单工序落料模具设计说明书.

1、分子生物学复习一、名词解释1、减色效应：若变性DNA复性形成双螺旋结构后，其260nm紫外 吸收降低的现象。（单链 7双链）2、增色效应：核酸分子解链变性成断链，其紫外吸收值（260nm）增加的现象。（双链7单链）3、DNA变性：指核酸双螺旋碱基对的氢键断裂，双链变成单链, 从而使核酸的天然构象和性质发生改变。4、复制子：以单一单位复制的任何一段 DNA。5、半不连续复制：DNA复制时，每个复制叉中的前导链是连续复 制的，而后随链是以反方向合成不连续的短片段的复制方式。6、半保留复制：通过亲本 DNA双螺旋两链分开，每一条链作为模 板合成新的互补链的复制方式。7、冈崎片段：相对比较短的 DNA

2、链（大约1000核苷酸残基），是 在DNA的后随链的不连续合成期间生成的片段。8 DNA载体:9、无义突变：在基因的正常终止密码子之前产生一个终止密码子的 点突变。10、同义突变：即沉默突变，在密码子中改变了一个碱基但没有改 变密码子所编码的氨基酸的点突变。11、移码突变：在正常的DNA分子中，某位点插入或者缺失的碱 基数目为非3的倍数，造成该位点之后的蛋白质三联体密码子阅读框 发生改变，从而使一系列基因编码序列产生移位错误的突变。12、分子克隆：在体外对DNA分子按照既定目的和方案进行人工 重组，将重组分子导入合适寄主，使其在寄主中扩增和繁殖，以获得 该DNA分子的大量拷贝。13、基因工程：

3、在分子水平上对基因进行操作的复杂技术，是将外 源基因通过体外重组后导入受体细胞内，使这个基因能在受体细胞内 复制、转录、翻译表达的操作。14、PCR:聚合酶链反应，利用与 DNA模板序列的两端互补的一对 寡聚核苷酸引物来扩增一段 DNA序列的反应。一个PCR循环包括变 性、退火（复性）和延伸三步。15、启动子：是RNA聚合酶特异性识别和结合，并导致转录开始的DNA序列。16、一 10序列：是几乎所有启动子都含有一个的 6bp序列。该六聚 体通常位于转录起点上游10bp处，共有的一10序列是TATAAT 。17、一 35序列：在大多数启动子中都可以找到的 6bp序列。该六聚体般位于转录起点上游3

4、5bp处，共有的一35序列是TTGACA18、操纵子：是基因表达的协调单位，由启动子、操纵基因及其所控制的一组功能上相关的结构基因所组成。19、操纵序列：是操纵子中的控制元件，在操纵子上调节结构基因转录的一段DNA序列。20、CAP分解代谢激活蛋白同二聚体。21、增强子：位于真核基因中远离转录起点，能明显增强启动子转录 效率的特殊DNA序列。22、弱化子：一段位于结构基因上游前导区，具有终止子结构的短序列，RNA合成终止时，起终止转录信号作用的 DNA序列。23、外显子：真核细胞基因 DNA中的编码序列，这些序列被转录成 RNA并进而翻译为蛋白质。24、内含子：真核细胞基因DNA中的间插序列，

5、这些序列被转录成RNA但随即被剪除而不翻译。25、顺式作用元件：是指对基因表达有调节活性的DNA序列，其活性只影响与其自身同处在一个 DNA分子上的基因。26、反式作用因子：能直接或间接地识别或结合在各类顺式作用元件核心序列上，参与调控靶基因转录效率的蛋白质。27、RNA编辑：RNAra工的一种形式，是通过改变、插入或者删除初生转录物特定部位的残基而改变其中的核苷酸序列的现象。28、可变mRNA口工：将一种mRN前体转化为一种以上成熟 mRNA勺加工过程。可变mRNA口工包括：可变（或差异剪接和可变（或差异poly（A 加工。二、简答题1、简述紫外分光光度法检测 DNA纯度的原理。DNA和RN

6、A勺最大紫外光吸收波长在260nm,而蛋白质的为280nm 纯的双链 DNA的 A260/A280 为 1.8，纯的 RNA的 A260/A280 为 2.0，而 蛋白质的A260/A280必定小于1.0 （实际上为0.5左右）。因此，如果DNA羊品的A260/A280小于1.8，则说明样品中含有蛋白质；如果A260/A280大于1.8，则说明有RNA亏染。2、DNA的损伤原因是什么？有哪些修复途径?(1) 损伤原因：外源化学试剂或射线对 DNA的化学作用会导致其化学或物理结构发生变化。这些变化也许会阻断复制或转录，结果是致死 性的；也许会通过直接或间接诱变发生突变。DNA勺化学不稳定性可产生

