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文档简介

1、DPPH实验步骤 一、原理：DPPH是一种很稳定的氮中央的自由基,它的稳定性主要来自3个苯环的共振稳定作用及空间障碍,使夹在中间的氮原子上不成对的电子不能发挥其应有的电子成对作用.作为一种稳定的自由基,DPPH可以捕获"去除"其他的自由基.因此通过参加DPPH后观察某一化学反响的速率是否减慢,来作为这一反响是否具有自由基反响本质的指标.由于DPPH自由基在以520nm为中央处具有强烈的吸收,因此在溶液中呈现深紫色,并且在被中和之后会 变为无色或浅黄色.DPPH在有机溶剂中是一种稳定的自由基,其醇溶液呈紫色,且需低温避光储藏,具有 单一电子,故能接受一个电子或氢离子,在波长为

2、517nm下具有最大吸收.有自由基去除剂存在时,DPPH的单电子被捕捉而使其颜色变浅,在最大光吸收波长处的吸光值下降,且 下降程度呈线性关系,吸光度水平的降低说明抗氧化性的增加,从而以评价试验样品的抗氧化水平.此抗氧化水平用抑制率来表示,抑制率越大,抗氧化性越强. 二、实验步骤：1 .配制0.1mM的DPPH溶液：配两次,每次取0.002gDPPH溶于50mL乙醇,避光保存.2 .配制0.5mg/mL的Vc溶液,至少2mL 设为阳性对照,选择性做3 .配制一定浓度的样品溶液,至少2mL母液也可以配制不同溶度梯度样品,计算IC504.上板避光操作,上完板后,室温避光30分钟,测吸光度96孔板,三组,每组设 3个复孔,每孔参加量及 96孔板分布如下：sample 样品组：样品溶液100uL+ DPPH醇溶液100uL 每个浓度3个孔blank 空白组：样品溶液100uL+无水乙醇100uL 每个浓度3个孔control 对照组：DPPH醇溶液100uL+水100uL 一块板可共用一个对照组 ,3个孔消除氧% 1-j二为吧x1帆5 .检测并计算去除率测517nm处的吸光度,取平均值,计算每个浓 度的DPPH去除率,做出折线图.

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