C-微生物检验中的无菌操作.

1、 、无菌及无菌操作的概念 无菌是指在环境中一切仃牛命活动的微牛物的营 养细胞及其芽抱或砲子都不存在的状态。 无菌操作是指在无菌环境下进行的细胞传代昭养、 植物组织培养、细菌接种等操作，1的足防十微 生物进入人体组织或其他无菌范围。 无菌操作是微生物检测中的重要概念，只仃仙 养基、检测设备等处于无菌的前提下，样品才对 能不受污染,才可能实现微生物检测的准确、可 罪。 二、无菌操作及注意事项 m K微生物检验应在无菌室（捋洁净室，局部达到 100级）内进行。应注意无菌室的日常清洁，用 2%-5%的來苏尔擦洗桌面、台面及墙壁，何:次便 用前以紫外线灯照射30分钟进行空气消毒。 2、检验人员进入无菌室

2、前需先洗手，并绥冲空 内更换洗净并经紫外线灯照射过的工作衣、帽、 鞋。禁止在无菌室外使用工作衣、帽、鞋。3、检验工作中,当样品或无菌物打开后,操作者 应与样品及无菌物保持一定距离；未经消毒的物 品及手绝对不可直接接触样品及无菌物；样品及 无菌物在空气中暴露时间不可过长；取样时必须 使用无菌工具（如银子、勺了等），手臂不可代 于样品及无菌物上方；从无菌容器中或样昭屮取 出之物虽未被污染，也不可放回原处。 4、瓶口、袋口开启前用75%酒粘棉球反复擦拭至 少2 3遍（瓶口由中央到边沿、袋口由上至下擦 拭）。 B- 5、 无菌物品应分类放置于固定地点， 并疋期检査 （般两个星期重新灭菌一次）， 的物品

3、混放在一起。 6、 禁止在无菌室内谈笑，尽量减少走动。 7、 定期作实验室沉降菌计数，以检查无閑实矗空 微生物生长繁殖动态。 三、无菌操作的检验 苴接方法空白对照 根据食品卫生微生物学检验菌落总数测定 (GBAT 4789.2-2003),将营养琼脂培养基倾入 加有ImL灭菌生理盐水灭菌培养皿内作空白对照。 空白对照的结果至少可以说明三个问题: (1) 、实验所使用的器皿灭菌是否彻底,储存是 否合理得当。 (2) 、无菌室的空气条件是否达到标准。 (3) 、操作人员的无菌操作技术是否规范。 通过空门対!救川j i接检验实验器IH1 实验条件以 及实验人员是否符合无菌操作的规定。如果从空 白对照

4、中看出无菌操作不规范，通过实验进一步 找出原因所在，最终达到规范的无菌操作。连云港，2011年11月 二、二、样品的运输、接收和保行 五、 食品微/|二物检验样品的米集和制备 取样是抬在一定质量或数量的产品中，取个或 多个代表性样品，用于感官、微生物和理化检验 的全过程。样品必须对取样的藥个产品或批最具 、四、主要内容 冇代衣牲。样品的大小和多少应能满足在需要时 进行重复分析的需要。样品到达实验室时的状况 应能反映山取样时产品的真实情况。 1、取样准备工作 S（I）取样工具 口取样匸具首先要达到无菌的要求，其次要能满足 取到有代表性的样品。对取样工貝和一些试剂材 料应提前准备、灭菌。如果使用不

5、合适的采集匸 县苛能会破坏样品的完整性, 使样品毫无 意义。 应根据不同的样品特征和取样环境，对取样物品 和试剂进行事先准备和灭菌等工作。实验室的匚 作人员进入车间取样时，必须立刻更换丄作服， 以避免将实验室的菌体带入加丁环境，造成产品 加工过程的污染。 （2）、取样计划 要保证样品能够代表整批产品，其检测结來应具 廣统计学冇效性,于是便提出了 “取样计划”的 概念。通过“取样计划”能够保证每个样品被抽 取的机率相等。取样计划通曲指以数理统计为以 础的取样方法，也叫统计取样。取样计划通常要 根据生产者过去的工作情况来选择。反映个产者 匚作情况的取样水平（即加严、正常或放宽）要体 现在计划当中，

