专业题材一,基因项目工程学习知识点归纳

1、-/专题基因工程【咼考目标定位】1、2、专题重点：DNA重组技术所需的三种基本工具；基因工程的基本操作程序四个步骤；基因工程在农业和医疗等方面的应用； 蛋白质工程的原理。专题难点：基因工程载体需要具备的条件；从基因文库中获取目的基因;利用PCF技术扩增目的基因；基因治疗；蛋白质工程的原理。【课时安排】 2课时DNA重组技术的基本工具【考纲知识梳理】第1节教材梳理：知识点一 基因工程的概念：基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的 设计，并通过体外 DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性， 从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是 在DNA分子水平上进行设计和施工

2、的，因此又叫做DNA重组技术。注意：对本概念应从以下几个方面理解：操作环境生物体外操作对象基因操作水平DNA分子水平基本过程剪切7拼接7导入7表达结果人类需要的基因产物知识点二基因工程的基本工具1. 限制性核酸内切酶一一“分子手术刀”（1）限制性内切酶的 来源：主要是从原核生物中分离纯化来的。（2）限制性内切酶的 作用：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序 列，并能将每一条链上特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键切开。（3） 限制性内切酶的切割 方式及结果：在中心轴线两侧将 DNA切开，切 口是黏性末端。沿着中心轴线切开DNA切口是平末端。2. DNA连接酶一一“分子缝合针”（1）来源：

3、大肠杆菌、T4噬菌体（2）DNA连接酶的种类：E.coliDNA 连接酶和 tDNA连接酶。（3）作用及作用部位：E.coliDNA连接酶作用于黏性末端被切开的磷酸二酯键，T4DNAi接酶作用于黏性末端和平末端被切开的磷酸二酯键。注意：比较有关的 DNA酶(1) DNA水解酶：能够将 DNA水解成四种脱氧核苷酸，彻底水解成膦酸、 脱氧核糖和含氮碱基DNA军旋。DNA长链。注意比较 DNA(2) DNA解旋酶：能够将 DNA或 DNA的某一段解成两条长链，作用的部位 是碱基和碱基之间的氢键。注意：使 DNA解成两条长链的方法除用解旋酶 以外，在适当的高温(如 94C)、重金属盐的作用下，也可使(

4、3) DNA聚合酶：能将单个的核苷酸通过磷酸二酯键连接成DNA勺缺口。(4) DNA连接酶：是通过磷酸二酯键连接双链聚合酶和DNA连接酶的异同点。3. 基因进入受体细胞的载体一一“分子运输车”(1) 分子运载车的 种类：质粒：常存在于原核细胞和酵母菌中，是一种分子质量较小的环状的裸露的DNA分子，独立于拟核之外。病毒：常用的病毒有噬菌体、动植物病毒等。(2) 运载体作用：是用它做运载工具， 将目的基因转运到宿主细胞中去。 是利用它在受体细胞内对目的基因进行大量复制。(3) 作为运载体必须 具备的条件：在宿主细胞中保存下来并大量复制有多个限制性内切酶切点有一定的标记基因，便于筛选。思维探究：知识

5、点 3、4、5主要是介绍DNA重组技术的三种基本工具 及其作用。限制酶“分子手术刀”，主要是介绍限制酶的作用，切割后 产生的结果。在这部分内容学习时，应关心的问题之一是：限制酶从哪里 寻找？我们可以联想从前学过的内容一一噬菌体侵染细菌的实验，进而认 识细菌等单细胞生物容易受到自然界外源DNA的入侵。那么这类原核生物之所以长期进化而不绝灭，有何保护机制？进而联想到可能是有什么酶来 切割外源DNA而使之失效，达到保护自身的目的”。这样就对“限制酶主要是从原核生物中分离纯化出来”的认识提高了一个层次。基因进入受体细胞的载体一一 “分子运输 车”的学习内容，不能仅仅着眼于记住这几个vU条件，而应该深入

6、思考每一个条件的内涵，通 7-过深思熟虑，才能真正明确为什么要有这些条 件才能充当载体。教材拓展：拓展点一限制酶所识别序列的特点限制酶所识别的序列的特点是：呈现碱基互补对称，无论是奇数个碱 基还是偶数个碱基，都可以找到一条中心轴线，如图，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。如:GC GCCGtX以中心线为轴，两侧碱CCAGG基互补对称；AGGTCC以T为轴，两侧碱基互补对称。拓展点二 DNA连接酶连接的是什么部位？DNA连接酶是将一段 DNA片段3端的羟基与另一 DNA片段5端磷酸 基团上的羟基连接起来形成酯键，而不是连接互补碱基之间的氢键。基因工程的基本操作程序教材梳理：基因

