双根清脑颗粒质量标准研究

1、双根清脑颗粒质量标准研究【摘要】 目的对双根清脑颗粒的质量标准进行研究。方法采用薄层色谱法鉴别薏苡仁、板蓝根、郁金；采用高效液相色谱法测定葛根素的含量。 结果 薄层色谱分离效果较好，斑点清晰，阴性无干扰。葛根素的线性范围为- 卩g/mL,平均加样回收率为,RSD=%结论 本方法可行，重复性好，能有效控制双 根清脑颗粒的质量。【关键词】双根清脑颗粒；葛根素;质量标准;薄层色谱法；高效液相色谱法双根清脑颗粒由葛根、板蓝根、郁金、薏苡仁等组成，具有补肾益髓养脑、益气活血、化瘀通络之功效。为控制该产品质量，本实验采用薄层色谱法对方中板蓝根、薏苡仁、郁金进行定性鉴别，采用高效液相色谱法对葛根素进 行定量

2、分析。1 仪器与材料硅胶G（薄层层析用,青岛海洋化工厂）;AgilentIlOO 高效液相色谱系统。 葛根素（中国药品生物制品检定所提供,批号110752- 20XX09）;双根清脑颗粒（本 实验室制备）。甲醇（色谱纯）;其他化学试剂均为分析纯。2 定性鉴别板蓝根的薄层色谱鉴别取板蓝根对照药材、市售药材、样品、阴性对照粉末各 1 g,加稀乙醇 40 mL,超声处理20 min,滤过,滤液蒸干,残渣加稀乙醇2 mL使溶解，作为供试品 溶液。照薄层色谱法20XX年中国药典（一部）附录WB试验，吸取上述对照 药材10卩L、市售药材10卩L、样品15卩L、阴性溶液15卩L,分别点于同一 硅胶G薄层板上

3、（自然干燥）。以正丁醇-冰醋酸-水（19 : 5： 7）为展开剂，展开， 取出,热风吹干，喷以茚三酮试液，105 C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中， 样品在与对照药材相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。取板蓝根对照药材粉末2 g、样品4 g、阴性对照2 g,加氯仿40 mL, 超声40 min,滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿1 mL使溶解，作为供试品溶液。按薄层 色谱法20XX年中国药典（一部）附录WB试验，吸取上述3种溶液，分别以对 照药材、样品、阴性对照各10、15、20卩L点样，点于同一硅胶G薄层板上。以 苯-氯仿-丙酮（5 : 4： 1）为展开剂，展开，展距为8 cm,取出，晾

4、干。供试品色谱中， 在与对照药材相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。薏苡仁的薄层色谱鉴别取薏苡仁对照药材、药材、样品粉末、阴性对照粉末各1 g,以10倍量70%勺乙醇超声40 min,滤过,滤液置80 C水浴蒸干,取样量为1 g,加石油醚 (6090 C )10 mL,超声处理30 min,滤过，滤液蒸干，残渣加石油醚(6090 C )1 mL 使溶解，作为供试品溶液。按薄层色谱法20XX年中国药典(一部)附录W B 试验，吸取上述对照药材10卩L、药材10卩L、样品15卩L、阴性对照15卩L, 分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(6090 C)-乙醚-乙酸(15 : 1 ：)为展

5、开 剂,展开,取出，晾干，喷以5炳草醛硫酸溶液，于105 C烘约5 min。供试品色谱 中,在与对照药材、药材相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。按薄层色谱法20XX年中国药典(一部)附录W B试验,吸取上述对 照药材10卩L、药材10卩L、样品15卩L、阴性对照15卩L,分别点于同一硅 胶G薄层板上。以石油醚-乙醚-乙醇(15 : 1 :)为展开剂，展开，展距约为8 cm, 取出，晾干，喷以10%勺硫酸-乙醇液,于110 C烘15 min显色,于365 nm紫外光 灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材、药材相应的位置上显相同颜色的斑点， 阴性对照无干扰。郁金的薄层色谱鉴别取对照药材

