《微生物肺炎克雷伯》ppt课件

1、标本：尿标本：尿培育基：血平板、培育基：血平板、MACMACEMBEMB、SSSS、XLDXLDKIAKIA、MIUMIU、葡萄糖蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、枸橼酸盐培育基、枸橼酸盐培育基、鸟氨酸脱羧酶培育基及对看管鸟氨酸脱羧酶培育基及对看管试剂：革兰染液、荚膜染液、试剂：革兰染液、荚膜染液、V-PV-P试剂、试剂、吲哚试剂、吲哚试剂、95%95%乙醇溶液乙醇溶液器材：孵育箱、接种环、酒精灯、显微镜器材：孵育箱、接种环、酒精灯、显微镜察看菌落形状：血平板上构成圆形、凸起、灰白色、不溶血、光亮的大菌落，相邻菌落易于交融，粘液状，假设用接种针蘸取呈长丝状拽起；MAC上构成乳糖发酵产酸的菌落，即红色或

2、粉红色、较大、浑浊、凸起、有光泽的粘液型菌落EMB上是大、粘稠、红色、易溶于一片的菌落，SS上是红色或粉红色、或具有粉红中心的无色菌落，XLD上呈不透明黄色的菌落。制片制片1.1.载玻片预备：玻片先在载玻片预备：玻片先在9595乙乙醇中去除油污，再在火焰上烧去醇中去除油污，再在火焰上烧去粘附的乙醇，待冷，做好标志。粘附的乙醇，待冷，做好标志。2.2.涂片：在干净无油腻的玻片中涂片：在干净无油腻的玻片中央放一小滴蒸馏水或用接种环央放一小滴蒸馏水或用接种环挑挑1-21-2滴水，用无菌的接种环挑滴水，用无菌的接种环挑取少量菌种与水滴充分混匀，涂取少量菌种与水滴充分混匀，涂成极薄的菌膜，涂布面积约成极

3、薄的菌膜，涂布面积约1cm21cm2 。 3.3.枯燥：涂片在室温下使其自然枯燥：涂片在室温下使其自然枯燥，也可以小心地在酒精灯上枯燥，也可以小心地在酒精灯上高处悄然加热，使水分蒸发，但高处悄然加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。以防标本烤枯而变形。 4.4.固定：手执玻片一端，有菌膜固定：手执玻片一端，有菌膜的一面朝上，经过微火三次手的一面朝上，经过微火三次手指触摸反面不烫手为宜，待玻指触摸反面不烫手为宜，待玻片冷却后再进展染色。片冷却后再进展染色。 革兰染色：挑取可疑菌落涂在干净的玻片上自然晾干，用结晶紫1液覆盖细菌初染1min，

4、清水冲洗干净玻片再滴加革兰染液2液媒染1min，清水冲去外表的染液，用95乙醇3液脱洗约30s以乙醇不再有颜色为好，最后用稀释的复红4液复染30s。自然晾干后在显微镜下察看形状。荚膜染色1.染色：玻片置于玻片搁架上，加适量以盖满菌膜为度草酸铵结晶紫或石炭酸复红染液于菌膜部位，染色1-2min。 2.水洗：斜置载玻片，在自来水龙头或洗瓶下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。 3.枯燥：自然枯燥或用吸水纸吸去涂片上的水，用吸水纸时切勿将菌体擦掉。 4.镜检：用高倍镜和油镜察看并绘细菌形状并绘图于记录表中。镜下形状：G-杆菌，卵圆形或球杆状细菌，长成双陈列，有荚膜，无鞭毛。如有需求，可进展荚膜染

5、色，染色后菌体呈卵圆形或球杆状，成双陈列，菌体外绕以明显的荚膜长较菌体宽2-3倍。生化鉴别生化鉴别定科：氧化酶实验定科：氧化酶实验- -、IMViCIMViC- - - +- +定属：定属：KIAKIAAA+ -AA+ -、MIUMIU- - - - + +、 O/FO/FF F、鸟氨酸脱羧酶实验、鸟氨酸脱羧酶实验- -定种：吲哚定种：吲哚- -编码鉴定编码鉴定血清学鉴定血清学鉴定氧化酶实验：氧化酶细胞色素氧化酶是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素C氧化，再由氧化型细胞色素C将盐酸二甲基对苯二胺或盐酸四甲基对苯二胺氧化成红色或蓝色的醌类化合物。主要用于肠杆菌科细菌

6、与假单胞菌的鉴别，前者为阴性，后者为阳性。奈瑟菌属、莫拉菌属细菌也呈阳性反响。 backI吲哚：有些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚，与对甲基氨基苯甲醛结合，生成红色化合物玫瑰吲哚。主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。M甲基红：某些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸可进一步分解为甲酸、乙酸等酸性物质，不再继续分解，故培育基pH在4.5以下，参与甲基红指示剂后呈紫红色阳性。有些细菌将分解葡萄糖产生的酸进一步转化为醇酮等非酸性物质，使培育基pH在6.2以上，参与甲基红试剂成橘黄色阴性。普通用于肠杆菌科各菌属的鉴别。Vi：某些细菌分解葡萄糖生成丙酮酸，丙酮酸可进一步脱羧生成乙酰甲基甲醇，乙酰甲