7、工程的基本操作步骤为四步曲：目的基因的获取；基因表达载体 的构建；将目的基因导入受体细胞；目的基因的检测与鉴定。一. 目的基因的获取1目的基因：主要是指编码蛋白质的结构基因。2. 目的基因的获取方法:厂基因组文库从基因文库中获取CDNA文库人工合成丿逆转录法、根据已知的氨基酸序列推测脱氧核苷（真核生物）序列、PCR技术扩增目的基因、DNA合成仪合成等。注：需要重点复习的内容有：a基因组文库与部分基因文库的含义及区别（教材P10表格），建立基因文库的目的？如何从基因文库中获取目的基 因？ b逆转录法的过程cPCR 技术（原理、场所、条件、过程、特点）DNA复制与PCR技术列表比较。如下所示：从懈

8、钢诚卞克播:廿高基囲触鸟讎鸟也虫的过程：供常珈电中血R制畀T讦參jKiir段|£A曼棚艇4i5：fl.rif*立主特定tw bffi冃fi&a提取引壕a的逢径人工沁固强砒-L:t幽m服齡肉恰曲TU（X桃巴知夙基輕戶列合也BU联垃凰测也熹瞬列踣他If憑晉睡斥?U1 I目的基因DNA片段，导入受体菌的（1）从基因文库中获取 基因文库：将含有某种生物不同基因的许多群体储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因。构建基因文库的目的：为了在不知目的基因序列的情况下，便于获得 所需的目的基因。r基因组文库：含有一种生物的所有基因。部分基因文库（如cDNA文库）：含部分基因，可由mRNA

9、反转录而来。（2）利用PCR技术扩增目的基因PCR是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。原理：DNA双链复制原料：模板DNA RNA引物；四种脱氧核苷酸；热稳定DNA聚合酶（Taq 酶）；方法：DNA受热变性解旋为单链、冷却后RNA引物与单链相应互补序 列结合、DNA聚合酶作用下延伸合成互补链。过程：热变性（90-95 ）、退火（55-60 ）、延伸（70-75 ）。特点：指数形式扩增二. 基因表达载体的构建（基因工程的核心一体外进行）1. 目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在；可以遗传给下一代；使 目的基因能够表达和发挥作用。f2.基因表达载体的组成1目的基因：根据需要来选择。启

10、动子：位于基因首端，RNA聚合酶识别和结合的部 位，驱动转录基因。终止子：位于基因尾端，使转录在所需要的地方停下3.方法:来。I标记基因：鉴别受体细胞中是否含有目的基因。同种限制酶分别切割载体和目的基因，再用DNA连接酶把两者连接。目的基因与运载体结合（以质粒为运载体）-个忧口两个詡性耒端申汕连接酶重组DM盘分子®组质粗同种限制酶、 DNA连接酶、（目的基因、启动子、终止子、4条件：标记基因）三. 将目的基因导入受体细胞转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达 的过程。 导入植物细胞：常用农杆菌转化法（将构建的载体导入农杆菌， 再让农杆菌感染植物细胞），基因枪法、

11、花粉管通道法。（过程重 点介绍） 导入动物细胞：显微注射法（将基因表达载体提纯，用显微仪注射 到受精卵中）（过程重点介绍） 导入微生物细胞：Ca2"处理受体细胞成为感受态细胞，再进行混合。提示：农杆菌转化法的原理是利用农杆菌（胞内寄生菌）对植物的感染而把目的基因导入受体细胞。+表达检测DNA分子杂交技术，目的基因DNA条链（作探 DNA杂交，看是否有杂交带。mRNA利用DNA-mRN分子四. 目的基因的检测和鉴定 分子检测：导入检测表达检测：目的为了检测是否转录出了导入检测：利用 针）与受体细胞中提取的杂交技术，目的基因DNA一条链（作探针）与受体细胞中提取的 mRNA杂交, 看是否

12、有杂交带。 表达检测：目的为了检测目的基因是否翻译成蛋白质。抗体与蛋白 质进行抗原-抗体杂交，看是否有杂交带。个体水平的鉴定：进行抗虫、抗病的接种实验，根据其性状判断是否表达。提示：DNA分子杂交技术首先提取受体细胞中的DNA然后高温解成单链,再与同位素标记的 DNA探针杂交；抗原-抗体杂交所用到的抗体是用表 达出的蛋白质注射动物进行免疫，产生相应的抗体，并提取出而来的第3节基因工程的应用教材梳理,:知识点一植物基因工程的应用,植物基因工程技术主要用于提高农作物的抗逆能力(如抗除草剂、抗虫、 抗病、抗干旱和抗盐碱等)以及改良农作物的品质和利用植物生产药物等 方面。,1. 提高抗逆性(1) 常用

13、抗虫基因：用于抗虫(杀虫)的基因主要是Bt毒蛋白基因、蛋白酶抑制剂基因、淀粉酶抑制剂基因、植物凝集素基因等。.(2) 常用抗病基因：a.抗病毒基因有：病毒外壳蛋白基因和病毒的复制酶基因；b.抗真菌基因有：几丁质酶基因和抗毒素合成基因I -(3) 其他抗逆基因：环境条件对农作物的生产会造成很大影响，并且这些影响是多方面的，因此，抗逆性基因也有多种多样，如：抗盐碱和干旱的 调节细胞渗透压基因、抗冻基因、抗除草剂基因等等。.2. 改良植物品质,由于人们的食品含有的营养不平衡，不能满足人们对食品的要求，这样， 可以通过转基因技术，使植物能够合成某些本来不能合成的物质。如科学 家将必需氨基酸含量多的蛋白

