基因敲除三大技术对比

1、基 因 敲 除大 技 术 对 比技人名称优势局限性可提供效劳类型基于胚胎干细胞的同源重组技术成熟、可靠、精细是目前 为止唯个可以满足所 有要求的打靶技术1 需要ES细胞,目前只有小鼠有高效的ES细胞,其它 模式动物的ESC还不能实现 大规模应用.2周期长、工作量大、费用相比照拟高1全基因敲除模式小鼠2条件性基因敲除模式小鼠3先全敲除再条件性敲除模式小鼠4基因敲入模式小鼠5 ROSA位点定点转基因TALEN技术基因敲除效率高,速度快,可实现多物种基因敲除基因敲入效率较低,多基因敲除困难,系统构建相对复杂,存在脱靶风险1全基因敲除大/小鼠2全基因敲除细胞系EGE系统基因敲除/敲入效率高,速度快,可

2、实现多基因、多物种基因敲除/敲入,系统构建简单存在脱靶风险,但通过选择合 适的sgRNA可以有效降低脱 靶率,In vivo 脱靶可通过传 代去除1全基因/条件性基因敲除大/小鼠2全基因/条件性报告基因敲除/敲入大/小鼠3 CRISPR心as9粒构建4细胞系敲除/敲入免疫类B-NSG 小鼠：Biocytogen-NOD-SCID-IL2rgB-NSG小鼠是NOD遗传背景,Prkdc和IL2rg双基因敲除的小鼠,是目前国际公认的免疫缺陷程度最 高、最适合人源细胞或组织移植的工具小鼠.根本特征?NOD (non-obese diabetes )遗传背景：自发I型糖尿病；其巨噬细胞对人源细胞吞噬作用

3、弱；先天 免疫系统,如补体系统和树突状细胞功能降低.?Prkdcscid : Prkdc (protein kinase DNA-activated catalytic )基因突变,小鼠的功能性T 和 B 细胞缺失,淋巴细胞减少,表现为细胞免疫和体液免疫的重度联合免疫缺陷(severe combined immunedeficiency, scid ).?Il2rgnull : Interleukin-2 受体的gamma 链(IL-2R yc,又称 CD132 )位于小鼠 X染色体上,是具 有重要免疫功能的细胞因子Il2、Il-4、Il-7、Il-9、Il-15和I-21的共同受体亚基,该基

4、因敲除后的小鼠机体免疫功能严重降低,尤其是 NK细胞的活性几乎丧失.B-NSG小鼠：综合了 NOD-SCID-IL2rg背景特征,具有重度免疫缺陷表型,无成熟 T细胞、B细胞和功能性NK细胞,细胞因子信号传递水平缺失等.非常适合人造血干细胞及外周血单核细胞的移植和生长.优点?迄今世界上免疫缺陷程度最高的工具小鼠；?与NOD-scid 小鼠相比寿命更长,平均长达1.5年；?对人源细胞和组织几乎没有排斥反响；?少量细胞即可成瘤,依赖于细胞系或细胞类型；?无8淋巴细胞泄漏.成功案例小鼠脾脏流式分析图：主要应用领域?ES和iPS细胞研究?造血和免疫学研究IL17-EGFP knockin miceCa

5、talog number: bcg -IM-0001Name : C57BL/6-Il17atm1BcgenMouse strain : IL17 EGFP knockin miceGene common name : Interleukin 17A, IL 17A,IL17AChromosome ： Chromosome 1Allele Type : Targeted (Knockin)Strain of Origin ： C57BL/6JES Cell Line Strain ： C57BL/6Expressed Gene ： EGFP, Enhanced Fluorescent ProteinNote : DNA fragment containing IRES EGFP -SV40polyA signal sequence