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1、专题二 微生物的培养与应用 综合检测一、选择题 (每小题 2 分,共 20分) 1下列关于微生物营养物质的描述,正确的是 ( ) A同一物质不可能既作碳源又作氮源 B除水以外的无机物,仅可为微生物培养提供无机盐 C凡是碳源都能提供能量 D无机氮源也能提供能量 解析:对异养微生物来说,含 C、H、O、N 的化合物既是碳源,又是氮源, 如牛肉膏, A 项错误; CO2和 N2是无机物,也是某些微生物的碳源和氮源, B项 错误;有机碳源能提供能量,无机碳源不能提供能量, C 项错误;自然界中一些微 生物如硝化细菌,可以以无机氮源合成细胞物质,同时通过氧化外界无机物获得 生长所需能量,叫做化能合成作用

2、, D 项正确。答案:D 2稀释涂布平板法是微生物培养中的一种常用的接种方法。下列相关叙述 错误的是 ( )A操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释B需将不同稀释浓度的菌液分别涂布到固体培养基表面 C不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个的菌落 D操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理 解析:稀释涂布平板法,包括系列稀释和涂布平板两个过程,涂布平板之前 需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释, A 项正确;涂布平板时,需要将不同稀 释度的菌液分别涂布到固体培养基表面, B 项正确;只有稀释度足够大的菌液才能 在培养基表面形成单个的菌落, C 项错误;操作过程中对培养基和涂布器等均需进

3、行严格灭菌处理,以防止杂菌污染, D 项正确。答案:C32019 ·四川高二期末 下列与分离分解纤维素的微生物实验有关的说法, 错误的是 ( )A鉴别培 养基 中的 CMCNa 能为纤维素分解菌提供碳源B纤维素分解菌的选择培养基只能以纤维素粉作为唯一碳源C两种刚果红染色法筛选出来的目的菌不一定都能分解纤维素 D实验可以通过是否产生透明圈来筛选能分解纤维素的目的菌 解析: CMCNa 是天然纤维素经化学改性后得到的纤维素衍生物,是纤维 素的羧甲基醚化物,能为纤维素分解菌提供碳源, A 项正确;纤维素分解菌的选 择培养基不一定选择纤维素粉作为唯一碳源,可以选择那些富含纤维素的物质, 如滤

4、纸等,B 项错误;两种刚果红染色法筛选出来的目的菌不一定都能分解纤维素, 可能还会生长一些能利用纤维素分解的产物 葡萄糖的微生物, C 项正确;通过 分析可知,实验可以通过是否产生透明圈来筛选能分解纤维素的目的菌, D 项正 确。答案:B4下列有关微生物培养的说法,正确的是 ( )A 制备固体培养基的操作顺序为计算、称量、溶化、灭菌、调 pH、倒平板 B筛选纤维素分解菌时,要将土壤稀释液接种到含有纤维素的固体培养基C配置培养不同微生物的培养基时都要将 pH 调至中性或微碱性D在无氮培养基中加入酚红指示剂可用来鉴定尿素分解菌解析: 制备固体培养基的操作顺序为计算、称量、溶化、调 pH、灭菌、倒

5、平板, A 项错误;纤维素分解菌可以将纤维素分解,而其他微生物不能,因此筛 选纤维素分解菌时,要将土壤稀释液接种到含有纤维素的固体培养基, B 项正确; 不同的微生物培养需要的 pH是不同的,如培养细菌时需将培养基的 pH 调至中性 或微碱性,C 项错误;在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂可用来鉴定 尿素分解菌, D 项错误。答案:B5关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述错误的是 ( ) 将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯溶解 等培养基冷却 40 左右时进行倒平板待平板冷却凝固 510 分钟后将平板倒过来放置操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 牛肉膏和蛋白胨都能提供碳源、氮源、

