DNS法测还原糖

1、3, 5-二硝基水杨酸溶液与还原糖溶液共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范实验围内反应的还原糖的量和棕红色物质颜色深浅的程度成一定比例关系，可测定生成化合物的吸光度，由标准曲线反推出还原糖的浓度。操作简便，快速，杂质干扰较少，适于生物制氢中还原糖含量的测定。显色条件包括：波长选择，显色剂用量，显色时间，溶液酸度，显色温度，有机络合物的稳定性及共存离子的干扰等。此次实验选择波长选择，显色剂用量，显色时间，溶液酸度进行实验。一. 试剂的配置DNS 试剂：称量 18.1992g酒石酸钾钠溶于 50ml 蒸储水中， 加热， 趁热加入 0.6313g3, 5-二硝基水杨酸(DNS)，另配制 2mo

2、l/lNaOH溶液，取 26.2ml 加入上述溶液中，称量 0.5128g 苯酚和 0.5064g无水亚硫酸钠移入配置好的溶液中，蒸储水定容至100ml，该试剂避光保存 710天。葡萄糖标准溶液(1.0*10-2mol/l ):准确称量 0.1990g无水葡萄糖，待溶解后定容至100ml容量瓶中。葡萄糖标准溶液(1.0*10-3mol/l ):取 10ml 上述 10-2mol/l溶液，稀释至 100ml 容量瓶中。葡萄糖标准溶液(1.0*10-4mol/l ):取 10ml 上述 10-3mol/l溶液，稀释至 100ml 容量瓶中。二. 显色条件的选择1.波长选择取 5 支试管按下表加相应

3、溶液，沸水浴 15min,均加入 7ml 水定容为 10ml,流水冷却，在不同波长处分别进行扫描。试管号01234DNS/ml 02221水/ml31糖/ml00112图 1 为不同条件下溶液的波长 一一吸光度图(水调零)。由图 1可以看出白色与绿色曲线几乎重合，说明 0.0001mol/l葡萄糖溶液与 DNS 反应生成的氨基化合物极少，用 比色法很难区分，故此法所能够测量的葡萄糖浓度应大于0.0001mol/l。由 DNS + H2O曲线可以看出当波长大于 530nm时，DNS 的吸光度已经很小，这时 DNS 对反应生成的氨基化合物吸光度的影响可以忽略。wavelengh/nm图 2 为 4

4、 号试管稀释 10倍后波长扫描图4 号试管用高浓度的葡萄糖溶液和少量的DNS 试剂反应，使生成大量的氨基化合物，但其吸光度太大，仪器无法测定，故将其稀释10倍。以水调零未出现最高峰，以 DNS 调零时（图 2）在 540nm处有最高峰，这说明在该浓度下，DNS 可能会对氨基化合物吸光度的测量有较大影响，故测量时以 DNS 调零较准确。选择 540nm作为最佳吸收波长。Fig.12.DNS 用量选择取试管按下表加相应溶液，沸水浴 30min,加入适量水使定容为10ml，流水冷却，以 1号试管中 DNS 溶液为参比，在 540nm处测吸光度。试管号01234567DNS/ml0211.522.53

5、3.5水/ml3111*10-4mol/l葡萄00111111DNS 试剂（一）称取 3,5-二硝基水杨酸 3.15g（化学纯），加水 500ml,搅拌 5s,水浴至 45 C.然后逐步加入 100ml氢氧化钠溶液（3.4）,同时不断搅拌，直到溶液清澈透明（注意：在加入氢氧化钠过程中，溶液温 度不要超过 48 C.）.再逐步加入四水酒石酸钾钠 91.0g,苯酚 2.50g和无水亚硫酸钠 2.50g.继续45 C水浴加热，同时补加水 300ml,不断搅拌，直到加入的物质完全溶解.停止加热，冷却至室温 后，用水定容至 1000ml.用烧结玻璃过滤器过滤.取滤液，储存在棕色瓶中，避光保存.室温下存

6、放 7天后可以使用，有效期为 6个月.DNS 试剂（二）只有 3,5-二硝基水杨酸,氢氧化钠，酒石酸钠钾三种物质。PS:网上找的，有抄袭嫌疑，不用给币了 :D其中酚为蛋白质变性剂，具有强腐蚀性，不同配方用量也不一样，若用，当小心，hitzbz（站内联系TA）1. 6.5gDNS 溶于 200-300ml 去离子水2. 配制 2mol/l NaOH 溶液 325ml3. 45g 甘油（丙三醇）三者混合定容至 1000ml 即可。标线做法：标液浓度：1.0mg/ml依次取 0.0, 0.1,02,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.8,0.9, 1.0 ml 标液与一定量的去离子水，混合至

7、1.0ml加入 1.0mlDNS 溶液，沸水 10min冷却后，加入 3.0ml 水以 0.0ml 标液那组为空白对照，测定即可得标准曲线DNS容液测糖含虽分类：实验基础知识2007.2.3 10:20作者：sunsaley |评论：0 |阅读：2451仪器和设备分析大平：感量。.lmg;恒温水浴锅可控温 40 士 1C;721 分光光度计；容量瓶:100mL ;移液管：ImL,2mL,lOMI。C5 试剂和溶液C5.1 to%(v/v) 磷酸盐缓冲液(pH= 6.8):配制与 B3.1相同C5.2 DNS 溶液溶解 1 g3 ,5 一二硝基水杨酸、。2g苯 P,O.03 g 亚硫酸钠、lg氢

8、氧化钠、20g 酒石酸钾钠于蒸储水中并加热，冷却定容到 100m1_,贮于棕色瓶内，一周后用于作标准曲线(每次配制后要重新作标 准曲线)。C5.3 1%(m/m)淀粉缓冲液溶解 1g可溶性淀粉于煮沸的蒸储水中，再煮沸 Imin，冷却，加 lOmL1 0%磷酸盐缓冲液再用蒸储水定容到 99mL(用量筒定容)。C6 标准曲线的绘制(采用 DNS量法)准确称取在 105A- 110C 干燥后的葡萄糖 50mg 用蒸储水溶解定容到 50mL 即为 lmg/mL 葡萄糖液，按下表比例在试管中操作后，开小火煮沸15min,冷却，加入 10.5m I蒸储水，在 721 分光光度计550nm波长处比色，读光密度值 0.D值填入下表。第一列编号mg第二列 lmg/mL糖液量m L第三列蒸储水量m L第四列 DNS 量m L第五。列 0.D 值0 00