6、、药材、样品粉末、阴性对照粗粉各2 g,以10倍量70%勺乙醇超声40 min,滤过,滤液置80 C水浴蒸干，取样量为2 g,上述4种样品粉末 分别加乙醇20 mL,超声提取30 min,滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2 mL使溶解， 作为供试品溶液。按薄层色谱法20XX年中国药典(一部)附录W B试验,吸 取上述对照药材10卩L、药材10卩L、样品15卩L、阴性对照15卩L 4种溶 液,分别点于同一硅胶G薄层板上。以石油醚(6090 C)-乙酸乙酯(8 :)为展开 剂,展开,取出，晾干，喷以10%勺硫酸-乙醇液,于110 C烘15 min显色。供试品 色谱中,制剂在与对照药材、药材相应的位置上显

7、相同颜色的斑点，阴性对照无干 扰。按薄层色谱法20XX年中国药典(一部)附录W B试验,吸取上述对 照药材10卩L、药材10卩L、样品15卩L、阴性对照15卩L 4种溶液，分别点 于同一硅胶G薄层板上。以己烷-乙酸乙酯(85 : 15)为展开剂,展开,取出,以10% 磷钼酸乙醇液喷雾后，于105 C烘约10 min。供试品色谱中，在与对照药材、药 材相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。3 葛根素的含量测定色谱条件色谱柱:Lichrospher C18(5卩 m, mnK 250 mm);流动相：甲醇-水(25 : 75);流速mL/min;检测波长:250 nm;柱温:30 

8、6;C;理论塔板数按葛根素计应 不低于2 000;进样量4卩L。对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品mg,置10 mL量瓶中,用30聽醇溶解并稀释至 刻度,摇匀,精密移取2 mL,置10 mL量瓶中,加30汇醇稀释至刻度,摇匀,即得 卩g/mL的对照品溶液。供试品溶液的制备取双根清脑颗粒，研细,取g,精密称定,加甲醇超声处理30 min,定容至 25 mL,取上清液，经卩m微孔滤膜过滤，即得。空白试验取缺葛根的阴性制剂，按供试品溶液制备方法制成葛根阴性对照溶液。将葛根素对照品溶液、供试品溶液和葛根阴性对照溶液，分别注入液相色谱仪中， 进行测定,得到色谱扫描图（见图1）,显示供试品与葛根素在相应

9、位置有相似的 峰,而阴性对照则无，说明其它药味不干扰葛根素的检测。线性关系考察取项下的对照品溶液。分别精密吸取、mL置1 mL容量瓶中，加30% 乙醇至刻度，摇匀,进样测定。以对照品进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制 标准曲线，则回归方程为丫=8,相关系数r= 7。表明进样量在卩g/mL范围内线性关系良好。精密度试验对同一葛根素对照品溶液按上述色谱条件连续测定5次,结果RSC为试验表明本法精密度较好。稳定性试验对同一供试品溶液，在12 h内每隔一定时间测定1次,共测定5次,结果 5次测定的平均含量为mg/g,RSD为%重复性试验对同一批样品，按上述色谱条件平行测定5份。5份测定结果的平均值 为mg/g,RSD为%表明本法的重复性较好。加样回收率测定精密称取已知含量的双根清脑颗粒 3份,每份约g,分别精密添加葛根 素对照品适量，按项下方法制备供试品溶液，进样测定,计算回收率。结果平均回 收率为%,RSD= %符合定量分析的要求，见表1。表1回收率测定结果（略）样品测定取3批样品,根据项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液 及供试品溶液各4卩L,注入高效液相色谱仪，测定,结果见表2。表2 样品测定结果（略）4 讨论薏苡仁薄层鉴别的展开系统曾采用石油醚（6090 C）-乙酸乙酯-醋酸（10 : 3：）为展开剂,置紫