测定食品中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素的残留案例

1、测定食品中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素的残留案例 一、案例 四环素类抗生素(tcs)是一类碱性广谱抗生素，包括四环素、土霉素、金霉素、强力霉素等，在畜禽生产中被广泛地用作饲料添加剂来防治动物疾病和提高饲料利用率。在我国，因为四环素药的用量很大，有些地方用法不合理及滥用，导致四环素成为牛乳及乳制品中残留最多的抗生素。牛乳是人们尤其是婴幼儿的主要养分食品，牛乳中残留的抗生素会危害饮用者身体健康。 二、选用的国家标准 gbt 229902008牛乳和乳粉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定。 三、测定办法 1试样的制备与保存 牛乳置于04冰箱中避光保存。用法时，从冰箱中取出，放置至室温

2、，摇匀。乳粉常温避光保存。 2提取与净化 牛乳试样称取10.oog，置于50ml。具塞塑料离心管中，乳粉试样称取2.oog，置于50ml具塞塑料离心管中，向试样中加入20ml o.1moll na2 edta-mcllvaine缓冲溶液(ph=4)，于涡旋振荡器上混合2min，于10，5000rmin离心10min，上清液过滤至另一离心管中，残渣中再加入20ml缓冲溶液，重复提取一次，合并上清液，待净化。 将上清液通过处理好的oasis hlb固相萃取柱，使上清液以不超过3mlmin的流速通过oasis hlb固相萃取柱，待上清液彻低流出后，用5ml甲醇+水(体积比5+95)洗柱，弃去所有流出

3、液。减压抽干5min，最后用5ml甲醇洗脱，收集洗脱液于10ml样品管中。 将上述洗脱液通过羧酸型阳离子交换柱，待洗脱液所有流出后，用5ml甲醇洗柱，减压抽干，用4ml o.01moll草酸一乙腈溶液洗脱，收集洗脱液于10ml样品管中，45下氮气吹至1.5ml左右，定容至2ml，供测定。 3测定 (1)液相色谱条件 色谱柱：kromasil 1005c18，5 m，150mm×46mm(内径)或相当者。 流淌相：o.01moll草酸溶液+乙腈+甲醇(77+18+5)。 流速：1.omlmin。 柱温：40。 检测波长：350nm。 进样量：60 l。 (2)液相色谱测定 将混合标准工

4、作溶液分离进样，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品举行定量，样品溶液中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。 (3)平行实验 按上述步骤，对同一试样举行平行实验测定。除不称取试样外，均按上述步骤同时完成空白实验。 4结果计算 x=c*v/m*1000/1000 式中 x试样中被测组分残留量， gkg； c -从标准工作曲线得到的被测组分溶液的浓度，ngml； v试样溶液定容体积，ml； m试样溶液所代表的质量，g。 注：计算结果应扣除空白值。 5试剂 甲醇：色谱纯。 乙腈：色谱纯。 磷酸氢二钠(na2 hpo4·12h2

5、o)。 柠檬酸(c6h8o7·h2o)。 乙二酸四乙酸二钠(na2edta·2h2o)。 草酸(c2h2o4·2h2o)。 0.2moll磷酸氢二钠溶液：称取71.63g磷酸氢二钠，用水溶解，定容至1000ml。 0.1moll柠檬酸溶液：称取21.04g柠檬酸，用水溶解，定容至1000ml。 mcllvaine缓冲溶液：将625ml 0.2moll。磷酸氢二钠溶液与1000ml 0.1moll柠檬酸溶液混合，须要时用naoh或hcl调ph=4.00±0.05。 0.1moll na2edtamcllvaine缓冲溶液：称取60.50g乙二酸四乙酸二钠放

6、入1625ml。mcllvaine缓冲溶液中，使其溶解，摇均。 0.01moll草酸溶液：称取1.26g草酸，用水溶解，定容至1000ml。 甲醇+水(1+19)。 0.01moll草酸一乙腈溶液(1+1)：量取50ml草酸溶液与50ml乙腈混均。 土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准物质：纯度96。 0.1mgml土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准储存溶液：精确称取适量的土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准物质，分离用甲醇配成0.1mgml的标准储存液。储存液于一20保存。 土霉素、四环素、金霉素、强力霉素混合标准工作溶液：按照需要用流淌相将土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准储存溶液，稀释成所需溶度的混合标准工作液。储存于冰箱中，每周配置。 oasishlb固相萃取柱或相当者：500mg，6ml。用法前分离用5ml甲醇和10ml水预处理，保持柱体潮湿。 羧酸型阳离子交换柱：500mg，6ml。用法前用5ml甲醇预处理，保持柱体潮湿。 6仪器 液相色谱仪：配有紫外检测器。 分析天平：感量0.1mg。 涡旋振荡器。 冷冻离心机：转数大于5000