7、自发性损伤，如脱氨和脱嘌呤。(2) 修复途径：光复活，切除修复，错配修复，烷基转移酶。3、简述DNA测序的方法类型及双脱氧终止法 DNA测序的基本原理(1)测序方法:Maxam和Gilbert的化学法：DNA末端标记，碱基修饰，氨基转 移，链的切割。San ger酶学法：即双脱氧终止法，是用双脱氧核苷酸作为链终止 试剂，通过聚合酶的引物延伸产生一系列大小不同的DNA片段后再进行分离的方法。(2)基本原理：测序引物与单链 DNA模板分子结合后，DNA聚合酶用 dNTP延伸引物。延伸反应分4组进行，每一组分别用4种ddNTP中的一种来进行终止，再用PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分析4组样品(通常具

8、放射性)。双脱氧核苷酸在脱氧核糖上没有聚合酶延伸链所 需的3'-OH基团，所以可被用作链终止试剂。可在合成步骤通过掺入同位素标标记物，或者也可先将引物末端用具有的放射性的标记物或 荧光染料进行标记后再放入合成步骤。4、简述质粒载体必须具备的基本特征。(1)能自主复制;具有复制起点;携带易于筛选的选择标记;具有多种限制性内切酶的切割位点;具有较小的相对分子质量和较高的拷贝数。5、简述蓝-白颜色（斑点）筛选的基本原理。利用一种蓝色化合物的形成作为指示剂，通过插入目的片段使质粒 载体上编码P -半乳糖苷酶的LacZ基因失活，而LacZ基因在IPTG诱 导下可表达，表达形成的酶可以利用底物 X

9、-gal形成一种蓝色化合 物，LacZ基因的插入失活导致不能形成蓝色菌落。（蓝色T未插入片 段，白色T含插入片段）6、简述原核生物基因转录调控的特点和类型（1）特点：原核生物只有一种 RNA聚合酶;原核生物的表达是以操纵子为单位的; 原核基因一般不含内含子; 原核生物控制水平主要在转录水平，这种控制臂基因产物直接控制 慢; 在大肠杆菌mRNA勺核糖体结合位点上含有SD序列。(2) 类型：负控制的诱导模型，正控制的诱导模型，负控制的阻遏 模型和正控制的阻遏模型。7、比较真核生物的三种RNA聚合酶的性质及功能上的差异。一、 课程设计目的I存在核仁中，转录大部分rRNA的基因，对a -鹅膏蕈 碱不敏

10、感；(2) RNA聚合物n存在于核质中，转录所有的编码基因和一些 snRNA 基因，对a -鹅膏蕈敏感；(3) RNA聚合物m存在于核质中，转录 tRNA 5SrRNA和U6snRNA勺 基因以及其他一些小分子 RNA对a -鹅膏蕈碱中度敏感。三、工艺分 析8、2(或差异剪接和可变(或差异3.1生产方案的制定三、论述题1、PCRT增的基本原理、引物设计、所需要的试剂和具体扩增程 序。 3.2材料分析(1)基本原理：依据细胞内DNA半保留复制的机 理，以及体外DNA分子于不同温度下双链和单链可以相互转变的性 质，人为地控制体外合成系统的温度，以促使双链DNA变成单链，单链DNA与人工合成的引物退

11、火，然后耐热 DNA聚合酶以dNTP3(2)引 物设计：一对引物，与3'端互补；3.3精度分析 碱基分布随机; 引物内、引物间不应有互补序列; 引物与非特异扩增区无同源性3.4操作与定位方式 3 5端可游离四、工艺计算4种dNTP昆合物，4.14Taq DNA聚合酶, MgCI料宽设计双蒸水。(4) 扩增程序: 94C预变性5分钟7【94C变性30秒宀55C退火30秒宀72C延伸1分钟】共25-30个循环，最后72C延伸5分钟，最后将PCF产物于4 C冰箱保存。4.3画排样图5类型4.4基因的转录5DNA复制目的4.5材料的利用率5 合成DNA 原料4.6冲裁工艺力计算5 4种脱氧核糖

12、核苷酸4.7刃口尺寸计算所需要的酶RNA聚合酶解旋酶、RNA聚合酶、DNA聚合酶、DNA连接酶4.8凹模高度不对称，只以DNA一条链为模板，只在双链 DNA上的一条链上进行半保留复制4.9凸模长度确定7产物一个单链RNA(mRNArRNA tRNA)72个双链DNA五.设备选择8 六、装配图及零件图绘制 8七、参考文献9不要加工碱基配对方式一、课程设计目的A-T，G-C设计有着重要的意义，能巩固课本中学的知识，熟悉相关资料，理 清设计思路，练习绘图及文献检索的能力，培养和提高分析，解决问题的能力，学 习冲压工艺与模具设计的具体方法和步骤，为毕业设计打下基础。(13、试比较原核生物和真核生物转录

