蒽酮比色法测可溶性糖

1、蒽酮比色法测可溶性糖一、实验目的1.1 学习分光光度法的基本原理1.2 学习对水果中糖含量进行测定的方法二、实验原理2.1 分光光度法基本原理 物质对光吸收的定量关系很早就受到了科学家的注意并进行了研究。皮埃尔布格(Pierre Bouguer)和约翰海因里希朗 伯(Johann Heinrich Lambert)分别在 1729 年和 1760 年阐明了物 质对光的吸收程度和吸收介质厚度之间的关系； 1852 年奥古斯 特比尔(August Beer)又提出光的吸收程度和吸光物质浓度也 具有类似关系， 两者结合起来就得到有关光吸收的基本定律 布格朗伯比尔定律，简称比尔朗伯定律。溶液中的物质在

2、光的照射激发下， 产生对光的吸收效应， 不 同的物质具有各自选择性的吸收光谱， 因此，当某单色光通过溶 液时，能量会被吸收而减弱， 光能量减弱的程度和物质浓度有一 定比例关系，即符合于比色原理比尔定律。朗伯 -比尔定律： A=lg(1/T)=KbcA:为吸光度；T:为透射比，是投射光强度比上入射光强度；K: 摩 尔 吸 收 系 数 。 它 与 吸 收 物 质 的 性 质 及 入 射 光 的波长入有关；C：为吸光物质的浓度；b：为吸收层厚度；物理意义：是当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的 西光物质时，起其吸光度A与吸光物质的浓度 c及吸收层厚度b 成正比。22蒽酮比色法原理蒽酮比色法是一个

3、快速而简便的定糖方法。 蒽酮可以和游离 的己糖或多糖中的己糖基， 戊醛糖及己糖醛酸反应，反应后溶液 呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。蒽酮可与其他一些糖类发生反应， 但显现的颜色不同。当样 品中存有含较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。对 于特定的糖类，反应较稳定。本法多用于测定糖原含量，亦可用于测定葡萄糖含量。HO- -CH'-CHOH|浓H占5H CH CM CHO| | OH OHHOCHCHOH|浓 HjSOxHOCHiCH CHOHOjA.OH OHCHCHII IICH CCHO + 3H O/oCHCHII IIHO CHCCCHO + 3HQ/o已柚三、实验试

4、剂3.1蒽酮试剂：取0.2g蒽酮溶于100mL 80%（V/V）硫酸中，硫酸当日配制使用；3.2标准葡萄糖溶液（0.1mg/mL）:可滴加几滴甲苯作防腐剂；3.3糖样品溶液四、实验操作步骤4.1制作标准曲线：取干试管5支，依次加入标准糖溶液OmL，0.1mL，0.2mL，0.4mL，0.8mL并依次用蒸馏水补足体积到1mL，各管均加入蒽酮试剂4mL,震摇混匀。沸水浴准确煮沸10 min，室温放置10min， 用1号试管溶液调零，比色测定 A620 （同时测定样品）。用标 准糖溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，制作标准曲线。管号12345葡萄糖标准液（ml）00.10.20.40.6蒸馏水（ml）10.90.80.60.4葡萄糖含量（ug）0102040504.2样品含糖量测定将样品溶液稀释1000倍，吸取1mL置试管中，再加入4mL 蒽酮试剂，沸水浴中煮沸 10分钟，取出后冷却10min后比色， 其他条件与做标准曲线相同，测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量 计算：样品糖含量（） =（CX V1x D/W x V2x 106）x 100C标准曲线上查出