肠道感染细菌

1、第11章肠道感染细菌教学目的1 .掌握肠杆菌共同生物学特征.2 .掌握埃希菌属致病物质与所致疾病,熟悉其生物学性状及微生物学检 查法.3 .掌握志贺菌属致病物质与所致疾病及其耐药性问题.4 .熟悉志贺菌属抗原结构与分类、微生物学检查及菌苗预防问题.5 .掌握沙门氏菌属致病物质与所致疾病、免疫性、及标本采集原那么,肠 热症的细菌学检查及血清学检查肥达氏反响的分析与判断.6 .熟悉沙门氏菌属抗原结构与分类、伤寒的特异性预防.7 .掌握霍乱弧菌形态染色、培养特性及致病物质和所致疾病.8 .熟悉霍乱弧菌生化反响、抗原构造与分型；副溶血性弧菌致病性.9 . 了解其它肠道细菌生物学性状、致病性和免疫性.教

2、学重点和难点1 .肠道杆菌的共同生物学特性.2 .埃希菌属的致病物质和所致疾病,引起肠道内感染的五种大肠埃希菌.3 .志贺菌属志贺菌属的致病性和免疫性：致病物质与所致疾病.微生物学检查4 .沙门菌属致病物质及所致疾病.免疫性微生物学检查防治原那么：特异性预防5弧菌属霍乱弧菌生物学性状. 致病性：霍乱弧菌肠毒素的作用机制免疫性微生物学检查及防治原那么.参考教材1.医学微生物学,周正任主编,第6版,人民卫生出版社,20032 .医学微生物学,贾文祥主编,第 1版,人民卫生出版社,20053 .Medical Microbiology , Kenneth J. Ryan and C. George

3、Ray, 4th ed, Mcgraw-Hill Medical Publishing Division, 2004学时安排教学内容：时间分配一、肠道杆菌的共同特点：一形态结构与染色革兰阴性杆菌,无芽胞,多数有鞭毛,致病菌大多有菌毛.有质粒,能携带耐药性、菌毛、肠毒素等结构基因.二培养及生化反响易培养,生化反响水平强.可用含乳糖的培养基别离培养以识别致病菌.致病菌-分解乳糖水平常居菌+三抗原构造复杂.1. O菌体抗原：是细菌胞壁脂多糖上的.-特异性多糖侧链,按低聚糖上各种糖及其排列次序的不同,构成了 .抗原的特异性.2. H鞭毛抗原：是组成细菌鞭毛的蛋白质成分,按多肽链的氨基酸排列顺序及空间构

4、型决定鞭毛抗原的特异性.3. 外表抗原：荚膜或包膜抗原,多糖质,抗吞噬,毒力抗原.在各属细菌中名称不 同：大肠杆菌属中称 K抗原,沙门氏菌属中称 Vi抗原,志贺氏菌属中称 B抗原.四致病作用多数靠内毒素,少数能产生外毒素肠毒素.综上所述,对肠道的鉴定原那么可总结为三句话：1形态无特殊,难区分；2初步鉴定靠生化反响；3最后鉴定靠抗原血清学反响.肠道感染细菌是通过粪一口途径进行传播的.包括肠杆菌科细菌、幽门螺杆菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌及弯曲菌属等.其中的肠杆菌科细菌种类最多,对人类有致病作用的主要是志贺菌属、沙门菌属和 局部大肠埃希菌,其他大多数为肠道正常菌群.二、埃希菌埃希菌属有5个种,其中大

5、肠埃希菌最常见,是临床上最重要的一个菌种.大肠埃希菌,俗称大肠杆菌.主要表现在：1 .多数在肠道内不致病,并终生伴随,是肠道中重要的正常菌群.2 .在一定条件下可成为条件致病菌,引起肠外感染.3 .有些血清型大肠埃希菌可致人类致腹泻,称致病性大肠埃希菌.4 .在环境卫生和食品卫生学中,常用作被粪便污染的检测指标.5 .在分子生物学和基因工程研究中,是重要的实验材料.一生物学性状多数菌株有周鞭毛和菌毛.发酵乳糖,在鉴别培养基上形成有色菌落.依此区别于沙门菌、志贺菌.典型的大肠埃希菌IMViC试验结果为“ + + -.抗原结构有 O>170种 是血清学分型的根底H>56 种K>1