6、磷酸盐、维生素 A BC D解析: 将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯,加入少量的水,加热, 正确;待培养基冷却至 50 左右时,在酒精灯火焰附近倒平板, 错误;待平板 冷却凝固约 5 10 min 后,将平板倒过来放置,使皿盖在下,皿底在上, 正确; 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作顺序为计算、称量、溶化、灭菌、倒平板, 错误;蛋白胨只能提供碳源、氮源、维生素, 错误。答案:D62019 ·西宁市海湖中学高二月考 下列有关培养基配制原则的叙述,不正 确的是 ( )A异养微生物的培养基至少要有一种有机物 B任何培养基都必须含有水、碳源、氮源、无机盐及生长因子 C配制培养基时,要注意

7、各种营养物质的浓度和比例 D微生物的生长除受营养因素影响外,还受到 pH、氧、渗透压的影响 解析:对于异养微生物,其不能利用无机碳源,只能利用含碳有机物作为碳 源,因此对异养微生物的培养必须含有有机物, A 项正确;虽然各种培养基的具 体配方不同,但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。有些微生物可以固定空气 中的碳元素或者氮元素,因此不需要培养基中额外添加碳源或者氮源。自养微生 物一般不需要生长因子,有些异养微生物需要生长因子,因此生长因子不是共有 的,B 项错误;根据微生物种类及培养目的不同,其培养基的配方一般不同,因此 需要注意不同微生物所需各种营养物质的浓度和比例, C 项正确;微生物的生

8、长不 仅受营养因素如碳源、氮源、无机盐及生长因子的影响外,还受外界因素如pH、氧、渗透压等的影响, D 项正确。答案:B72019 ·武汉市钢城第四中学高二期中 下列有关土壤微生物的培养和分离 的叙述,正确的是 ( )A土壤的称取和土壤溶液的稀释都应该在火焰旁操作B用于培养的培养基均必须含有碳源、氮源、无机盐和水C在适宜条件下培养,某培养基上的大肠杆菌将呈“ J”型增长D平板划线法一般划五个区域,要先将菌液稀释成 5 个不同浓度梯度 解析:土壤的称取和土壤溶液的稀释都应该在火焰旁操作,防止杂菌污染, A 项正确;不是所有培养基都必须含有碳源、氮源、无机盐和水,比如自养微生 物不需要碳

9、源、固氮微生物不需要氮源, B 项错误;在适宜条件下培养, 某培养基 上的大肠杆菌将呈 “S”型增长,不是“J”型增长,C 项错误;稀释涂布平板法需 要将菌液稀释,但是平板划线法一般不需要将菌液稀释, D 项错误。答案:A82019 ·武汉市钢城第四中学高二期中 下列关于配制培养基的有关叙述中, 正确的是 ( )A制作固体培养基必须加入琼脂B培养基溶化后,要先调节 pH 再灭菌C氮源主要是为微生物提供能量D牛肉膏主要为微生物提供氮元素 解析:作固体培养基时必须加入凝固剂,琼脂是常用的凝固剂,但不是唯一 的凝固剂, A 项错误;培养基溶化后,在灭菌之前要先调节 pH,这样做既能使培 养

10、基 pH 均匀,又能避免培养基被污染 (和灭菌后调节 pH 相比 ),B 项正确;氮源 主要是作为微生物蛋白质和核酸的原料, C 项错误;牛肉膏主要为微生物提供碳源、 磷酸盐和维生素, D 项错误。答案:B92019 ·黄陵中学高新部高二期末 关于微生物的实验室培养,下列叙述错 误的是 ( )A为避免污染,实验操作应在酒精灯火焰上进行 B琼脂是从红藻中提取的多糖,在配制培养基中用作凝固剂 C接种环、接种针、试管口等常使用灼烧灭菌法 D试管、烧杯、培养基等可以用高压蒸汽灭菌法灭菌 解析:为避免污染,实验操作应在酒精灯火焰附近进行, A 项错误;琼脂在 配制培养基中用作凝固剂, 它是从红

