，从侧面观察；比浊方法是将两管同置于黑色或白色背景上，自上而下地观察。3实验中应准确选用量具，杂质检查中允许的误差为±10，量筒的绝对误差为1mL，刻度吸管的绝对误差为0.010.1mL，在实验中，应根据样品、标准液的取用量正确选用量器。例如，取标

12、准液2mL应选择刻度吸管或移液管吸取标准液。取样品2g，允许的误差为0.2g，可选用称量精度为0.1g的普通天平。4进行铁盐检查时，采用硝酸将Fe2+氧化为Fe3+，标准液应与样品液同法操作。样品液加硝酸煮沸时，应注意防止爆沸，必要时补充适量水。5砷盐检查时采用湿法破坏葡萄糖，在酸性溶液中用溴进行有机破坏使砷游离。有机破坏可在测砷瓶中进行，20min内要保持过量的溴存在，随时补充消耗的溴化钾 溴试液和水分，使溶液呈黄色，20min后要必须将多余的溴除尽，使溶液无色，否则溴将氧化碘化钾生成I2，干扰检查。加砷粒前安装好醋酸铅棉花和溴化汞试纸，醋酸铅棉花的填塞松紧度，溴化汞试纸应盖住测砷管孔，并盖

13、紧盖子，勿使漏气。加砷粒后必须立即塞紧测砷管，在规定温度下反应45钟。砷盐检查中所用锌粒应无砷，并能通过20目筛。如所用锌粒较大时，应适当延长反应时间。6酸碱度检查用水必须是新煮沸放冷的水，应用刻度吸管量取酸碱滴定液。7重金属检查中，应根据杂质限量计算公式，计算出标准铅溶液的取用量。六 思考题1比色、比浊操作中应注意什么原则？2是否所有药物都要对各种一般杂质进行检查。3砷盐的检查中加入各种试剂起什么作用?4. 上述实验中哪些检查属于一般杂质检查，哪些属于特殊杂质检查？七 参考文献1中华人民共和国药典.（2005版，二部附录J）摘录砷盐检查采用第一法(古蔡氏法) 仪器装置 如图1-1。A为100

14、mL标准磨口锥形瓶；B为中空的标准磨口塞，上连导气管C(外径80mm，内径60mm)，全长约180mm；D为具孔的有机玻璃旋塞，其上部为圆形平面，中央有一圆孔，孔径与导气管C的内径一致，其下部孔径与导气管C的外径相适应，将导气管C的顶端套人旋塞下部孔内，并使管壁与旋塞的圆孔适相吻合，粘合固定；E为中央具有圆孔(孔径6.0mm)的有机玻璃旋塞盖，与D紧密吻合。测试时，于导气管C中装入醋酸铅棉花 60mg(装管高度为6080mm)，再于旋塞D的顶端平面上放一片溴化汞试纸(试纸大小以能覆盖孔径而不露出平面外为宜)，盖上旋塞盖E并旋紧，即得。 标准砷斑的制备 精密量取标准砷溶液2mL，置A瓶中，加盐酸5mL与水21mL，再加碘化钾试液5m1与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分