荧光分光光度法测定维生素B2的含量

1、荧光分光光度法测定维生素B2的含量实验报告应用化学(环境检测与分析)、实验目的1、掌握标准曲线法定量分析维生素B2的基本原理。2、了解荧光分光光度计的基本原理、结构及性能，掌握其基本操作。二、实验原理1什么是荧光?荧光是光致发光。当物质的分子接受光子能量被激发后，从激发单重态的最低振动能级返回基态时发射的光。荧光与结构的关系3荧光与环境因素的关系取代基的性质、溶剂的极性、体系的 pH和温度。维生素B2(Vitamin B2),别名：核黄素(Riboflavin , RF),是橘黄色无臭的针状结晶，分子式:C17H20N4O6,相对分子量为:376.37 。因其色黄配含有核糖醇，故称为核黄素。结

2、构式为:R易溶于水而不由于分子中有三个芳香环，具有平面刚性结构，因此它能够发射荧光。维生素 溶于乙醛等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。维生素R溶液在430440nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535nm附近。维生素 区在pH= 6 7的溶液中荧光强度最大，而且其荧光强度与维生素&溶液浓度呈线性关系，因此可以用荧光光谱法测维生素B2的含量。维生素 B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为另一物质一一光黄素，光黄素也是一个能发荧光的物质，其荧光比维生素&的荧光强得多，故测维生素8的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。在稀溶液中，荧光

3、强度F与物质的浓度c有以下关系：F= 2.303 I 0 e bc当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系：F=Kc这是荧光光语法定量分析的依据。三、仪器与试剂1、主要仪器：荧光分光光度计（日立F 7000）;比色皿：1cm；容量瓶：50mL移液管：5mL2、试剂：核黄素；维生素 B药片四、实验步骤1 . 溶液的配制标准溶液的配制：精确称取2 mg核黄素（VB2）,用超纯水于50ml棕色容量瓶中定容待测液的配制：将维生素R药片研磨成粉末状，精确称取2mg,用超纯水于50ml棕色容量瓶中定容；2 .扫描激发光谱和荧光光谱3 .标准曲线的绘制在室温条件下，分别吸取1.0、2.0、3.0

4、、4.0、5.0标准溶液于50ml棕色容量瓶中定容。用超纯水作空白试样，测定溶液荧光强度值。用所测结果绘制荧光强度（F）对浓度（c）的曲线。4 . 待测液VB2含量的测定及数据处理五、实验结果及数据处理mt 142.0 Dta: 43.1 GNd. Slannm ApeH(nm| End(nm| Heg州 DataValle3rl m)VAllep(Odla).46.7.Q 4力1 Do o o o.D o o oQ Q £ &GO 7 4 12 3 4 512 3 d-入 ex = 442nm6 11 150704O.O.Qo o oR R 口 7 9 03 6日928.7

5、 18 22.I3 so o Q B-Ed ,二I:!:o o o X24.08.3 5 7o o Q O.0.S.303788入 em 524nmVB2标准曲线及药片中VB2含量的测定（大浓度）5 7 0 2 84 6 5 5 716,30.必见图SampH-a判之0Cone (mg/rnL)由p Cwig |SD |CV席CfeliibEli中小 |ls:t ordAr二JConeh£/武Twee cnrvie throudi zero Cfriic - E WtttJnit共n口Hat|4£ OQOAJO：卜2 5mu p 钩 816K)Q 99S5H2-2 9990

6、9130013SI.3B5VB2标准曲线及药片中VB2含量的测定（稀释到中间浓度）Q41E 0.171 0.493 0.257 -O.5A3-Q9557 013917 1.1260 5864 1 14323D.E7344.904研525阳两0040融晒0003.21a,27猊站mg/nL: Z3.1Q2 Dala 37.25Swip.Nq.4420/524.0C (rns/mL)Avg Cone ISO I CVllX,1 -W2e.%7六、总结、讨论1、实验注意事项：(1)配制标准溶液时，为了减少仪器偏差，取不同体积的同种溶液应用同一移液管。(2)因荧光是从石英池下部通过，所以拿取石英池时，

7、应用手指捏住池体的上部，不能接触 下部。清洗样品池后，应先用吸水纸吸干四个面的液滴，再用擦镜纸往同一方向进行轻轻擦拭。(3)在使用荧光分光光度计时，须按照既定程序进行。在测定系列标准溶液的浓度和荧光强 度时，必须按顺序放入测定。(4)在测试样品时，应注意样品的浓度不能太高，否则由于存在荧光猝灭效应，样品浓度与 荧光强度不呈线性关系，造成定量工作出现误差。2、此次实验，影响标准曲线的线性的主要因素是配制溶液时，操作是否规范、标准。七、思考题1、试解释荧光光度法较吸收光度法灵敏度高的原因？答：由于现代电子技术具有检测十分微弱光信号的能力，并且荧光强度与激发光强度成正比， 提高激发光强度也可以增大荧光强度，使测定的灵敏度提高；而吸收光度法测定的是吸光度，不管 是增大入射光强度，还是提高检测器的灵敏度， 都会使透射光信号与入射光信号以同样的比例增大, 吸光度值不会改变，因此灵敏度