11、藻中提取的一种多糖, B 项正确; 常用灭菌方 法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌法,接种环、接种针、试管口等常使用 灼烧灭菌法, C 项正确;培养基一般采用高压蒸汽灭菌法灭菌,试管、 烧杯等也采 用高压蒸汽灭菌法灭菌, D 项正确。答案:A102019 ·天津一中高二期末 下列对不同微生物培养过程的叙述中,正确的 是()A细菌培养时将 pH 调至酸性B霉菌培养时将 pH 调至中性或微酸性C培养厌氧微生物时需要提供无氧环境条件D培养乳酸杆菌时在培养基中不需要添加维生素解析:细菌培养时将 pH 调至中性或弱碱性, A 项错误;霉菌培养时将 pH 调 至酸性, B 项错误; 氧气会抑制

12、厌氧微生物生长, 故培养厌氧微生物时则需要提供 无氧环境条件, C 项正确;培养乳酸杆菌时在培养基中需要添加维生素, D 项错误。答案:C二、非选择题 (每小题 10 分,共 80分)112019 ·安徽毛坦厂中学高二期末 以稻草为原料,通过纤维素分解菌的作用可生产葡萄糖以用于开发新型能源。结合所学知识,回答下列问题:(1) 纤维素分解菌产生的纤维素酶首先将稻草纤维素分解为 ,最终生成葡萄糖。(2) 研究人员分离分解纤维素的细菌时, 使用的选择性培养基的营养成分特点 是 。对配制的培养基需采用 法灭菌。(3) 分离纯化纤维素分解菌时,可采用平板划线法,在第二次及以后划线时, 总是从上

13、一次的末端开始划线,这样做的目的是 。获得纯净的纤维素分解菌的关键是 。(4) 为筛选分解纤维素的细菌一般要在培养基中添加的试剂是 ;经一段时间培养后,应挑选周围出现 的菌落,以筛选出纤维素分解菌。解析: (1)纤维素分解菌产生的纤维素酶首先将稻草纤维素分解为纤维二糖, 最终生成葡萄糖。 (2) 研究人员分离分解纤维素的细菌时,使用的选择性培养基的 营养成分特点是仅以纤维素为唯一碳源。对配制的培养基需采用高压蒸汽灭菌法 灭菌。 (3)分离纯化纤维素分解菌时可采用平板划线法,在第二次及以后划线时, 总是从上一次的末端开始划线,这样做的目的是将聚集的菌种逐步稀释以获得单 个菌落。获得纯净的纤维素分

14、解菌的关键是防止外来杂菌污染(无菌技术的规范操作)。(4)为筛选分解纤维素的细菌一般要在培养基中添加的试剂是刚果红,刚果红 能与培养基中的纤维素形成红色复合物;当纤维素被分解后,红色复合物不能形 成,培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈,故经一段时间培养后,应 挑选周围出现透明圈的菌落,以筛选出纤维素分解菌。答案: (1)纤维二糖(2) 仅以纤维素为唯一碳源 高压蒸汽灭菌(3) 将聚集的菌种逐步稀释以获得单个菌落防止外来杂菌污染 (无菌技术的规范操作 )(4) 刚果红 透明圈122019 ·西宁市海湖中学高二月考 植物的细胞壁中含有大量的纤维素,在 植树和腐质土中含有许多种能产

15、生纤维素酶分解纤维素的微生物,已经发现并用 于生产纤维素酶的菌种有绿色木霉、变异青霉,黑曲霉和根霉等。回答以下问题:(1) 上述生产纤维素酶的菌种与大肠杆菌细胞相比结构上最大的区别是(2) 纤维素酶是一种复合酶,其中 酶可使纤维素分解为纤维二糖,酶可将纤维二糖分解成葡萄糖。(3) 在制备鉴别纤维素分解菌的培养基时为什么需要添加琼脂,其原因 。_若在制备培养基时加入刚果 红,培养所得菌落周围出现 ,可初步判断该菌落为纤维素分解酶。(4) 纤 维 素 分 解 菌 在 生 态 稳 态 上 起 了 什 么 作 用 ?(5) 为了保持所获得菌种的纯净,需要进行菌种的保藏。若采用临时保藏,将 菌种接种在