7、基甲醇在碱性环境下被氧化成二乙酰，后者与蛋白胨中的精氨酸所含的胍基起作用，生成红色胍缩二乙酰，为VP实验阳性。假设培育基中胍基含量少，参与少量含胍基的化合物如肌酸肌酐，可加速其反响。普通用于肠杆菌科各菌属的鉴别。C枸橼酸盐枸橼酸盐培育基中不含任何糖类，枸橼酸盐为独一碳源，磷酸二氢铵为独一氮源。假设细菌能利用铵盐作为独一氮源，并能利用枸橼酸盐作为独一碳源，在枸橼酸盐培育基上生长，并分解枸橼酸盐为碳酸盐，使培育基变碱，指示剂溴麝香草酚蓝由绿色变为深蓝色，为枸橼酸盐利用实验阳性。假设细菌不能利用枸橼酸盐为碳源，那么细菌不能生长，培育基不变色。backKIA克氏双糖铁克氏双糖铁斜面培育基，用酚红作指示

8、剂，在酸性时呈黄色，碱性时呈红色，培育基中的葡萄糖含量仅为乳糖或蔗糖的1/10，假设细菌只分解葡萄糖而不分解乳糖，分解葡萄糖产酸使ph降低，因此斜面和底层均先呈黄色，但因葡萄糖含量较少，所以生成的少量酸可因接触空气而氧化，并因细菌生长繁衍利用含氮物质而生成碱性化合物中和，使斜面部分又变成红色；底层由于处于缺氧形状，细菌分解葡萄糖所生成的酸类一时不被氧化而仍坚持黄色。假设细菌分解葡萄糖、乳糖产酸产气，斜面与底层均呈黄色，且有气泡。细菌产生硫化氢时与培育基中的硫酸亚铁作用，构成黑色的硫化铁。主要用于鉴别肠杆菌科细菌。backMIU动力、吲哚、尿酶培育基为尿素、蛋白胨成分的半固体培育基，指示剂为酚红

9、。具有色氨酸酶的细菌能分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚，参与吲哚试剂后，培育基上层的吲哚试剂会变红；具有尿酶的细菌能分解尿素产氨，使整个培育基变碱呈红色；有动力的细菌沿穿刺线分散生长。backO/F氧化、发酵不同细菌对不同的糖分解才干及代谢产物不同，这种才干因能否有氧气的存在而异。细菌在分解葡萄糖的过程中，必需有分子氧参与的，称为氧化型，氧化型细菌在无氧环境中不能分解葡萄糖。细菌在分解葡萄糖的过程中，可以进展无氧降解的，称为发酵型，发酵型细菌在有氧或无氧的环境中都能分解葡萄糖。不分解葡萄糖的细菌称为产碱型。利用此实验可以区分细菌的代谢类型。主要用于肠杆菌科细菌与非发酵菌的鉴别，前者均为发酵型，而后

10、者通常为氧化型或产碱型。back氨基酸脱羧酶实验：具有氨基酸脱羧酶的细菌，可分解氨基酸，使其脱掉羧基，生成胺和二氧化碳，称为脱羧反响；并使培育基变碱，可用指示剂显示出来。最常用的氨基酸有三种，L-赖氨酸脱羧构成尸胺，L-鸟氨酸脱羧构成腐胺，L-精氨酸脱羧构成精胺。本实验主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。back吲哚：有些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚，与对甲基氨基苯甲醛结合，生成红色化合物玫瑰吲哚。主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。back本卷须知本卷须知1 1、标本采集时要用无菌尿杯搜集，条件允、标本采集时要用无菌尿杯搜集，条件允许时可采集二次晨尿或尿三杯的中尿进展许时可采集二次晨尿或

11、尿三杯的中尿进展细菌培育。细菌培育。2 2、标本接种等操作时要留意无菌操作。、标本接种等操作时要留意无菌操作。3 3、制片采取标本时要选取优势菌落进展涂、制片采取标本时要选取优势菌落进展涂片，涂片时要适量挑取细菌，涂开并使其片，涂片时要适量挑取细菌，涂开并使其均匀分布在载坡片上。均匀分布在载坡片上。4 4、染色时要正确掌握染色的时间和染液的、染色时要正确掌握染色的时间和染液的顺序，洗脱时要根据涂片厚薄灵敏掌握，顺序，洗脱时要根据涂片厚薄灵敏掌握，并要尽量淋洗干净，以免复染效果不佳。并要尽量淋洗干净，以免复染效果不佳。5 5、镜检时要等染片晾干后再在显微镜下察、镜检时要等染片晾干后再在显微镜下察看，以免油镜察看用的香柏油会溶解标本。看，以免油镜察看用的香柏油会溶解标本。6 6、生化实验时参照、生化实验时参照SOPS