6、00种又分为L、A、B三型,一个菌株中,只含一种.大肠埃希菌血清型表示法O111 : K58 B4 : H2.大肠埃希菌产生的大肠菌素可用于大肠埃希菌的分型.二致病性致病物质有粘附素和外毒素.所致疾病1.肠外感染条件致病一一寄居位置改变病变以化脓性炎症最为常见.(1)败血症是最常见的革兰阴性菌(占 45%.(2)新生儿脑膜炎是1岁以内婴幼儿中枢神经系统感染的主要致病因子.(3)泌尿道感染常见的有尿道炎、膀胱炎、肾盂肾炎、前列腺炎等.2 .胃肠炎某些血清型可引起肠内感染,为外源性感染,根据致病机制不同,主要有五种类型.(1)肠产毒型大肠埃希菌(ETEC致病物质1)肠毒素耐热肠毒素(ST)和不耐热

7、肠毒素(LT).2)菌毛(定植因子)、LPS K抗原等.(2)肠侵袭型大肠埃希菌(EIEC)致病物质质粒介导侵袭和破坏肠粘膜；内毒素破坏细胞形成炎症和溃疡,引起腹泻.(3)肠致病型大肠埃希菌(EPEC致病物质质粒介导(粘附素)粘附和破坏肠粘膜细胞.导致微绒毛萎缩、上皮细胞排列紊乱和功能受损,造成严重腹泻.(4)肠出血型大肠埃希菌(EHEC曾在世界各地发生流行,5岁以下儿童易感染,病症轻重不一,可为轻度水泻至伴有剧烈腹痛的血便.死亡率3-5%.致病物质主要有菌毛、毒素.已别离到50多个血清型,引起人类疾病的大肠埃希菌血清型以O157: H7为主,但不同国家的流行株不一定相同.(5)肠集聚型大肠埃

8、希菌(EAEC致病物质是粘附素和毒素.特点是细菌在细胞外表聚集,形成砖状排列,导致微绒毛变短,单核细胞浸润和出 血.(二)微生物学检查临床标本的检查1 .标本肠外感染取中段尿、血液、脓液、脑脊液等；腹泻取粪便.2 .别离培养与鉴定(1)肠外感染：1)除血液标本外,均需作涂片染色检查.2)别离培养后观察菌落形态.3鉴定生化反响、尿路感染需菌落计数.2肠内感染将粪便标本接种于鉴别培养基,挑选可疑菌落并鉴定为大肠埃希菌后再分别检测不同类型致胃肠炎大肠埃希菌的肠毒素、毒力因子和血清型等特征.卫生细菌学检查肠道中的大肠埃希菌不断随粪便排出,可污染环境、水源、饮料和食品,样品检出 大肠埃希菌愈多,表示粪便

9、污染愈严重,并间接说明可能有肠道致病菌污染.因此卫生 细菌学常以“大肠菌群数作为水源、饮料、食品等被粪便污染程度的指标.大肠菌群数是指1000ml饮水中的大肠菌群数.我国规定的卫生标准： 每1000ml饮水中大肠菌群数不得超过 3个；每100ml瓶装汽 水、果汁中大肠菌群数不得超过5个.三、志贺菌志贺菌属的细菌,通称痢疾杆菌,是人类细菌性痢疾的病原菌.一生物学性状无鞭毛,有菌毛.在肠道鉴别培养基上形成无色、半透明的菌落.均能分解葡萄糖只产酸不产气,除 宋内志贺菌缓慢发酵乳糖外,均不分解乳糖.抗原构造与分类有O和K两种抗原.O抗原是分类的依据,将志贺菌属分为四群种40余血清型包括亚型.二致病性与

10、免疫性1 .致病物质主要是侵袭力和内毒素,有的菌株尚产生外毒素.1侵袭力借菌毛粘附、穿入回肠末端和结肠粘膜上皮细胞,在上皮细胞内繁殖,形成感染灶,引起炎症反响.细菌一般不进入血流.志贺菌穿透上皮细胞的水平,由基因所限制.志贺菌只有侵入肠粘膜后才能致病.2内毒素1作用于肠粘膜,使通透性增高,促进对内毒素的吸收,引起发热,神志障碍等.2破坏肠粘膜,形成炎症、溃疡、呈现典型的脓血粘液便.内毒素还能作用于肠壁 植物神经系统,使肠功能发生紊乱,肠蠕动失调和痉挛.尤其是直肠括约肌痉挛最明显, 因而出现腹痛、里急后重等病症.3外毒素 A群志贺菌I型和=2 * ROMAN II型还能产生外毒素,称志贺毒素.使