16、培养基上,放入 4 冰箱中可保藏 36 个月;若要长期保存,可将菌液与灭菌的 混匀,放在 20 的冰箱中保存一年。解析:(1)大肠杆菌属于原核细胞,题中生产纤维素酶的菌种属于真菌,是真 核细胞构成的生物。大肠杆菌与真菌结构最主要的区别是没有被核膜包被的成形 的细胞核。 (2) 纤维素酶是一种复合酶,其中 C1和 CX酶可使纤维素分解为纤维二 糖,葡萄糖苷酶可将纤维素二糖分解成葡萄糖。 (3)只有在固体培养基上才能生长, 形成菌落,达到鉴别的目的,故在制备鉴别纤维素分解菌的培养基时需要添加琼 脂成为固体培养基。制备培养基时加入刚果红,培养所得菌落周围出现透明圈, 可初步判断该菌落为纤维素分解酶。

17、 (4)纤维素分解菌在生态系统中属于分解者, 可以加强生态系统中物质循环 (物质循环和能量流动 )。(5)为了保持所获得菌种的纯 净,需要进行菌种的保藏。若采用临时保藏,将菌种接种在斜面固体培养基上, 放入 4 冰箱中可保藏 36 个月;若要长期保存,可将菌液与灭菌的甘油混匀, 放在 20 的冰箱中保存一年。答案: (1)大肠杆菌没有以核膜为界限的细胞核(2) C1、CX 葡萄糖苷(3) 只有在固体培养基上才能生长,形成菌落,达到鉴别的目的 透明圈(4) 物质循环 (物质循环和能量流动 )(5) 固体斜面 甘油132019 ·武汉市钢城第四中学高二期中 尿素是一种重要的农业肥料,需经

18、 细菌的分解才能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多,下 列是从土壤中分离分解尿素细菌的有关问题,请分析回答:(1) 上图是利用 法进行微生物接种, 把聚集的菌种逐步 到培养基的表面。(2) 下面是两种培养基配方表 1: A 培养基配方KH 2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素琼脂H2O1.4 g2.1 g0.2 g10.0 g1.0 g15.0 g1 000 mL表 2: B 培养基配方纤维 素粉NaNO3Na2HPO 4· 7H2OKH 2PO4MgSO4·7H2OKCl酵母浸膏H2O5 g1 g1.2 g0.9 g0.5 g0

19、.5 g0.5 g1000 mL配制培养基的操作步骤 (用字母顺序回答 )a倒平板 b计算 c溶化 d称量e灭菌 通常培养基采用 灭菌,在制备固体培养基的倒平板操作时,平板冷凝后,应将平板倒置,目的是 如果要分离土壤中能分解尿素的细菌,应选择上述 (A、B)配方的培养基,在该培养基中加入 指示剂,可初步鉴定出该种细菌能否分解尿素。 据 B 培养基的成分,所培养微生物的同化作用类型是 。解析: (1)由图可知,主要利用平板划线法进行微生物接种,把聚集的菌种逐 步分散到培养基的表面。 (2)配制培养基的操作步骤为:计算各组分配比 称量 加水溶解 高温灭菌 倒平板,故本题正确答案为 bdcea。 通

20、常培养基采用高 压蒸汽法灭菌,在制备固体培养基的倒平板操作时,平板冷凝后,应将平板倒置, 否则培养皿内壁上出现的冷凝水可能污染培养基。 如果要分离土壤中能分解尿 素的细菌,应选择富含尿素的培 养基,即 A 培养基。 在该培 养基 中加入酚红指示 剂,可以检测是否有脲酶的分泌, 可初步鉴定出该种细菌能否分解尿素。 因为 B 培养基中有酵母浸膏,可以为微生物生长提供能量,所培养微生物的同化作用类 型为异养型。答案: (1)平板划线 稀释(分散、分离 )(2) bdcea 高压蒸汽灭菌法 防止培养皿内壁上出现的冷凝水污染培 养基 A 酚红 异养型14 2019 ·辽宁高二期末 请回答下面与

