乙型肝炎病毒表面抗原检测

1、乙型肝炎病毒表面抗原检测（ELISA）1原理：在微孔板上预包被被纯化的乙肝表面抗体（HBsAb ,配以酶标记抗体 （HbsAb-HRP及TM播其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆） 中乙肝表面抗原（HBsAg 。2试剂：2.1 试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）2.2 试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司2.3 包装规格：96Test/Kit2.4 试剂盒组成：HbsAb预包被微孔板（包被 HbsA。，HbsAg酶标抗体 （含HRPfe记HbsAb） , HbsAg阳性对照（含基因工程 HbsAg , HbsAg阴 性对照（正常人血清），HbsAg样品稀释液（含

2、BS砥冲液），浓缩洗涤液 （PBS-T缓冲液），底物A （含H2O2 ,底物B （含TMB ,终止液（含H2 SO4 ,封板膜，自封袋，说明书。2.5试剂储存条件及有效期：28c避光保存，有效12个月。3样本采集：取静脉血3-4ml于干净容器中分离出血清或血浆标本，如不及时测定可 辂于4c冰箱保存，如长期保存需辂于-15至-20 C冻存，并避免样本反复 冻融。高脂血、高胆红素及溶血样本可能会影响试验结果的准确性，建议 不使用。4所需仪器4.1 全自动酶免分析仪4.2 新鲜蒸储水或去离子水4.3 酶标仪（单波长450nm双波长450nm/630nm4.4 微量移液器4.5 37 C恒温箱或水浴箱

3、1/5下载文档可编辑4.6 洗板机或洗瓶5检验方法5.1 平衡：将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（1825C）,微孔 板板开封后，余者即时以自封袋封存。5.2 配液：浓缩洗涤液配辂前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩 洗涤液和蒸储水去离子水按1:19稀释后使用。5.3 编号：取所需数量微孔条固定于支架，按序编号。5.4 稀释：每孔加入20ul样品稀释液。5.5 加样：分别在相应孔中加入100ul阴、阳性对照血清或待测样本。5.6 温育：辂37c温育60min。5.7 加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体 50ul。5.8 温育：辂37c温育30min。5.9 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次、洗涤

4、后扣干（每次应保持3060s的 浸泡时间）。5.10 显色：每孔加入底物 A、B各50ul,轻拍混匀，37c暗辂30min。5.11 终止：每孔加入终止液50ul ,混匀。5.12测定：用酶标仪单波长 450nm或双波长450nm/630nmM定各孔OD 值（用单波长测定时，需用空白对照调零），并记录结果。6结果判定与分析临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照孔O评均值*2.1 ;阴性对照 OD匀值小于0.05时以0.05计算。结果判定：样本 ODg S/C.O.>=1者为HbsAg阳性 样本OD® S/C.O.<1 者为HbsAg阴性阴性对照均值>0.1或阳性

5、对照均值<0.4时，实验无效，应重新试验。7质量控制2/5下载文档可编辑每次试验用HBsAg勺质控血清同步检测，S/CO值应在控制范围内；如失 控，检查试剂校期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确， 直至从新试验使其在控。8参考范围阴性9临床意义在血清或血浆中HbsAg的存在表明有急性乙肝或慢性乙肝或为无症状携 带者。10操作性能灵敏度为ng/ml ,特异性高11方法的局限性11.1 此方法仅适用于个体的血清或血浆样本的检测， 不适合与混合血清 或血浆样本及其他体液样本。11.2 该方法仅作为定性检测乙型肝炎病毒表面抗原。11.3试剂盒中的阳性对照不能作为灵敏度的考核指标，阳性

6、对照仅用于按照说明书步骤操 作时，验证试剂盒中的组分是否有效。11.4 由于方法学的局限性，本实验结果仅作为判断疾病的一项依据， 如 需对患者进行确诊，建议施于其它检验手段予以确认。12注意事项12.1 试验前请详细阅读试剂说明书，任何违反试剂说明书的使用或操作 行为，都可能得到不准确的结果。12.2 所有样本、试剂和各种废弃物应按传染物处理，严格防止交叉感染， 严格健全和执行消毒隔离制度。对于含有传染病和怀疑含有传染源的物质， 应有合适的生物安全保证制度，下列为有关注意事项，但不仅限于此：1）戴手套处理样本和试剂；2）不要用嘴吸样；3）不可在处理这些物品时吸烟、进食、喝饮料、美容和处理隐形眼

7、镜等；4）用消毒剂对溅出的样本和试剂进行消毒；3/5下载文档可编辑5）按科室有关条列来消毒和处理所有样本、试剂和潜在的污染物。12.3 加试剂前应先将试剂瓶翻转数次， 使液体混匀。建议使用加液器进 行加液，并经常对加液器进行校准。加液时注意勿使加液枪头接触孔内液 体，避免液体间相互污染。仔细操作，避免加样时在孔中产生气泡。12.4 每板设阴、阳性对照各两孔，设空白对照1孔，空白对照不加样本 和酶标抗体、其余各步相同。12.5 避免在孵育和保存过程中试剂被阳光暴晒和接触次氯酸等强氧化 性物质。12.6 孵育温度要保持在37 C +-1C,温度过高或者过低可能会影响检测 结果的准确性。12.7 封

8、模板为一次性使用，重复使用可能导致污染。12.8洗板机在使用结束后要使用新鲜蒸储水或高品质去离子水冲洗干净，以防止管路堵塞 和腐蚀。洗涤时各孔军需加满但不溢出，防止孔内有残留物未能洗净。12.9 每次洗涤结束请尽早进行后续加液操作， 避免长时间暴露而引起错 误结果。12.10 使用全自动生化仪器时，封板和洗版后扣干步骤可以省略。但需 要注意保证洗涤液的加液量，保证洗涤后将微孔板孔中的洗液充分吸干， 以免对实验造成错误的结果。12.11 确保反应孔板的底清洁干燥，在读板前要确保孔中液体没有气泡。12.12 终止后尽早用酶标仪进行读数测量 （建议在10min内完成读值）， 避免放辂过长时间而引起的错误结果。12.13 检测结果用酶标仪进行读数测量。样本的检测读数与样本中抗原 的浓度不一定呈正相关。12.14 检测结果呈阴性的样本，不能绝对保证样本中没有低浓度抗原的 存在，不能完全排除HBV染的可能。12.15 该免疫测试不能绝对排除非特异性反应的存在，如对检测结果有 疑问，用相应的确认试剂或方法对检测样本进行结果确认。4/5下载文档可编辑12.16 试剂盒各