无菌检测方法

1、四川乐至贵均卫生材料有限公司医疗器械产品无菌检测方法1.目的建立无菌检测标准规程，对灭菌后的医疗器械产品进行无菌检测，以确定灭菌的有效性。2.范围本规程适用于本公司对医疗器械产品的无菌检测。3.依据中国药典2015版4.设备、器皿、药品的准备4.1设备的准备电子天平、干热灭菌箱、高压灭菌箱、洁净工作台、放大镜、移液枪、电热培养箱、霉 菌培养箱、冰箱、斜口钳、接种环、酒精灯4.2器皿的准备锥心瓶（500ml）、烧杯（1000ml）、试剂瓶（60ml）、量筒（50ml、1000ml）、培养皿（90mmX 15mm）、斜口钳、玻璃棒。PH7.0无菌氯化钠溶液。4.3药品的准备硫乙醇酸盐流体培养基、胰

2、酪大豆胨液体培养基、纯化水、5.器皿的清洗将所需的锥形瓶、烧杯、试剂瓶、培养皿、玻璃棒放入超声波清洗机中用纯化水清洗两次，每次15分钟，将清洗完的器皿在 180C条件下进行干热灭菌2小时。6.取样按灭菌批次或者生产批次进行取样，随机抽取同一型号的产品4件作无菌检测样品7.培养基的制备7.1硫乙醇酸盐流体培养基的制备取15g硫乙醇酸盐流体培养基和1000ml纯化水于烧杯中混合，加热至微沸（注意加热过程中要不断地搅拌， 使其混合均匀）用棉花塞塞紧复用无尘布和绳子绑好后转移至高压灭菌锅内灭菌，灭菌温度为121 C，灭菌时间30分钟。灭菌后摇均，冷却至 45C待用。7.2胰酪大豆胨液体培养基的制备取1

3、5g胰酪大豆胨和1000ml纯化水于烧杯中混合，操作方法同6.1。8.培养基灵敏度检查8.1菌种的要求培养基灵敏度检查所用的菌株（金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌）传代次数不得超过5代。8.2菌液的制备接种金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基上,30-35 C培养24小时;接种枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基上,20-25 C培养24小时。将上述经24小时培养后的培养物用0.9 %无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。制备好的菌液应在 2-8 C条件下保存，并在24小时内使用。8.3接种及培养取每管装量15ml的硫乙醇酸盐流体培养基3支

4、，其中2支接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌，另一支不接种作为空白对照,30-35 C培养3天逐日观察并记录。取每管装量10ml的胰酪大豆胨液体培养基3支，其中2支接种小于100cfu的枯草芽孢杆菌，另1支不接种作为空白对照，20-25C培养5天，逐日观察记录。8.4灵敏度检测结果判断空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基试管菌落均生长良好，则判定该培养基的灵敏度检查符合规定。9.供试品的无菌检测9.1对照试验取每管装量15ml的硫乙醇酸盐流体培养基3支，接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌,支不接种作为空白对照，30-35C培养14天逐日观察并记录。取每管装量10ml的胰酪大豆胨液体培养基3

5、支，其中2支接种小于100cfu的枯草芽孢杆菌，另1支不接种作为空白对照，20-25C培养14天，逐日观察记录。9.2供试品的准备及接种于微生物实验室超净工作台内将样品剪成小碎段（23cm），其中2件接种于各培养皿足以浸没供试品的适量硫乙醇酸盐流体培养基中,另外2件接种于各培养皿足以浸没供试品3035 C条件下培2025 C条件下培的适量胰酪大豆胨液体培养基中，冷却。9.2培养将接种过的硫乙醇酸盐流体培养基的培养皿倒置于电热培养箱中 养14天，逐日观察是否有菌落生长并记录;将接种过的胰酪大豆胨液体培养基的培养皿倒置于霉菌培养箱中 养14天，逐日观察是否有菌落生长并记录。10.供试品无菌检测结果

6、判定若上述接种后的培养基经 14天培养后均无菌落生长， 则可判定供试液为无菌， 即为合 格；反之，则为不合格。11.无菌检测报告（见附表 1）无菌检测报告检测依据样品数量样品名称中国药典2015版检测日期 样品批号 样品规格培养基的灵敏度检测硫乙醇酸盐流体培养基（培养3天） 胰酪大豆胨培养基（培养 5天）培养天数5结论：日期:培养天数1011121314结论报告日期:备注接种金黄色葡萄球菌接种金黄色葡萄球菌空白接种枯草芽抱杆菌接种枯草芽抱杆菌空白供试品的无菌检测硫乙醇酸盐流体培养基（培养14天）空白改良马丁培养基（培养 14天）金黄色葡萄球菌样品1样品2白色念珠菌样品3样品4空白“ + ”表示有菌生长；“-”表示无菌生长；培养基的灵敏度检测中空白试验应无菌生长