微生物学实验-细菌染色ppt课件

1、基础生物学实验基础生物学实验精品课程精品课程细菌染色技术细菌染色技术根底生物学实验三根底生物学实验三基础生物学实验基础生物学实验精品课程精品课程目的要求目的要求学习微生物涂片，染色的根本技术，掌握学习微生物涂片，染色的根本技术，掌握细菌的染色法。细菌的染色法。初步认识细菌的形状特征。初步认识细菌的形状特征。稳定显微镜油镜的运用方法和无菌操稳定显微镜油镜的运用方法和无菌操作技术。作技术。基础生物学实验基础生物学实验精品课程精品课程微生物染色的染料微生物染色的染料 是一类苯环上带有发色基团和助色基团的是一类苯环上带有发色基团和助色基团的有机化合物。有机化合物。 染料通常都是盐，分酸性染料和碱性染料

2、染料通常都是盐，分酸性染料和碱性染料两大类。两大类。 在微生物染色中，碱性染料较常用，如常在微生物染色中，碱性染料较常用，如常用的美蓝即亚甲蓝、结晶紫、碱性紫用的美蓝即亚甲蓝、结晶紫、碱性紫复红、番红即沙黄、孔雀绿等都属于复红、番红即沙黄、孔雀绿等都属于碱性染料。碱性染料。基础生物学实验基础生物学实验精品课程精品课程v在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷；通常带负电荷；v而碱性染料在电离时，其分子的染色部分而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷；带正电荷；v带正电荷的碱性染料染色部分很容易与带带正电荷的碱性染料染色部分很容易与带负电荷细菌细

3、胞结合使细菌染色。负电荷细菌细胞结合使细菌染色。微生物染色原理微生物染色原理基础生物学实验基础生物学实验精品课程精品课程材材 料料菌种菌种 染色剂染色剂仪器或其他器具：仪器或其他器具：显微镜显微镜酒精灯酒精灯载玻片载玻片接种环接种环香柏油香柏油酒精酒精+乙醚乙醚擦镜纸擦镜纸生理盐水等。生理盐水等。基础生物学实验基础生物学实验精品课程精品课程涂片涂片枯燥枯燥固定固定染色染色水洗水洗镜检镜检简单染色方法简单染色方法枯燥枯燥基础生物学实验基础生物学实验精品课程精品课程革兰氏染色革兰氏染色 菌种菌种: : 参考菌：参考菌：G+G+：Staphylococcus aureus, Staphylococc

4、us aureus, G-: Escherichia coli G-: Escherichia coli 仪器仪器 显微镜；显微镜； 资料资料 载玻片，香柏油，二甲苯，擦镜纸，载玻片，香柏油，二甲苯，擦镜纸，吸水纸，染色缸等。吸水纸，染色缸等。 染料染料 草酸铵结晶紫染色液，路哥氏草酸铵结晶紫染色液，路哥氏(Lugol)(Lugol)碘液，碘液，95%95%乙醇，乙醇，0.5%0.5%番红染色液；番红染色液；基础生物学实验基础生物学实验精品课程精品课程革蓝氏阳性和阴性菌细胞壁成分比较革蓝氏阳性和阴性菌细胞壁成分比较成分成分 占细胞壁干重的占细胞壁干重的% 革蓝氏阳性菌革蓝氏阳性菌 革蓝氏阴性菌

5、革蓝氏阴性菌肽聚糖肽聚糖 含量很高含量很高50-9050-90 含量很低含量很低1010磷壁酸磷壁酸 含量较高含量较高5050 无无类脂质类脂质 普通无普通无 2 2 含量较高含量较高2020蛋白质蛋白质 无无 含量较高含量较高基础生物学实验基础生物学实验精品课程精品课程革蓝氏染色的意义革蓝氏染色的意义 细菌分类鉴定细菌分类鉴定 指点临床用药指点临床用药基础生物学实验基础生物学实验精品课程精品课程微生物分类鉴定的特征微生物分类鉴定的特征v形状学和生理生化特征形状学和生理生化特征v血清学实验和噬菌体分型血清学实验和噬菌体分型v氨基酸序列和蛋白质分析氨基酸序列和蛋白质分析v核酸碱基组成和序列分析核