11、蛋白质合成中断上皮细胞损伤.2 .所致疾病传染源是病人和带菌者.传播途径主要为粪一口.人类对志贺氏菌较易感.痢疾志贺菌引起病情较重；宋内志贺菌多引起轻型感染；福氏志贺菌感染易转变为 慢性,病程迁延；福氏和宋内志贺菌是我国常见的流行型别.临床感染类型1急性菌痢局部病症有脓血便、腹痛、里急后重.急性中毒性菌痢,以小儿多见,无明显的消化道症状,主要表现全身严重的中毒病症.各型志贺菌都有可能引起.临床主要有高热、神志 障碍、休克,病死率较高.2慢性菌痢病程2月,迁延不愈,局部病症为主.3 .病后建立的型特异免疫SIgA短暂、不持久,无交叉.三微生物学检查1 .粘液脓血便、肛拭标本.2 .别离培养与鉴定

12、标本接种肠道鉴别或选择培养基,J 37 C 24h取无色较透明菌落进行生化反响和血清学试验,以确定菌群和菌型.3 .毒力试验测定志贺菌的侵袭力可用Senery试验致豚鼠角膜结膜炎.4 .快速诊断法1免疫染色法镜下观察有无凝集现象.2免疫荧光菌球法3协同凝集试验4乳胶凝集试验简便、快速、特异性高.查粪便中有无志贺菌可溶性抗原.既可查抗原又可查抗体.5分子生物学方法PCR核酸杂交等查细菌 DNA四防治原那么特异性预防口服依赖链霉素株Sd制成的多价活疫苗有一定保护作用.药物治疗抗生素,注意多重耐药菌株.四、沙门菌沙门菌属是一大群寄生在人类和动物肠道中,生化反响和抗原结构相关的革兰阴性杆菌.已达246

13、3种血清型,但对人致病的仅少数,如引起肠热症的伤寒、副伤寒沙门菌.其他沙门菌一般对动物致病,也有些沙门菌偶尔可传染给人,引起食物中毒或败血症,如猪霍乱沙门菌、鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌等.一生物学性状革兰阴性,除个别外,都有周身鞭毛,有菌毛.在鉴别培养基上因不分解乳糖,形成无色、光滑、较透明的菌落.生化反响对沙门菌属各菌的鉴定有重要意义.抗原构造较复杂,主要有：1. O抗原 约58种,每个沙门菌的血清型含一种或多种O抗原.凡含有相同抗原组分的归为一个组,可将沙门菌分成42个组,引起人类疾病的沙门菌大多数在A-E组.2. H抗原 分第I相和第n相.第I相特异性高,第n相特异性低.每一组沙门菌根据H

14、抗原不同,可进一步将组内沙门菌分成不同菌型.3. Vi抗原存在于新别离的伤寒沙门菌和希氏沙门菌菌体外表60 c加温、石炭酸处理和传代培养即消失,可阻止O抗原与其相应抗体的凝集反响.二致病性与免疫性1 .致病物质1侵袭力1沙门菌有毒株通过菌毛与小肠上皮细胞M细胞结合,并在其中大量繁殖.2沙门菌是胞内寄生菌,被巨噬细胞吞噬后,由耐酸应答基因介导使细菌能在吞噬 体的酸性环境中生存和繁殖.3） Vi抗原的保护抗吞噬、抗杀菌物质.2内毒素可引起发热、白细胞下降、中毒性休克等.3肠毒素某些沙门菌如鼠伤寒杆菌等能产生肠毒素,可导致急性胃肠炎.2.所致疾病1肠热症 伤寒伤寒沙门菌,副伤寒甲型副伤寒沙门菌、肖氏