21、微生物培养和应用有关的问题:(1) 微生物培养过程中,获得纯净培养的关键是防止 的入侵,对微生物的接种工具,如接种环、接种针等通常采用的灭菌方法是 。(2) 常用的微生物接种方法有 2种,其中 方法常用于微生物的计数,运用该方法计数的结果往往比活菌的实际数目 。(3) 农作物秸杆中含有大量的纤维素, 利用微生物可以将纤维素转化为酒精以 供人类所需。将纤维素转化为酒精需要先将纤维素转化为葡萄糖,将纤维素转化 为葡萄糖的酶是一种复合酶,它包括 C1 酶、和,将葡萄糖转化为酒精的微生物是 (填“真核”或“原核” )生物。(4) 下表是分离某种微生物的培养基配方:成分MgSO4葡萄糖X 物质蒸馏水琼脂

22、用量5 g10 g7 g1 000 mL20 g表中 X 物质最可能作为该培养基的 ,培养基中添加琼脂的作用是解析: (1)在微生物培养过程中, 获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入 侵;对微生物的接种工具,如接种环、接种针等通常采用灼烧灭菌法。(2)常用的微生物接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法,其中稀释涂布平板法方法常用 于微生物的计数。由于两个或多个细菌连在一起时,培养基上只能观察到一个菌 落,因此运用该方法计数的结果往往比活菌的实际数目低。(3)纤维素酶是一种复合酶,一般认为它至少含有三种组分,即 C1酶、 CX 酶和葡萄糖苷酶,酵母菌能够 将葡萄糖转化为酒精,酵母菌属于真核生物。

23、 (4)培养基的成分包括碳源、氮源、 水和无机盐,分析表格成分可知,表中 X 物质最可能作为该培养基的氮源,培养 基中添加琼脂是作为凝固剂,使液体培养基变成固体培养基。答案: (1)外来杂菌 灼烧灭菌法(2) 稀释涂布平板法 低( 少、小 )(3) CX 酶 葡萄糖苷酶 真核(4) 氮源 作为凝固剂,使液体培养基变成固体培养基152019 ·河南高三开学考试 如图所示为从土壤中分离、纯化和扩大培养某 种微生物的流程图。回答下列问题:(1) 称量土样时,土壤 (填“需要”或“不需要” )进行消毒和灭菌。(2) 进行梯度稀释操作时,若待稀释菌液取 1 mL ,注入 9 mL 的无菌水,则

24、该 1 mL 待稀释菌液被稀释了 倍。(3) 平板浇注法分离指的是将 1 mL 稀释的样品放于空白的无菌培养皿之后, 将冷却到 45 50 的培养基倒入,轻摇混匀、凝固,然后放于恒温箱中培养。 从土壤中分离酵母菌和醋酸菌时,可以使用平板浇注法的是 次,其理由(4) 划线纯化阶段, 应对图示培养皿进行划线时接种环取菌液 次,该培养皿划线完成时接种环共需进行灼烧灭菌 次。(5) 扩大培养阶段,所用培养基是 (填“液体”或“固体” )培养基。解析:(1)要从土壤中分离相关的微生物, 所以不需要对土壤进行消毒和灭菌。(2) 若待稀释菌液取 1 mL,注入 9 mL的无菌水,则相当于稀释了 10倍。(3

25、)酵母菌 平板浇注会使部分菌体埋入培养基中,酵母菌是兼性厌氧型生物,可以在低氧甚 至无氧环境下生存繁殖,而醋酸菌是需氧生物,不能在无氧条件下生存,故从土 壤中分离酵母菌和醋酸菌时,只需使用 1 次平板浇注法。 (4)划线纯化阶段,图中 只有一个培养皿,接种环取一次菌液即可,接种之前对接种环需要进行一次灼烧 灭菌处理,图中共划了 5 个区,每个区划线后均需进行灼烧灭菌,故共灼烧 6 次。(5) 扩大培养常用液体培养基进行培养,增加微生物的数量。答案: (1)不需要 (2)10(3) 1 酵母菌平板浇注会使部分菌体埋入培养基中,酵母菌是兼性厌氧型生 物,可以在低氧甚至无氧环境下生存繁殖(4) 1

