婴幼儿食品和乳品中维生素A、D、E的测定（二）

1、婴幼儿食品和乳品中维生素a、d、e的测定（二） 6.1.1 含淀粉的试样 称取混合匀称的固体试样约5g或液体试样约50g(精确到0.1mg)于250ml三角瓶中，加入1g (4.1),固体试样需用约50ml 4550的水使其溶解，混合匀称后充氮，盖上瓶塞，置于60±2培养箱(5.6)内培养30min。 6.1.2 不含淀粉的试样 称取混合匀称的固体试样约10g或液体试样约50g(精确到0.1mg)于250ml三角瓶中，固体试样需用约50ml 4550水使其溶解，混合匀称。 6.2 测定维生素d的试样需要同时做回收率试验。 6.3 待测液的制备 6.3.1 皂化：于上述处理的试样溶液中

2、加入约100ml的溶液(4.10),充分混匀后加25ml水溶液(4.5)混匀，放入磁力搅拌棒，充氮排出空气，盖上胶塞。1000ml的烧杯中加入约300ml的水，将烧杯放在恒温磁力搅拌器(5.3)上，当水温控制在53±2时，将三角瓶放入烧杯中，磁力搅拌皂化约45min后，取出立即冷却到室温。 6.3.2 提取：用少量的水将皂化液所有转入500ml分液漏斗中，加入100ml(4.6),轻轻摇动，排气后盖好瓶塞，室温下振荡约10min后静置分层，将水相转入另一500ml分液漏斗中，按上述办法举行其次次萃取。合并醚液，用水洗至近中性。醚液通过过滤脱水，滤液收入500ml圆底烧瓶中，于旋转蒸发

3、器上在40±2充氮条件下蒸至近干(绝不允许蒸干)。残渣用石油醚转移至10ml容量瓶中，定容。 6.3.3 从上述容量瓶中精确移取2.0ml溶液放入试管a中，再精确移取7.0ml溶液放入另一试管b中，将试管置于40±2的氮吹仪(5.4)中，将试管a和b中的石油醚吹干。向试管a中加50ml(4.7),振荡溶解残渣。向试管b中加2.0ml正己烷(4.8),振荡溶解残渣。再将试管a和试管b以不低于5000转/分钟的速度离心10min,取出静置至室温后待测。a管用来测定维生素a、e、b管用来测定维生素d。 6.4 测定 6.4.1 维生素a、e的测定 6.4.1.1 色谱参考条件 色

4、谱柱：c18柱，250mm×4.6mm,5um,或具同等性能的色谱柱。 流淌相：(4.7)。 流速：1.0ml/min。 检测波长：325nm；：294nm。 柱温：35±1。 进样量：20ul。 6.4.1.2 维生素a、e标准曲线的绘制 分离精确吸取维生素a标准储备液(4.11.1)0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml、2.50ml于50ml棕色容量瓶中，用定容至刻度混匀。此标准系列工作液浓度分离为1.00ug/ml、2.00ug/ml、3.00ng/ml、4.00ug/ml、5.00ug/ml。 分离精确吸取维生素e标准储备液(4.11.2)1.00

5、ml、2.00ml、3.00ml、4.00ml、5.00ml于50ml棕色容量瓶中，用乙醇定容至刻度混匀。此标准系列工作液浓度分离为10.0ug/ml、20.0ug/ml、30.0ug/ml、40.0ug/ml、50.0ug/ml。 分离将维生素a、e标准工作液注入液相色谱仪中,得到峰高(或峰面积)。以峰高(或峰面积)为纵坐标，以维生素a、e标准工作液浓度为横坐标分离绘制维生素a、e标准曲线。6.4.1.3维生素a、e试样的测定将试液(6.3.3中a管)注入液相色谱仪中，得到峰高(或峰面积)，按照各自标准曲线得到待测溶液中维生素a、e的浓度。 6.4.2 维生素d的测定 6.4.2.1 维生素

6、d待测液的净化 6.4.2.1.1 色谱参考条件。 色谱柱：硅胶柱，150mm×4.6mm,或具同等性能的色谱柱。 流淌相：(4.9)与(4.8)按体积比1:1混合，并按体积分数0.8%加入(4.3)。 流速：1ml/min。 波长：264nm。 柱温：35±1。 进样体积：500ul。 6.4.2.1.2 取约0.5ml维生素d标准储备液于10ml具塞试管中，在40±2的氮吹仪(5.4)上吹干。残渣用5ml正己烷振荡溶解。取该溶液50ul注入液相色谱仪中测定，确定维生素d保留时光。然后将500ul待测液(6.3.3中b管)注入液相色谱仪中，按照维生素d标准溶液保

7、留时光收集维生素d馏分于试管c中。将试管c置于40±2条件下的氮吹仪中吹干，取出精确加入1.0ml(4.7),残渣振荡溶解，即为维生素d测定液。 6.4.2.2 维生素d测定液的测定 6.4.2.2.1 参考色谱条件 色谱柱：c18柱，250mm×4.6mm,5um,或具同等性能的色谱柱。 流淌相：甲醇(4.7)。 流速：1ml/min。 检测波长：264nm。 柱温：35±1。 进样量：100ul。 6.4.2.2.2 标准曲线的绘制 分离精确吸取维生素d2(或d3)标准储备液(4.11.3、4.11.4)0.20ml、0.40ml、0.60ml、0.80ml、1.00ml于100棕色容量瓶中，用乙醇定容至刻度混匀。此标准系列工作液浓度分离为0.200ug/ml、0.400ug/ml、0.600ug/ml、0.800ug/ml、1.000ug/ml。 分离将维生素d2(或d3)标准工作液注入液相色谱仪中，得到峰高(或峰面积)。以峰高(或峰面积)为纵坐标，以维生素d2(或d3)标准工作液浓度为横坐标分离绘制标准曲线。 6.4.2.2.3 维生素d试样的测定 吸取维生素d测定液(6.4.2.1中