6、酸碱基组成和序列分析基础生物学实验基础生物学实验精品课程精品课程形状学特征形状学特征v培育特征、菌落的外形、大小、颜色、外培育特征、菌落的外形、大小、颜色、外表特征、光泽等表特征、光泽等v细胞形状：外形、大小、陈列方式细胞形状：外形、大小、陈列方式v特殊构造：鞭毛、芽孢、孢子、荚膜等特殊构造：鞭毛、芽孢、孢子、荚膜等v细胞内涵物细胞内涵物v染色反响：革蓝氏染色、抗酸性染色染色反响：革蓝氏染色、抗酸性染色v运动性运动性基础生物学实验基础生物学实验精品课程精品课程方法方法v涂片涂片v初染初染v媒染媒染v脱色脱色v复染复染v镜检镜检基础生物学实验基础生物学实验精品课程精品课程涂片涂片v要用活泼生长期

7、的幼培育物作革兰氏染色要用活泼生长期的幼培育物作革兰氏染色; ;v留意练习无菌操作；留意练习无菌操作；v在载玻片上滴半滴生理盐水；在载玻片上滴半滴生理盐水；v取菌不要贪多，接种环上肉眼可见菌苔痕取菌不要贪多，接种环上肉眼可见菌苔痕迹即可；迹即可；v菌苔在生理盐水中涂片要均匀，部分不宜菌苔在生理盐水中涂片要均匀，部分不宜过厚过厚, ,以免脱色不完全呵斥假阳性。以免脱色不完全呵斥假阳性。基础生物学实验基础生物学实验精品课程精品课程 初染初染 将玻片置于玻片搁架上，加草酸将玻片置于玻片搁架上，加草酸铵结晶紫染色液铵结晶紫染色液( (加量以盖满菌膜为度加量以盖满菌膜为度) )，染色染色1-2min1-

8、2min。倾去染色液，用自来水小心。倾去染色液，用自来水小心地冲洗。地冲洗。 媒染媒染 滴加滴加(Lugol)(Lugol)碘液，染碘液，染1-2min1-2min，水，水洗。洗。 脱色脱色 滴加滴加95%95%乙醇，脱色乙醇，脱色20-25s20-25s立刻水立刻水洗，以终止脱色。洗，以终止脱色。 复染复染 滴加蕃红，染色滴加蕃红，染色2-3min2-3min，水洗。，水洗。最后用吸水纸悄然吸干。最后用吸水纸悄然吸干。基础生物学实验基础生物学实验精品课程精品课程 枯燥后，置油镜察看。被染成紫色者即为枯燥后，置油镜察看。被染成紫色者即为革兰氏阳性菌革兰氏阳性菌(G)；被染成红色者是革兰；被染成

9、红色者是革兰氏阴性菌氏阴性菌(G-)。 基础生物学实验基础生物学实验精品课程精品课程革兰氏阴性菌革兰氏阴性菌基础生物学实验基础生物学实验精品课程精品课程革兰氏阳性菌革兰氏阳性菌基础生物学实验基础生物学实验精品课程精品课程作业作业 实验报告实验报告基础生物学实验基础生物学实验精品课程精品课程1、涂片、涂片取一块干净的载玻片平放在载玻片架上，在载取一块干净的载玻片平放在载玻片架上，在载玻片中央滴一滴生理盐水或蒸馏水；玻片中央滴一滴生理盐水或蒸馏水；无菌操作从试管中生长有琼脂斜面上挑取少许无菌操作从试管中生长有琼脂斜面上挑取少许菌苔；菌苔；将挑取的菌苔沾入载玻片中央生理盐水中混匀将挑取的菌苔沾入载玻