6、还应包括被测产品被接致或被扌I 绝的标池。 目前食品检验工作中使用较多的取样计划包扌舌计- 数取样计划（二级、三级）、低污染水平的取样计 划以及随机取样等。 BA取样计划的制定原则 食品检於的特点是以一小份样品的检验结果来评 判大批食品的质量，因此，样品的代表性至关 重要。要保证样品的代表性，首先要有 会科学 的取样方案，其次使用正确的取样技术，并在样 品的保1?和运输过程中保持样品的原有状态。 . s .B、取样计划的类型 取样计划的类型-般分为非随机取样计划和随机 取样计划。 工作人员通常希望通过随机収样扶得 样品。 另外，当整批食品贮存条件和同，采川随 机取样比较合理。在现场取样时,可利

7、川随机取 样表进行随机取样。随机取样表系川计算机随机 编制而成。 随机取样般分为简单随机取样、分 层随机取样、整群取样、系统取样和混介取样。 C、取样标准 H前国内外关于取样的标准很多，但无论哪种标 准都只有一个目标：即获得具有代表性的样品， 并通过对样品的检测得到能够代表整批产品的检 验结果。取样时应根据不同的产品类型、产品状 态等选择不同的取样方法和标准。 (2)、生产过程中的取样 划分检验批次，应注意同批产品质量的均一件;如 用固定在贮液桶或流水作业线上的取样龙头取样 时，应事先将龙头消毒；当用自动取样器取不需 耍冷却的粉状或固定食品时，必须履行相应的管 理办法，保证产品的代表性不被人为

8、的破坏。| 中，取样时，可连续或间歇搅拌，对丁佼小的容 器，可在取样前将液体上下颠倒，使其完金混匀。 鮫大的样品(100500m 1)要放在已灭菌的容器屮 送往实验室， 实验室在取样检测之前应将液体再 彻底混匀一次。 B (4)、固体样品 依所取样品材料的不同，所使用的工具也不同。 固态样品常用的取样工具有灭菌的解剖丿J、勺/、 肉类、鱼类的食品既要在表皮収样又要在深层取 样。深以取样时要小心不要被表面污染。有些食 品，如鲜肉或熟肉可用灭菌的解剖刀或创了取样； 冷冻食品町在未解冻的状态下可用锯子、木钻或 电(般斜角钻入)等获取深层样品；全蛋粉等粉 末状样品取样时，可用灭菌的取样器斜角插入箱 底

9、，样品填满取样器后提出箱外，再用灭菌小勺从 上、中、部位取样。 (5)、表面取样 通过惰性载体叮以将表面样品上的微生物转移到 介适的培养基中进行微生物检验， 这种惰性载休 既不能引起微生物死亡，也不应使其增殖。这样 的载体包括清水、拭子、胶带等。取样后，要仗 微丫物长期保存在载体上，既不死亡又不增殖I- 分困难，所以应尽早地将微生物转接到适当的培 养基中。软木钻、 (7)、空气样品的釆取 空气的取样方法有：直接沉降法和过滤法。 在检验空气中细菌含量的各种沉降法中，平IIIL法 是最早的方法之一， 到目前为Ils这种方法判断 空气中浮游微宀物分次自沉现象方廁仍貝仃-足 的意义。 过滤法是使定量的

10、空气通过吸收剂, 剂培养，计算出菌落数。然后将 6)、水收 二、包装密封和标识 1、包装密封 为保证样品的完整性， 装有样品的包装物应进行 封门，以证实其可靠性，即从取样地点至到达实 验室这段时间不发生任何变化。可采用自黏胶、 牯制的纸黏着剂封口，封口处应留出填写F1期、 检於人员和货主签字的地方。还可使用其他的粘 结剂,如石蜡等，然后盖上专丿IJ的印章。 、样品的标志 取样过程中应对所取样品进行及时、准确的标记。 取样结束后，应由取样人写出完整的取样报:仁 样品应尽可能在原有状态下迅速运送或发送到实 验室。保存的样品应进行必耍的清晰的标记，內 容包括:样品名称、样品描述、样品批号、企业 名称