26、6 (5)液体162019 ·广东高二期末 幽门螺杆菌是人体胃内唯一能产生大量脲酶分解尿 素的细菌。下表是某实验小组培养幽门螺杆菌所用培养基的配方。请分析回答下 列问题:成分添加量KH 2PO41.4 gNaH2PO42.1 gMgSO4·7H2O0.2 g葡萄糖10.0 g尿素1.0 gA15.0 g蒸馏水定容至 1 L(1) 表所示培养基中, A 所表示的成分是 ,从功能上讲,该培养基属于。(2) 分离培养细菌时必须进行无菌操作,对培养基进行灭菌要用 法。(3) 将幽门螺杆菌接种到 pH 适宜的该培养基中,最常用的接种方法有 和平板划线法。(4) 某小组采用平板划线法分

27、离该细菌, 在第二次及以后的划线时,总是从上 一次划线的末端开始划线,这样做的目的是(5) 在上述以尿素为唯一氮源的培养基中加入 指示剂,幽门螺杆菌菌落周围会出现红色环带, 这是由于尿素被分解产生的氨导致 pH 升高,使指示剂产 生颜色变化。菌落周围红色环带越大,表明该菌株 。解析:(1)该培养基为固体培养基, A 表示琼脂。 该培养基以尿素为唯一氮源, 属于选择培养基。 (2)需要用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌处理。 (3)常用的接 种方法有稀释涂布平板法和平板划线法。 (4)为了将聚集的菌体逐渐稀释以便获得 单个菌落,故利用平板划线法分离该细菌时,在第二次及以后的划线时,总是从 上一次划

28、线的末端开始划线。 (5)由于尿素被分解产生的氨导致 pH 升高,使指示剂 产生颜色变化,故在培养基中加入酚红指示剂,幽门螺杆菌菌落周围会出现红色 环带。尿素分解菌利用尿素的能力越强,菌落周围红色环带越大。答案: (1)琼脂 选择培 养基(2) 高压蒸汽灭菌 (3)稀释涂布平板法(4)将聚集的菌体逐渐稀释以便获得单个菌落(5) 酚红 利用 (分解)尿素的能力越强172019 ·宁夏高二期末 尿素是一种高浓度氮肥且长期施用没有不良影响, 但尿素只有通过土壤中某些细菌分解为氨后,才能被植物吸收利用。分解尿素的 细菌都能合成脲酶,脲酶能催化尿素水解。某同学要分离土壤中能分解尿素的细 菌,并

29、统计每克土壤样品中活菌数目,培养基配方如下:KH 2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O蛋白胨葡萄糖尿素琼脂1.4 g2.1 g0.2 g1.0 g10.0 g1.0 g15.0 g(1)根据培养基的成分判断,该同学 (填“能”或“不能” )分离出土壤中分解尿素的细菌,其原因是 。_(2) 接种前要对培养基进行 。在整个微生物的分离和培养中,一定要注意在 条件下进行。(3) 一位同学在纯化土壤中的细菌时, 发现培养基上的菌落连成一片,最可能 的 原 因 是 ,应 当 怎 样 操 作才 可 以 避 免 此 种现 象 ?(4) 获取分解尿素的细菌后, 如要临时保存,可将其接种在 培养

30、基上,等长成菌落后放在 4 的冰箱中保存。若要长期保存,可以采用 的方法。解析: (1)由图中培养基的配方可知, 该培养基中能提供氮源的是蛋白胨和尿 素,尿素不是唯一氮源,不能利用尿素的菌可以以蛋白胨为氮源生长,所以不能 分离出分解尿素的菌。 (2)微生物筛选与分离成功的关键是无菌操作,因此,接种 前要对培养基进行灭菌,在整个微生物的分离和培养中,一定要注意在无菌条件 下进行。 (3)培养基上的菌落连成一片,最可能的原因是菌液没有梯度稀释,浓度 过高;要避免此种现象,需要对菌液进行梯度稀释。 (4)获取分解尿素的细菌后, 如要临时保存,可将其接种在固体斜面培养基上,等长成菌落后放在 4 的冰箱

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