植物组织中可溶性糖含量测定方案

1、植物组织中可溶性糖含量的测定一蕙酮比色法一、原理糖类在浓硫酸作用下经脱水反应生成糠醛或羟甲基糖醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛 与蕙酮（C14H10O）脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。该物质在630 nm处有最大吸收，在150 g/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。该方法的特点是几乎可以测定所有的糖类（包括单糖：戊糖、已糖；多糖：蔗糖、 淀粉、纤维素），所以用该方法测出的糖类含量是溶液中全部可溶性糖类含量。二、仪器、试剂和材料1.仪器：电子天平，电热包温水浴锅，分光光度计，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：（1）蕙酮浓硫酸试剂：1.0 g蕙酮溶丁100 mL浓H2SO4中，贮藏丁棕色瓶中

2、（当日配置）（2）浓硫酸3.材料：草莓新鲜果实三、实验步骤1、标准曲线的制作1、1 1%蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80 C下烘干至包重，精确称取1.000g。加 蒸僻水溶解，转入100mL容量瓶中，用蒸僻水定容至刻度。1、2 100ug/mL蔗糖标准液：精确吸取1%蔗糖标准液1mL至100mL容量瓶中， 加水至刻度。取10mL刻度试管11支，从010分别编号，按下表一次加入蔗糖标准液 和蒸僻水。管号01、23、45、67、89、10100ug/mL庶糖标准液（mL）00.20.40.60.81.0蒸僻水（mL）1.00.80.60.40.20庶糖浓度（启/mL）0204060801001、3按

3、顺序依次向试管中加入5mL B酮浓硫酸试剂，充分振荡，立即将试管放入96C沸水浴中，每管均保温3min,取出后流水冷却后取出至室温下放置15min,以空白 作参比，在630 nm处测其吸光度，以吸光度为横坐标，以糖浓度为纵坐标，绘制标准曲 线，并求出标准线性方程。2、 可溶性糖提取 称取具有代表性样品的可食部分100 g,放人组织捣碎机中，迅 速捣成匀浆（或研磨），称取0.50 g浆状样品，共三份。分另U放入3支试管中，加入10 mL蒸僻水，塑料薄膜封口，丁沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤到50 mL容量瓶中，用蒸僻水反复洗涤试管及残渣并定容至刻度。吸取上述1.0mL提取液至10m

4、L容量瓶中，用蒸僻水定容。3、显色测定吸取稀释后的样品提取液1.0mL至10mL刻度试管中，重复三次，按 顺序依次向试管中加入5mL蕙酮浓硫酸试剂，充分振荡，立即将试管放入96 C沸水浴中，每管均保温3min,取出后流水冷却后在室温下放置15min,在630 nm处测其吸光 度。四、结果计算C XV总X D样品含糖量（%） = -% x 100W X V测x 106其中：C在标准曲线上查出的糖含量（四），V总提取液总体积（mL）,V测 测定时取用体积（mL）,D稀释倍数，W样品重量（g）,106样品重量单位由g换算成 四的倍数参照李合生 植物生理生化试验原理和技术植物组织中可溶性糖测定流程取蕙

5、酮1g,溶丁50mL乙酸乙酯中，贮藏丁棕色瓶中（蕙酮乙酸乙酯试剂）取1.000g蔗糖加蒸僻水溶解，转入100mL容量瓶中，加0.5mL浓硫酸，定容（1 %蔗糖标准液）取上述1%蔗糖标准液1mL至100mL容量瓶中，定容（100ug/mL蔗糖标准液）取10mL刻度试管11支，从010分别编号，按下表一次加入蔗糖标准液和蒸僻水管号01、23、45、67、89、10100ug/mL庶糖标准液（mL）00.20.40.60.81.0蒸僻水（mL）2.01.81.61.41.21.0庶糖含量（启）020406080100按顺序依次向试管中加入0.5mL蕙酮乙酸乙酯试剂和5mL浓硫酸，充分振荡，立即 将试管放入沸水浴中，每管均保温1 min,取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630 nm处测其吸光度，以糖含量为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，并求出标准 线性方程。称草莓果实100 g,制成匀浆，称取0.100.30 g浆状样品，共三份。分别放入3支 试管中，加入510 mL蒸僻水，塑料薄膜封口，丁沸水中提取30min（提取2次），提取 液过滤到25mL容量瓶中，用蒸僻水反复洗涤试管及残渣并定容至刻度。吸取样品提取液0.5mL至10mL刻度试管中，重复三次，加蒸僻水1