11、、地址、取样人、取样时间、取样地山、取 样温度（必要时）、测试目的等，标记丿、厂乍同并 防水性，确保字迹不会被擦掉或脱色。 二、样品的运输、接收和保存 1、样品的运输 (1) 、取样结束后应尽快将样品送往实验室检验。 如不能及时运送,冷冻样品应存放在15 C以卜的 冰箱或冷库内；冷藏和易腐食品存放在()4 C冰 箱或冷藏库内；其他食品可放在常温暗处。 (2) 、样品的运输过程必须有适为的保护州施 (如密封、冷藏等)，以保证样品的微住物指标不 发生变化。运送冷冻和易腐食品应在包装容器内 加适量的冷却剂或冷冻剂,但样品不町与冷却剂 或冷冻剂(3) 、如不能由专人携带送样时，也町托运。托 运前必须将

12、样品包装好，应能防破损，防冻结或 防易腐和冷冻样品升温或融化。在包装上应注叨 “防碎”、“易腐”、“冷藏”等字样。 (4) 、做好样品运送记录，写明运送条件、EI期、 到达地点及其他需要说明的情况，并山运送人签 字。 (5) 、运送水样时应避免玻璃瓶摇动，水样溢出 后又回流瓶中，从而增加污染。 2、样品的接收 在接收样品时，实验室应与送样人兵同相互确认 样品与委托单上的内容是否一致。确认内容一般 包括:品名；检验目的；检骑项形状和包装状 况；抽样数量；抽样日期及送达日期;抽样地点; 随货样附带的许可申请单编号；生产国或者生产 厂家名称；抽样者的单位、姓名及有无封印;其 他搬运、储存、检验时的注

13、意事项。 3、样品的保存 1）、易腐食品 要用保温箱或采取必耍的措施使样品处丁低温状 态（04 C）,应在取样后尽快送至实验室， 并保 止样品送至实验室时不变质。易腐的非冷7东食品 检测前不应冷冻保存（除非不能及时检测）。 如需要短时间保存,应在04 C冷藏保存,但应 尽快检验（一般不应超过36h）,因为保心时间过氏 会造成食品 I 嗜冷细菌的生长和嗜11】温细m的 a（2）、冷冻食品 要用保温箱或采取必要的措施便样品处于冷冻状 态，送至实验室前样品不能融解、变质。冰冻食 品要密闭后置于冷冻冰箱（通常为-18 c）,检测询 要始终保持冷冻状态，防止食品暴露在二氧化碳 气体中。 （3）、干制食品

14、 应用塑料袋或类似的材料密封保存，注意不能便 其吸潮或水分散失，并耍保证从取样到实於空进 行检验的过程中其品质不变。 （4）、其他食品 也应川犁料袋或类似的材料密封保存，注意不能 使其吸潮或水分散失，并耍保证从取样到实验空 进行检验的过程中其品质不变。必要时町使用冷 藏设备。 实验室样品的制备是微生物检验的重要环节，是 获得较高准确性和良好检验结果的基础。 1、样品制备的一般要求 由丁食品种类繁多， 在实际微生物检验中尽町能 采川统的样品制备方法，但是，对于许多特殊产 品來说，由于产品本身的物理状态（如干品、粘稠 度咼的产品等）、样品屮抑制物质的存在（如大蒜 制品、洋葱制品、咸鱼等）或酸性等原

15、因，则需2 釆用特殊的样品制备方法。 样品制备常用器具包括:均质器及均质杯、扌I打器 及拍打袋、试管、刻度吸管、微量移液器、玻璃 珠、检测天平、水浴锅、玻璃捧、酒粘灯、银了、 刀子、托盘等。四、样品的制备 2水产品及水产制品的制备要求 (1)、对于冷冻产品。置丁实齡室1827 5温 度卜-最多3h,而在2 2 C的温度卜，不得超过 24ho在接收样品后，实验室应尽快地进行检於。 不同食品成分的产品)，为避免温度过高，均质 询，需将样品切碎或磨碎，但均质时间不超过 Imino (3) 、对于液态或者非粘稠的产品。检验前为使 样品屮的微生物均匀分布，用手可机械摇动样胡o (4) 、对于异质产品。取样时应取到每种组分屮 仃代表性的部分，也可以将超过整个样品均质。如來 禽要把样品切碎或者碾碎，为避免温度的升高，这个 过程不得超过1 min。 (5) 、对于酸性样品。重要的是在酸性样品的制 备过程中要调整pH值至中性。 (6)、对于高脂类食品(脂肪含量在20%以上)。 应根据脂