影响ELISA试验因素ppt课件

1、试剂盒保存于试剂盒保存于2-8使用前应先将检测试剂盒放置室温平衡使用前应先将检测试剂盒放置室温平衡15-30分钟，保证酶等液体的初始反应温度及活性分钟，保证酶等液体的初始反应温度及活性剂的溶解。剂的溶解。 真空包装袋漏气一般不影响试剂盒质量，如真空包装袋漏气一般不影响试剂盒质量，如须拼组板条于板架上，必须保证板条放平，须拼组板条于板架上，必须保证板条放平，以免影响洗板机的操作。以免影响洗板机的操作。标本采集后，应先将标本度放标本采集后，应先将标本度放置分钟置分钟标本应进行离心：采用转标本应进行离心：采用转速离心速离心1520分钟分钟3.取上清液加样取上清液加样.标本采集后，应先将标本度或者标本

2、采集后，应先将标本度或者室温放置一定时间室温放置一定时间标本应进行离心：采用转速标本应进行离心：采用转速离心离心1015分钟分钟3.取上清液加样取上清液加样.标本处理过程严谨，可最大限度避免由标本处理过程严谨，可最大限度避免由于标本因素造成的非特异反应对实验的于标本因素造成的非特异反应对实验的影响，最大限度避免重复实验影响，最大限度避免重复实验,增加不增加不必要的工作量必要的工作量.1.观察外包装，内组份有无漏液。观察外包装，内组份有无漏液。2.仔细阅读说明书，严格按照试剂说明书进行操作。仔细阅读说明书，严格按照试剂说明书进行操作。.仔细注意加样全部过程仔细注意加样全部过程.2.加样后及时放入

3、孵育箱，避免包被板在室温加样后及时放入孵育箱，避免包被板在室温放置时间过长。放置时间过长。 3.标本较多时，请分批操作。标本较多时，请分批操作。 1.按规定加盖封板膜。按规定加盖封板膜。 2.按说明步骤严格控制孵育时间。按说明步骤严格控制孵育时间。3. 严格控制温育仪器（水箱、温箱、全自动酶免）严格控制温育仪器（水箱、温箱、全自动酶免）的温度，建议在仪器内放置测量工具（全自动酶的温度，建议在仪器内放置测量工具（全自动酶免除外）。免除外）。1.要有适当的浸泡时间（要有适当的浸泡时间（3060秒）。秒）。2.洗板机吸液要彻底洗板机吸液要彻底,残余量低于残余量低于5ul。3.洗板次数应与说明书要求一

4、致，尽量不要私自洗板次数应与说明书要求一致，尽量不要私自 增加或减少洗板次数。增加或减少洗板次数。4.洗板后，拍干包被板，应垂直扣在备好的洗板后，拍干包被板，应垂直扣在备好的 干净吸水纸或毛巾上，且每次拍板应换掉干净吸水纸或毛巾上，且每次拍板应换掉 前次拍过的毛巾或吸水纸前次拍过的毛巾或吸水纸,避免交叉污染避免交叉污染.5.洗液应调至适当的注出量，每孔应在洗液应调至适当的注出量，每孔应在 350ul-450ul之间，但不要溢出孔外。之间，但不要溢出孔外。6.稀释洗液应用蒸馏水或去离子水，稀释洗液应用蒸馏水或去离子水，pH 值不宜过酸或过碱，保证配出的洗液值不宜过酸或过碱，保证配出的洗液 pH值

5、值7.40.2，水质宜新鲜，长菌或，水质宜新鲜，长菌或 有沉淀不宜使用，水保存应用非金属有沉淀不宜使用，水保存应用非金属 容器。容器。7.稀释好的洗液稀释好的洗液4度情况下可保存度情况下可保存3-5天天.8.由于洗涤液系高浓度磷酸盐，可能会形成由于洗涤液系高浓度磷酸盐，可能会形成 结晶，配制洗液时应完全溶解结晶，配制洗液时应完全溶解. 显显 色色 11.试剂显色时先加试剂显色时先加A液，后加液，后加B液，二者不要颠倒液，二者不要颠倒.2.前后加入的间隔时间不要超过前后加入的间隔时间不要超过10分钟分钟.3.若把若把A液和液和B液先混和，再加样显色，需要求二液先混和，再加样显色，需要求二 者等体