14、质编码基因导入植物中，或者改变这些氨基 酸合成途径中某种关键酶的活性，以提高氨基酸的含量。.知识点二动物基因工程的应用.1. 用于提高动物生长速度：由于外援生长激素基因的表达可以使转基因动 物生长得更快，将这类基因导入动物体内，以提高动物的生长速率。如： 转基因绵羊和转基因鲤鱼。.2. 用于改善畜产品的品质：基因工程可用于改善畜产品的品质。如：有些 人对牛奶中的乳糖不能完全消化或食用后会出现过敏、腹泻、恶心等不适 症状，科学家将肠乳糖酶基因导入奶牛基因组，这样所获得的牛奶其成分不受影响，但乳糖的含量大大减低。3. 生产药物,基因工程不但促进了传统技术的变革，也为人类提供了传统产业难以得到 的许

15、多昂贵药品，并已形成基因工程制药业的雏形。目前诸如人胰岛素、 人生长激素、人脑激素、.a-干扰素、乙肝疫苗、蛋白C组织血纤维蛋白溶酶原激活剂等数十种基因工程药物已实现商品化。此外，还有促红细胞生成素、白细胞介素-2、肾素、心钠素等一大批珍贵药品正处于试用或 临床试验阶段。,4. 用转基因动物做器官移植的供体：目前，人体移植器官短缺是一个世界性的难题，用其它动物的器官替代，又会出现免疫排斥现象，现在，科学 家正试图利用基因工程方法对一些动物的器官进行改造，培育出没有免疫基因治疗II基因治疗是把正常基因导入病人体内，使该基因的表达产物发挥 功能，从而达到治疗疾病的目的，这是治疗遗传病的最有效的手

16、段。体外基因治疗和体内基因治疗,知识点三1.概念：排斥反应的转基因克隆器官。,2.方法：体外基因治疗：先从病人体内获得某种相关细胞，进行培养，然后在体外 完成基因转移，再筛选成功转移的细胞扩增培养，最后重 新输入患者体内，这种方法叫做体外基因治疗。,体内基因治疗：直接向人体组织细胞中转移基因的治疗方法叫做体内基因治疗。“说明：对于遗传病的治疗最根本的方法是进行基因替换或修复。基因 治疗的最佳时期理论上是受精卵时期，这样可以使个体的每个细胞都含有 正常基因，但在现实生活中是不可能的，因为不可能人人在受精卵时期进 行基因检查。其次是对患者进行相关细胞的基因替换，如：对于遗传性糖 尿病患者，只对胰腺

17、的B细胞进行基因替换，该个体就能正常分泌胰岛素, 糖尿病得以治疗；但这种局部细胞的基因替换，并没有改变其它部位细胞 的基因，如精原细胞，其后代很大可能还会患遗传性糖尿病。, 教材拓展.拓展点一该节内容是对第2节知识的综合运用，是近几年及今后几年高 考的主考点。在学习这部分知识时，要注意以下几点：.1. 熟练、灵活掌握第 2节的基础知识，形成系统的、完善的知识体系2. 目的基因来自其他生物，目的基因和受体细胞的基因构成基因重组，这 是基因工程的原理。.3. 常考知识为基因操作的基本步骤,4. 相关知识为DNA的结构和复制、基因控制蛋白质的合成及对性状的控制、基因突变、酶的性质和作用、其他生物工程

18、等,5. 解决的方法是学好相关知识，达到灵活运用程度，进行知识迁移。,拓展点二 基因治疗的过程（以镰刀形细胞贫血症的治疗为例）,步骤过程获取正常的血红 蛋白基因用限制性核酸内切酶从人的DNA分子中切取血红蛋白基因形成重组载体用冋一种限制性核酸内切酶在载体DNA上切开一个切口，用DNA连接酶将正常血红蛋白基因连接在载 体DNA上，形成重组载体重组载体的转化 与筛选将携带正常血红蛋白基因的重组载体导入患者的 造血干细胞中，并将重组载体插入到染色体。用选 择培养基筛选出含重组质粒的造血干细胞。将含正常血红蛋 白基因的造血干 细胞回输给患者 骨髓将携带正常血红蛋白基因的造血干细胞输入患者 骨髓中，此造血干细胞产生含正常血红蛋白的红细 胞，以根治镰刀形细胞贫血症拓展点三利用微生物生产药物的优越性.所谓利用微生物生产蛋白质类药物，是指将人们需要的某种蛋白质的 编码基因，构建成表达载体后导入微生物，然后利用微生物发酵来生产蛋 白质类药物。与传统的制药相比有以下优越性：,1. 利用活细胞作为表达系统，表达效率高，无需大型装置和大面积厂 房就可以生产出大量药品。,2. 可以解决传统制药中原料来源的不足