13、的差异。(2)经行一次冷冲压模具设 计的实际训练。通过设计巩固相关理论知识，为以后的工作做好准备。(3) 通过计算和绘图，学会运用标准、规范、手册、图册和查阅有关技术资料等培养模具设计的基本技能。(4) 如何选取合适的排样，需要通过材料利用率、搭边值、步距的计算，从而选择最合理、最有经济效益的排样方案。真核生物 发生场所二、工件简图类核材料为Q235板厚为t=3mm生产批量：大批量RNA聚合酶三、工艺分析3.1的结合冲裁组合方式的确定应根据下列因素决定。1生产批量：一般来说，小批量与试制采用单工序冲裁，中批量和大批量生产采用复合冲裁或级进冲裁。通过转录因子相互作用进行结合3对工件尺寸、形状的适

14、应性工件的尺寸较小时，常采用复合冲裁或级进冲裁。对于尺寸中等的工件，由于制造多副单工序模的费用比复合模具昂贵，也常采用复合冲裁，但工件上孔与孔之间或孔与边缘之间的距离过小时, 启动子通常位于基因的上游5操作方便与安全：复合冲裁出件或清除废料比较困难，工作安全性较差。级进冲裁较安全。不同启动子方案一：先冲圆孔，后落料，最后弯曲 具有相当大的同源性 具有较大的差异Q235为碳素结构钢，抗拉强度为432-461MPa,抗剪强度为 304-373MPa屈服强度为253MPa具有很好的冲裁成形性能，符合冲裁工艺。有3.3精度分析零件图未标注公差，按精度要求为IT14计算，普通冲裁即可满足图样 要求。只含

15、有一个基因为降低成本，可采用手工送料方式。转录终止四、工艺计算在几个多聚U前面形成颈4.1排样设计与计算1.尺寸计算将(工件按中性层展开(1)直边段为a，b需要加工，与翻译相分离b=80-3-3=74mm(2)圆角边段为c由于R/t=3/3=1>0.5,则该圆角属于有圆角弯曲，根据中性层长度不变原理计算。查资料(1)乳糖操纵子的基因结构：由启动子PlacLacZ,Lac Y,LacA，编码硫代半乳糖c=n （叶kt ）、调节基因lacI和三个结构基因（3+0.42、lacY、lacA）组成。编码p-半乳糖苷酶，它可以将乳糖水解为半乳糖和葡萄糖;编码半乳糖苷透性酶，它能将乳糖运送透过细菌的

16、细胞壁;4.3画排样图（3弯曲毛坯展开总长度:L=a+c+b=24+74+6.69=104.6mm正调控：为了实现高水平的转录，需要CAMP受体蛋白活化，当葡萄糖缺乏时，大肠杆菌内CAMP水平上升,CAP与 c工件展开长度为 104.6mm所以原料料宽为B=104.6+2x2.5=109.6mm ，查冷冲压模具课程设计与毕业设计指导表3-9得：二（0.15-0.20）t，可取t=0.6，所以料宽公差为 109.60 -0.6mm.4.4送料步距h=30+2.2=32.2mm4.5材料的利用率排样时，在保证工件质量的前提下，要尽量提高材料的利用率。n 二A/bh=104.6x30心09.6x32

17、.2=88.9%4.6冲裁工艺力计算冲裁模设计时，为了合理地设计模具及选用设备，必须计算冲裁工艺力。压力机的吨位必须大于所计算的冲裁工艺力，以适应冲裁间隙的要求。冲裁工艺力包括冲裁力F、卸料力F卸、推件力F推和顶件力F顶。该落料工艺不需要计算顶件力。冲裁件周长 L=2 (L1+L2) =269.2mm材料厚度t=3mm取Q235钢的抗剪强度T =350MPa.冲裁力 F=1.3Lt T =1.3x269.2x3x350KN=122.5KN.查冷冲压模具课程设计与毕业设计指导表3-17得:Kx=0.035 Kt=0.045 Kd=0.05卸料力Fx 二KxF=122.5x0.035=4.29KN

18、.推件力Ft=KtF=122.5x0.045=5.51KN.顶料力Fd= KdF=122.5x0.05=6.12KN.总工艺力 FE =F+Fx+Ft =1323KN4.7刃口尺寸计算以凹模为基准，工件基本尺寸为1046mm, 30 mm,因为工件无公差，取磨损系数x=0.5，查冷冲压模具课程设计与毕业设计指导表3-9取为06根据材料及料厚，查冷冲压模具课程设计与毕业设计指导表3-8,确定Zmax=064, Zmin=046凹模由 Dd=(Dmax- x0+i/4 得:D1= (104.6-0.5 0.6) +0.15 0=104.3+0.15 0mmD2=(30-0.5 >0.6+0.15 0=29.7+0.15 0mm凸模由 dd= (Dd-Zmin ) 0-1/4 得:d1=(104.3-0.460 -0.15=103.840 -0.15mmd2=(29.7-0.460 -0.15=29.240 -0.15mm4.8凹模高度H=Kb=0.24x104.6=25.1mm式中，b 凹模孔的最大宽度（mm ）3-22，取K因数，查冷冲压模具课程设计与毕业设计指导表K=0.24。凹模壁厚 c=( 1.5-2)H.取 c=47.85mm.4.9凸模长度确定凸模长度 H=H1+H2+H3+H4+a=15