miR 181b与炎症关系实验解读

1、MiR-181b and NF-KB 2014-9 Chen yu In vitro and in vivo study 细胞实验一：细胞实验一：miR-181b对对HUVEC功能影响功能影响 1、TNF-影响影响miR-181b表达表达 (A) Real-time qPCR analysis of miR-181b in response to TNF- (10 ng/ml) in HUVECs. 短时间作用短时间作用 不同时间点作用不同时间点作用 2、TNF-作用下，作用下，miR-181b影响影响HUVEC粘附因子表达粘附因子表达 蛋白、蛋白、mRNA、 细胞上清细胞上清 三个层面证明三

2、个层面证明 ICAM-1、VCAM-1、E-selectin是影响是影响ECs与与WBC粘附的主要分子粘附的主要分子 3、TNF-作用下，作用下，miR-181b影响细胞粘附影响细胞粘附 细胞实验二：细胞实验二：miR-181b靶点的确定靶点的确定 1、TNF-(+)(-)，WB筛查靶点筛查靶点 只使用了只使用了miR-181b-m及对照及对照 2、荧光素酶报告系统实验、荧光素酶报告系统实验 1、仅使用、仅使用miR-181b ；2、载体使用浓度梯度、载体使用浓度梯度 3、用真核细胞表达载体将、用真核细胞表达载体将miR-181b导入细胞导入细胞 3、miR-181b与靶点结合区域的确认与靶点

3、结合区域的确认 (D) Normalized luciferase activity of a reporter containing 3 UTR of importin-3, predicted miR-181bbinding sites, or mutated miR-181bbinding sites. The reporter was cotransfected with either pcDNA3.1 empty vector or pcDNA3.1miR-181b. *P 0.05. 4、miRNP-IP分析靶点分析靶点mRNA富集富集 (E) miRNP-IP analysis

4、of enrichment of importin-3 mRNA in HUVECs transfected with miRNA negative control or miR-181b mimics. *P 0.01. 细胞实验三：细胞实验三：miR-181b对下游通路的作用对下游通路的作用 1、荧光素酶报告系统检测、荧光素酶报告系统检测miR-181b对对NF-B及及VCAM1影响影响 TNF-(+)(-)条件下，条件下，HUVECs中中miR-181b对对 NF-B活性及活性及VCAM1promoter活性的影响活性的影响 2、miR-181b通过作用于靶蛋白影响通过作用于靶蛋白影响N

5、F-B活性活性 (F) Luciferase activity of reporters containing the NF-B concatemer in cells transfected with miRNA negative control or miR-181b mimics in the absence or presence of importin-3 gene lacking its 3 UTR. *P 0.05. 3、miR-181b对对HUVECs NF- B活性的影响活性的影响 4、TNF-(+)，miR-181b影响影响NF-B下游下游mRNA表达表达 瞬时转染瞬时转染 稳定转染稳定转染 3、对下游蛋白表达的影响、对下游蛋白表达的影响 In vivo 1：miR-181b对粘附因子表达的影响对粘附因子表达的影响 VCAM-1 mR