色谱分离法（六）

1、色谱分离法（六） 12.6.8薄层色谱分别法 薄层色谱是一种将柱色谱与纸色谱相结合进展起来的色谱办法，是一种频繁的简便迅速的分别分析办法。 薄层色谱分别法通常是将固定相(吸附剂)匀称地涂在玻璃板上制成薄层板。将试液点在薄层板的原点处(与纸色谱相同)，然后放入盛有绽开剂的容器中，因为薄层固定相颗粒间的毛细管作用，绽开剂沿着吸附剂薄层升高，样品组分就沿着薄层在固定相和流淌相之间不断地发生溶解、吸附、再溶解、再吸附的分配过程。简单被吸附的物质升高得慢些，较难被吸附的物质升高得快些，经过一段时光后，不同物质升高的距离不一样，而在薄层上形成互相分开的斑点从而达到分别(图12-15)。 图12-15 薄层

2、色谱绽开槽 1-缸盖；2-层析缸；3-薄层板；4-点样处；5-绽开剂 薄层色谱试验办法与纸色谱基本一样。但因为它分别效率高、检出敏捷度高以及分别过程快等优点，应用比纸色谱广泛。 薄层色谱固定相是通过加入一定量的黏合剂或烧结方式使固定相颗粒牢固地吸在薄层(玻璃、塑料或金属)板上而不脱落，硅胶、氧化铝是薄层色谱中用法最多的两种固定相。常用的黏合剂有锻石膏、淀粉、羧甲基纤维素等。频繁的商品薄层色谱有：硅胶g(含石膏)；硅胶h(不含黏合剂)；硅胶hf254(含254 nm激发的荧光剂)；硅胶gf254(含石膏和254 nm激发的荧光剂)；硅胶cmc(含羧甲基纤维素)等。此外，目前市场上还有各种规格的高

3、效薄层色谱板商品出售。 薄层色谱绽开剂的挑选要考虑样品的性质、吸附剂的活性和绽开剂的极性。薄层色谱所用的绽开剂主要是低沸点的有机溶剂。对极性较大的化合物举行分别应选用极性较大的绽开剂，极性较小的化合物应选用极性较小的绽开剂。常见溶剂极性大小挨次：苯水。 与纸色谱法一样，薄层色谱可通过rf值举行定性分析。但因为薄层色谱受到许多试验因素的影响，rf值重临性比较差。因此，在薄层色谱分别鉴定时，通常用对比品同时举行对比试验。 薄层色谱的定量办法分为挺直法和问接法两类。挺直法是在同一块板上，在相同的试验条件下测量斑点面积的大小或色彩深浅举行定量。它又分为斑点面积测量法、目视比较法和薄层色谱扫描仪法。间接

4、法是将斑点从硅胶上洗脱下来，再用其他办法定量。 薄层色谱广泛应用于各种有机物和无机物的分别鉴定，如化学工业、临床、药学、生物化学样品的初级分别检验。它也常作为柱色谱分别的初试和检测手段。 产品中杂质的检验及产品质量的控制。因为薄层色谱属于半定量色谱，用薄层色谱法来控制杂质限量，在一些国家的药典中已有用法。详细办法：取一定量的试样，点样绽开后显色，除了主斑点外，不浮现其他杂质斑点，或杂质斑点的大小及色彩深度不超过对比用的标准斑即为产品合格。 反应产物的分别及反应尽头的控制。在化学反应举行到一定时光后，取少量反应液点样分析，了解还剩下多少原料未起作用，从而推断和控制反应尽头。对难分别的反应产物可采

5、纳柱色谱纯化，这时可采纳点板分析确定分别程度。 迅速分别检测。某些组分薄层色谱可用于市场上来自化学、工业、临床、药学等化学样品的迅速分别检验，以及蔬菜残余农药的迅速检验。 12.6.9纸色谱分别法 纸色谱分别的装置12-16所示。用毛细管将样品点加入原点处，然后将此滤纸悬挂于支架上，滤纸下端浸没于溶剂流淌相中，而样品原点正巧露出液面。滤纸及溶剂必需置于密封容器中，使滤纸为溶剂蒸气所饱和。滤纸通常约含20水分，水分就是固定相。因为滤纸的毛细管现象，溶剂向上运动，从而使样品在两相间举行很多次的分配交换过程。对水亲和力大的组分移动得慢，对水亲和力小的组分随溶剂快速向上移动，从而达到相互分别的目的。样

6、品在两相间反复分配的过程称为绽开。由以上所述可知，纸色谱的分别机理属液-液分配色谱机理，但实际状况比较复杂，由于滤纸的毛细孔具有吸附作用。滤纸的化学组成为纤维素，而纤维素分子中存在羧基，羧基中的氢离子与被分别离子之间又会产生离子交换作用。当溶剂前沿快到滤纸顶端时，取出滤纸干燥。若被分别化合物是无色的，则应喷洒合适的显色剂于滤纸上，使化合物斑点浮现。 图12-16 纸色谱分别装置 利用组分的比移值rf举行定量分析。 利用rf值作为鉴定化合物的依据是，用已知标准样在相同试验条件下，举行平行对比试验。若两者rf值相同，可断定为同一物质。将不同色斑取下，将它淋洗或溶解下来，然后用合适的手段举行检测。对复杂样品，若按图12-16的单向绽开方式，其分