6、积混合。者等体积混合。4.底物溶液底物溶液B应是澄清透亮，如倒出发现溶液已呈应是澄清透亮，如倒出发现溶液已呈 微兰色，表明液体已受污染，应废弃不用。微兰色，表明液体已受污染，应废弃不用。显显 色色 25. 将加样槽清洗干净。将加样槽清洗干净。6.A、B液应避免接触污物液应避免接触污物 。7.不同厂家显色液不得混用。不同厂家显色液不得混用。1加完终止后加完终止后30分钟内读取数据。分钟内读取数据。2读板时板底如果不清洁，就会导致所读的读板时板底如果不清洁，就会导致所读的 数据不准确，所以在读数前尽量保证酶标数据不准确，所以在读数前尽量保证酶标 板的底部是清洁的。板的底部是清洁的。 灰区又称灰色带

7、反应。就是把灰区又称灰色带反应。就是把 OD值在值在Cut off 值正负值正负10%这个范围内的标本称为灰区标这个范围内的标本称为灰区标本。本。这个范围称为灰区。这个范围称为灰区。1.灰区是客观存在的，没有不存在灰区的试剂。灰区是客观存在的，没有不存在灰区的试剂。我们只是尽量减少灰区的出现比例。我们只是尽量减少灰区的出现比例。2.减少灰区最有效的方法就是尽量将板洗涤干减少灰区最有效的方法就是尽量将板洗涤干净。净。3.严格控制温浴时间。严格控制温浴时间。问题问题1：只有单次实验出现灵敏度偏低或只有单次实验出现灵敏度偏低或 者偏高。者偏高。 处理意见：处理意见：重新实验，并在实验中注意试重新实验

8、，并在实验中注意试 剂盒的温度平衡、温育的时间、剂盒的温度平衡、温育的时间、 显色的时间等影响因素的控显色的时间等影响因素的控制制 。 问题问题2：质控品漏检质控品漏检 处理意见：处理意见：检查质控品是否有反复冻融检查质控品是否有反复冻融 的情况、质控品是否有批内的情况、质控品是否有批内 差异、质控品是否为差异、质控品是否为4摄氏度摄氏度 久置。久置。 问题：问题：日常使用中出现弱阳性标本漏检。日常使用中出现弱阳性标本漏检。 处理意见：处理意见：A标本本身由于各种因素影响而表现标本本身由于各种因素影响而表现 为弱阳性，实际上为阴性标本。为弱阳性，实际上为阴性标本。 B由于标本自身含量较低，易随

9、实由于标本自身含量较低，易随实 验水平位试剂盒调整等因素波动，验水平位试剂盒调整等因素波动， 对这部份标本的处理应格外慎重，对这部份标本的处理应格外慎重， 有条件的地区应进行确证实验。有条件的地区应进行确证实验。 处理意见：处理意见：C注意检查实验中所用的仪器设备注意检查实验中所用的仪器设备 是否定期校准。是否定期校准。 D注意检查实验中所用的板、酶标注意检查实验中所用的板、酶标 试剂的批号是否在有效期之内试剂的批号是否在有效期之内.问题：问题：质控品灵敏度偏高质控品灵敏度偏高 。处理意见：处理意见：卫生部临检中心的质控品存在卫生部临检中心的质控品存在 批间批内差异。批间批内差异。 实验室相关

10、条件改变导致质控变化。实验室相关条件改变导致质控变化。 问题：多次实验灵敏度一直偏低。问题：多次实验灵敏度一直偏低。处理意见：处理意见：A保存环境不规范。保存环境不规范。 B孵箱温度不足。孵箱温度不足。 C温育时间不足。温育时间不足。 问题：问题：单次实验中出现假阳性单次实验中出现假阳性 处理意见：处理意见：注意实验过程中的影响因素，特注意实验过程中的影响因素，特 别是实验中的洗板应设置浸泡别是实验中的洗板应设置浸泡 30-60秒时间。秒时间。 问题：问题：临床实验中出现假阳性偏高。临床实验中出现假阳性偏高。 处理意见：处理意见：A注意检查洗涤液中结晶部份是否注意检查洗涤液中结晶部份是否 完全溶解。完全溶解。 B注意检查实验中所使用的仪器设注意检查实验中所使用的仪器设 备是否定期校准备是否定期校准 。 C注意检查实验中所用的板、酶标注意检查实验中所用的板、酶标 试剂的批号是否相同，不同批号试剂的批号是否相同，不同批号 试剂不得混用。试剂不得混用。 处理意见：处理意见：D假阳性标本表现在临界值附近较假阳性标本表现在临界值附近较 多，通常与当时实验的水平有关，多，通常与当时实验的水平有关， 注意检查实验条件的波动注意检查实验条件的波动 。 E避免加样时间过长避免加样时间过长 。 F由于试剂盒灵敏度过高而造成