微囊藻毒素免疫检测法

1、微囊藻毒素免疫检测法 1960年，yalow和berson最开头用法免疫检测分析血液中的胰岛素，之后这种办法被广泛地应用于医药化学分析领域。免疫检测法的基础是通过抗原抗体的特异性反应，来识别和检测各种毒素。酶联免疫吸附法（elisa）是应用广泛的免疫检测法。按照原理的不同，elisa可以分成间接elisa (indrect elisa )、竞争性elisa (competitive elisa).挺直elisa（sandwich elisa)。 自20世纪80年月开头，elisa开头应用于环境中微囊藻毒素的检测。目前己经开发了基于3种elisa原理的微囊藻毒素免疫检测法。elisa法的优点：分

2、析速度快，最快1.5 h即可完成试验；分析通量大，采纳96孔板开展96个样品同时分析；具有较高的敏捷度，可达0.1 ug/l，无需对水样举行浓缩，挺直分析。elisa法的缺点：不能有效地鉴别微囊藻毒素分子结构；会发生交错反应，所得到的结果往往不是单独一种微囊藻毒素的浓度，而是多种微囊藻毒素浓度之和。 竞争性酶联免疫检测是微囊藻毒素免疫分析中最常用的办法，可分为间接竞争性elisa和挺直竞争性elisa检测两种办法。水中微囊藻毒素的测定(gb/t 20466-2006)规定了间接竞争性elisa测定水中微囊藻毒素。其基本过程：水中的微囊藻毒素经离心或过滤处理后与一定量的特异性抗体反应，多余的游离

3、抗体则与酶标板内的包被抗原结合；加入酶标志物和底物显色，与标准微囊藻毒素比较，计算水体中微囊藻毒素的含量。另外还有基于挺直竞争性elisa办法的商品化试剂盒，其基本过程：先将微囊藻毒素抗体固定在酶标板上，用法时加入经离心或过滤处理后的水样和定量的mc-lr-hrp偶联物竞争性结合酶标板上的微囊藻毒素抗体，最后加入显色底物后，显色测定；用不同浓度的标准毒素mc-lr作标准曲线，按照底物的显色程度与标准曲线作比较，可求出毒素的含量。 生物毒理学法 生物毒理学法是最早采纳的微囊藻毒素分析法之一，通常采纳动物口服或注射来间接衡量藻毒素的毒性，毒性强弱用半致死剂量（ld50,ug/kg）衡量。小鼠试验是

4、比较常用的毒性分析法，通常用纯化的或水华蓝藻中粗提藻毒素，举行小鼠腹腔注射或口腔灌喂来检测藻毒素的毒性。大部分的微囊藻毒素的ld50在几十至几百ug/kg之间。此外，各种水生植物也用于检测水环境中的微囊藻毒素，有报道称两种植物sinapis alba和solanumtuberosum对微囊藻毒素较敏感，可以用来检测微囊藻毒素的存在。此类办法的优点是操作容易，能直观地反映微囊藻毒素的总体毒性，而且可以监测到过去未曾发觉的新毒素；缺点是普通无法精确定量，敏捷度较差，无法确定毒素类型及结构，毒素消耗量大，需要大量的动物实验品。 生物化学法 微囊藻毒素可通过与蛋白磷酸酶1和2a的ser和thr的结合作

5、用而影响活性。按照这一特性，holmes首次提出了可以通过微囊藻毒素对活性的抑制程度来检测微囊藻毒素。这类检测办法称为蛋白磷酸酶抑制检测技术（protein phosphatase inhibition assay, ppia )。因为ppia针对的是毒素的功能而不是结构，所得结果反映了具有相同功能的毒素的总量，而不是某一种毒素的量，因此所测物质是微囊藻毒素类物质，普通以mc-lr当量作为测定结果。ppia可定量测定水样中微囊藻毒素，检测敏捷度可达0.51.57 ug/l. ppia的优点是反映各种毒素的总量，检测敏捷度高而且测定时光较短、干扰较小，敏捷度高；缺点是该办法特异性稍差，不能区别不同结构的微囊藻毒素，需要制备发射性底物。 目前有以下几种ppia办法。最频繁的ppia是以32p标志的糖原磷酸化酶a为底物。因为糖原磷酸化酶a只能被ppi和pp2a水解，而ppi和pp2a又可被微囊藻毒素抑制，因此在微囊藻毒素、和反应中，按照蛋白磷酸酶水解糖原磷酸化酶a释放出32p的量就可计算出微囊藻毒素含量。其次种是有以硝基苯酚磷酸酯(pnpp)作为底物的磷酸酶抑制比色监测技术，按照pnpp被水解后产生的有色产物的多少来确定毒素的量。第三种是让未标志的被测毒素和125i标志的微囊藻毒素一起与pp2a举行竞争结合反应，达平衡后举行凝胶过滤，使与pp2a结合的