10、片中央生理盐水中混匀并涂成薄膜。并涂成薄膜。留意：载玻片要干净无油迹；滴生理盐水和取留意：载玻片要干净无油迹；滴生理盐水和取菌不宜过多；涂片要涂抹均匀，不宜过厚。菌不宜过多；涂片要涂抹均匀，不宜过厚。基础生物学实验基础生物学实验精品课程精品课程2、枯燥、枯燥v 将涂好菌膜的载玻片平放在载玻片架上，将涂好菌膜的载玻片平放在载玻片架上，室温下自然枯燥。室温下自然枯燥。基础生物学实验基础生物学实验精品课程精品课程3、固定、固定v手持曾经自然枯燥的涂好菌膜的载玻片，手持曾经自然枯燥的涂好菌膜的载玻片，涂面朝上，在酒精灯火焰上经过涂面朝上，在酒精灯火焰上经过2323次，热次，热固定细菌细胞。固定细菌细胞

11、。v原理：加热使细菌细胞的蛋白质凝固、使原理：加热使细菌细胞的蛋白质凝固、使细菌细胞质凝固，从而固定细菌细胞形状，细菌细胞质凝固，从而固定细菌细胞形状，并使之结实附着在载玻片上。并使之结实附着在载玻片上。v留意：热固定温度不宜过高，否那么会改留意：热固定温度不宜过高，否那么会改动甚至破坏细胞形状。动甚至破坏细胞形状。基础生物学实验基础生物学实验精品课程精品课程4、染色、染色v将热固定的细菌涂片平放于在载玻片架上，将热固定的细菌涂片平放于在载玻片架上，滴加染液于涂片上染液刚好覆盖涂片薄滴加染液于涂片上染液刚好覆盖涂片薄膜为宜。膜为宜。v染色时间：染色时间：v吕氏碱性美蓝染色吕氏碱性美蓝染色12m

12、in；v石炭酸复红染色约石炭酸复红染色约1minv草酸铵结晶紫染色约草酸铵结晶紫染色约1min。基础生物学实验基础生物学实验精品课程精品课程5、水洗、水洗v将细菌涂片上染液倒入废液缸中；将细菌涂片上染液倒入废液缸中；v手持细菌染色涂片，置于废液缸上方，用手持细菌染色涂片，置于废液缸上方，用洗瓶中自来水冲洗涂片，直至流下的水无洗瓶中自来水冲洗涂片，直至流下的水无色为止。色为止。v留意：水洗时，不要直接冲洗涂面，而应留意：水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端流下。水流不宜过急，使水从载玻片的一端流下。水流不宜过急，过大，以免涂片薄膜零落。过大，以免涂片薄膜零落。基础生物学实验基础生物学

13、实验精品课程精品课程6、枯燥、枯燥v自然枯燥：将染好色的细菌涂片平放在载自然枯燥：将染好色的细菌涂片平放在载玻片架上，室温下自然枯燥；玻片架上，室温下自然枯燥；v吹干：将染好色的细菌涂片平放在载玻片吹干：将染好色的细菌涂片平放在载玻片架上，用电吹风冷风或低温热风吹干；架上，用电吹风冷风或低温热风吹干；v吸干：将染好色的细菌涂片平放在一张吸吸干：将染好色的细菌涂片平放在一张吸水纸上，上面覆盖一张吸水纸，将细菌涂水纸上，上面覆盖一张吸水纸，将细菌涂片两面水分吸干。片两面水分吸干。基础生物学实验基础生物学实验精品课程精品课程7、镜检、镜检 涂片干后镜检。涂片干后镜检。 留意：涂片必需完全枯燥后才干用油镜察留意：涂片必需完全枯燥后才干用油镜察看。看。 防止水的折射，以便于察看。防止水的折射，以便于察看。基础生物学实验基础生物学实验精品课程精品课程Microbiological Ster