15、沙门菌、希氏沙门菌传染源 伤寒、副伤寒病人和带菌者.传播途径 消化道粪一口途径.发病过程病原菌食入后在肠及淋巴结中繁殖第一次菌血症扩散发热、不适等病菌侵入肝、胆、脾、肾、骨髓中繁殖第二次菌血症高热、肝脾肿大等粪便排菌肠出血或穿孔尿液排菌假设无并发症,2-3w后病情开始好转.2胃肠炎食物中毒是最常见的沙门菌感染,约占70%由摄入大量鼠伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌、肠炎沙门菌等污染的食物引起.起病急,有发热、恶心、呕吐、腹痛、水样腹泻.大多在23d自愈.严重者休克、肾衰死亡.3败血症多见于儿童和免疫力低下者,致病菌以猪霍乱沙门菌、希氏沙门菌、鼠伤寒沙门菌多见,有高热、寒战、厌食等病症,菌随血流扩散到组

16、织器官,引起脑膜炎、骨髓炎,胆囊炎、心内膜炎等.4无病症带菌者约有1%-5呦寒或副伤寒患者在病症消失后1年或更长时间内仍可在粪便中检出有相应沙门菌.3.免疫性引起肠热症的沙门菌侵入后,主要为细胞内寄生菌,细胞免疫是主要防御机制,体液免疫有辅助的杀菌作用.胃肠炎的恢复与局部SIgA有关.三微生物学检查1 .标本肠热症第1w取血液；第2w取粪便、尿；第1-3w取骨髓.胃肠炎取粪便、呕吐物、可疑食物.败血症取血液.2 .别离培养与鉴定标本直接接种肠道鉴别或选择培养基取无色菌落接种双糖或三糖铁培养基系列生化反响鉴定血清学反响鉴定(玻片凝集试验)阳性时即可作出初步诊断近年来,采用免疫学方法快速检测粪便、

17、血清、尿液标本中的细菌抗原.分子生物 学技术检测细菌核酸.3 .血清学诊断针对肠热症多用肥达( Widal )试验.(1)概念用伤寒沙门菌 O和H抗原,以及甲型副伤寒、肖氏、希氏沙门菌H抗原的诊断菌液,与受检者血清作试管或微孔板凝集试验,测定有无相应抗体及其效 价,辅助诊断肠热症.(2)结果解释考前须知1)正常值伤寒沙门菌O凝集价低于1 : 80; H凝集价低于1: 160.副伤寒沙门菌,H凝集价低于1: 80.才有诊断价值.2)动态观察病程中逐周复查,假设效价升高 4倍,有意义.3 ) H与O抗体的诊断意义O抗体(1gM)出现较早,维持约半年.H抗体(1gG)出现较晚,维持时间长达数年.故：

18、O T , H T可辅助诊断；O J , H J 一般否认诊断；O J , H T既往感染、预防接种、非特异回忆反响；0 T, H J感 染 早期.4)其他少数肠热症病人,肥达试验始终正常( Ab不升高).4 .伤寒带菌者的检出别离出病原菌是最可靠的方法.但检出率不高,可先检测可疑者血清中 Vi抗体,假设 效价? 1: 10,再反复取粪便别离培养沙门菌.四防治原那么1 .特异性预防 1死菌苗：接种伤寒副伤寒疫苗. 有一定保护作用,但不理想.2减毒口服活疫苗：以伤寒沙门菌Ty21a活疫苗,效果仍不理想,且工艺复杂,国内已停用.3伤寒vi荚膜多糖疫苗：平安,有效期至少3年.2 .治疗抗生素氯霉素、

19、氨茉青、环丙氟哌酸等.五、霍乱弧菌弧菌属Vibrio 细菌是一大群菌体短小,弧形的革兰阴性菌,与肠道杆菌主要不同 是氧化酶试验阳性和有一根位于菌体一端的单鞭毛.至少有12种与人类疾病有关,尤以霍乱弧菌和副溶血性弧菌最为重要.一、霍乱弧菌是烈性传染病霍乱的病原菌,曾屡次引起世界大流行,因此属国际检疫的传染病.一生物学性状1 .形态染色中等大小革兰阴性弧菌,有单端鞭毛和菌毛,有些菌株有荚膜,运动活泼.假设取病人米柑水样粪便作悬滴观察,可见穿梭样或流星样运动.2 .培养特性与生化反响嗜碱常用碱性蛋白月东水或碱性琼脂平板作为选择培养基,PH8. 8-9 . 0.温度范围宽生长繁殖的温度为18-37 C

20、.可在无盐环境中生长,依次区别于其他致病性弧菌.过氧化氢酶、氧化酶、硝酸盐复原及口引喋试验均阳性.分解多种单糖,产酸不产气.3 .抗原构造与分型霍乱弧菌有O和H抗原,根据O抗原不同分为200多个血清群,其中 01群、0139 群引起霍乱,其余的血清群分布于地面水中,可引起人类胃肠炎等疾病,但从未引起霍 乱的流行.其中01群 根据菌体抗原组成分三个血清型. r古典生物型 根据表型差异分2个生物型Y EL-Tor 生物型4 .反抗力 ELTor生物型和其他非01群较古典生物型为强,可在河水、井水、海 水中存活l3周,有时还可越冬.但对热、酸,消毒剂敏感.二致病性1 .致病物质1霍乱肠毒素由ctxA

21、和ctxB基因编码,包括有：A亚单位为毒性亚单位,在细胞内被蛋白酶裂解为 Al和A2两条多肽,Al通过活化G腺昔环化酶的一局部,使细胞内cAMPK平升高,使细胞分泌功能亢进,导致严重 的水和电解质丧失,产生腹泻和呕吐.B亚单位为结合亚单位.可与小肠粘膜上皮细胞GM1神经节昔脂受体结合,介导A亚单位进入细胞质.2鞭毛的活泼运动,有助于细菌穿过肠粘膜外表粘液层而接近肠壁上皮细胞.菌毛有粘附定植作用.3 0139群还具有荚膜和特殊 LPS毒性决定簇,反抗血清中杀菌物质和粘附小肠 粘膜作用.2 .所致疾病霍乱,是我国甲类法定传染病.传染源病人和无病症感染者.传播途径 粪一口途径水.正常胃酸条件下能引起

22、感染的菌量为101°.任何能降低胃酸的因素,均可使人对本菌的敏感性增加.食入病原菌,于小肠粘膜粘附迅速繁殖产毒J 2-3d肠液大量分泌引起剧烈呕吐、腹泻米泪水 样失水、失盐、酸中毒、低容量性休克及肾衰等死亡率高及时补液及电解质,死亡率可小于1%古典生物型较 ELTor生物型严重,0139群比01群严重.病愈后局部患者可短期带菌,不超过3-4w3 .免疫性感染后可获得牢固免疫力抗肠毒素及抗菌抗体.霍乱弧菌引起的肠道局部粘膜免疫是霍乱保护性免疫的根底.01群与0139群之间无交叉免疫保护.4 三微生物学检查对首例病人的病原学诊断应快速、准确,并及时作出疫情报告.1 .标本 粪便、肛拭、流

23、行病学调查还包括取水样置于碱性保存液中.2 .直接镜检悬滴法观察细菌的穿梭样运动有助于诊断.3 .别离培养标本接种碱性蛋白月东水增菌TCBS培养基分解蔗糖呈黄色菌落生化反响及玻片凝集反响01群多价和单价、0139群四防治原那么1.特异预防 1 01群霍乱弧菌死疫苗肌注.（2） 口服疫苗：包括 B亚单位-全菌灭活口服疫苗；基因工程减毒 活菌苗；带有霍乱弧菌几个主要保护性抗原的基因工程菌苗.3候选菌苗01群和0139群二价菌苗.2.治疗1及时补液及电解质.2抗生素使用多重耐药质粒的菌株在增加,且0139群的耐药性强于01群.六、副溶血性弧菌副溶血性弧菌存在于近海的海水、海底沉积物和鱼类、 贝类等海

24、产品中. 是我国大陆沿海地区食物中毒中最常见的一种病原菌.一生物学性状嗜盐3.5%NaCl的培养基中生长良好,无盐不生长.在盐浓度不适宜时呈多形性,菌体一端有单鞭毛.在TCB胡养基形成绿色不分解蔗 糖的菌落.不耐热、不耐酸.某些菌株可溶解人、兔的红细胞,产生3溶血.二致病性引起食物中毒确实切致病机制尚待说明.致病物质致病菌株别离出两种致病因子1 .耐热直接溶血素TDH ,是一种肠毒素.2 .耐热相关溶血素TRH其他致病因子粘附素、粘液素酶等.本菌引起的食物中毒系经烹饪不当的海产品或盐腌制品传播.因食物容器或砧板生 熟不分污染本菌后,也可发生食物中毒.有腹痛、腹泻、呕吐和低热,粪便多为水样, 少