生理指标测定试验方案汇总

1、预测指标：1.抗氧化酶系统、MDA2 .可溶蛋白、超氧阴离子自由基3.叶绿素、类胡萝卜素4.可溶性糖5.游离氨基酸6.过氧化氢7 .谷胱甘肽、ASA1.抗氧化酶系统、MDAA酶活测定试齐I：PB赛冲液0.05MpH7.8:取0.663gNaH2PO42H2O和16.384gNa2HPO412H20力口PVP10g并加EDTA者EDTAa,使其浓度为2mM加蒸储水定容至1L.用前冰箱或冰上预冷.样品制备鲜样0.1-0.5g参加1ml磷酸缓冲液0.05M,pH7.8,稍许石英砂,研磨成匀浆；移入10ml离心管中,再用4ml磷酸缓冲液分两次洗涤研钵并全部转入离心管中；10000Xg4C下离心20mi

2、n;上清夜贮于4c冰箱中保存备测.同时称取鲜样一份0.1g左右烘干称重.SOD入=560nm试剂配制：1LPBS缓冲液中参加Met1.93973gNBT氮蓝四陛0.061323gEDTA-Na20.0037224g核更系0.00075272g实验步骤：2.725mL反响液+250uL蒸储水+25uL酶液【样品管】2.75mL反响液+250uL蒸储水光照作为100%CK1照光对照管】2.75mL反响液+250uL蒸储水黑暗作为调零【空白调零管】4000lx日光灯下反响20分钟,560nm比色.反响温度2535C.SODM生单位以抑制NBT光化复原的50%为一个酶活性单位表示按下式计算SODM生：

3、SOD总活性=Ack-AE*V/0.5*Ack*w*Vt式中SOD总活性以鲜重酶单位每克表示,Ack为照光对照管的吸光度,AE为样品管的吸光度,V为样品液的总体积ml,Vt为测定时样品用量ml,w为样品鲜重g【空白调零管】可在光反响快结束前配制并用黑色纸或铝箔包裹以避光.【样品管】和【照光对照管】在光反响快结束后至测定前应避光处理.POD入=470nm比色试剂配制：1.5%愈创木酚1.5ml愈创木酚,用蒸储水定容到100ml300uM的H2O2取30%的H2O21.53ml,用蒸储水定容到50ml;实验步骤：100ul酶液+2700ulPBS+100ul愈创木酚+100ulH2O2于普通比色皿

4、,轻轻摇匀2-秒,A470动力学测定1分钟.选择时间段较为笔直的曲线斜率为activity,此后测定均参考该时间段.结果计算：PODmmol/g尸activityxAxVxa/ExwA反响液总体积/ml;V提取液总体积/ml;a测定液体积/ml;w材料鲜重/g;E吸光系数/mM-cm-1CAT240nm比色试剂配制：300uM的H2O2取30%的H2O21.53ml,用蒸储水定容到50ml;实验步骤：100ul酶液+2800ulPBS+100ulH2O2,于石英比色皿,轻轻摇匀2-秒,A240动力学测定1分钟.选择时间段较为笔直的曲线斜率为activity,此后测定均参考该时间段.结果计算：C

5、ATmmol/g尸activityXAXVxa/ExwAPX入=290nm比色试剂配制：7.5mM的抗坏血酸AsA:66mgAsA用蒸储水定容到50ml;300uM的H2O2取30%的H2O21.53ml,用蒸储水定容到50ml;实验步骤：100ul酶液+2700ulPBS+100ulAsA+100ulH2O2,于石英比色皿,轻轻摇匀2-秒,A290动力学测定1分钟.选择时间段较为笔直的曲线斜率为activity,此后测定均参考该时间段.结果计算：CATmmol/g尸activityXAXVxa/ExwB.丙二醛MDA含量的测定入=450,532,600nm比色试剂配制：5犷氯乙酸TCA:25

6、g三氯乙酸定容到500mLMDA反响液：2.5g硫代巴比妥酸,先用少量1M的氢氧化钠溶解,再用5犷氯乙酸定容到500mL实验步骤：0.5mL酶液+2.5mL反响液,沸水浴反响15分钟,立即冰浴,4800rpm离心10分钟,上清转入新管,波长450,532和600下比色,MD顺应液调零.结果计算：丙二醛含量nmol.g-1=D532D600*A*V/a*1.55*10-1*w式中A为反响液总量 mD;V为提取液总量 mL ;a为测量用提取液量 mL ;w为材料鲜重 g.1.55X10-1为丙二醛的umol/L消光系数nmol/mL消光系数或者：MD除度umol/L=6.45D532D6000.5

7、6D450丙二醛含量umol.g-1=MDA浓度X提取液总体积ml/组织鲜重g/1000植物体可溶性蛋白质含量测定比色原理：染料考马斯亮蓝G-250在游离态下呈红色,当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色,前者最大光吸收在465nm,后者在595ns在一定蛋白质浓度范围内0100g/ml,蛋白质色素结合物在595nm波长下的光吸收与蛋白质含量成正比.故可用于蛋白质的定量测定.蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内到达平衡,完成反响十分迅速,其结合物在室温下1h内保持稳定.该反响非常灵敏,可测微克级蛋白质含量,所以是一种比拟好的蛋白质定量法.【试剂】1、65mmol/L磷酸钾缓冲液p

8、H7.8;如超氧阴离子自由基含量测定用.称取K2HPO43H2OMW=228.229.1234g和KH2PO4MW=136.093.406g,蒸储水定容至U1L.或K2HPO43H2O4.562g和KH2PO41.703g,蒸储水定容至U0.5L.2、考马斯亮蓝G-250:称取100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml90叱醇中,参加85%W/V磷酸100ml,最后用蒸储水定容至1000mlo滤纸过滤后低温储存.常温下可放置一个月；3、磷酸85%W/V:也即商业磷酸浓度85%.直接用.4、0.15M的NaCl标准曲线用：NaCl0.8766g蒸储水定容到100ml.【方法】【方法】1.标准曲线

9、的绘制血清白蛋白BSA先用0.15M的NaCl配制成2mg/ml的原液.表1配制01000dg/ml血清白蛋白液123456牛血清蛋白原液ml00.10.20.30.40.5磷酸钾缓冲液量ml1.00.90.80.70.60.5蛋白质含量g/ml02004006008001000以上各管混匀后,各取0.1ml于新的10ml离心管内,各加5ml考马斯亮蓝染液,混匀放置2min,在595nm下比色,绘制标准曲线.折衷：表2配制01000dg/ml血清白蛋白液-123456牛血清蛋白原液ul01020304050磷酸钾缓冲液量ul1009080706050蛋白质含量g/ml0200400600800

10、1000以上各管混匀后,各加5ml考马斯亮蓝染液,曲线.2.样品提取液中蛋白质浓度的测定混匀放置2min,在595nm下比色, 绘制标准样品制备参见超氧阴离子自由基含量测定方案.各加5ml考马斯凫蓝染液,混匀放置2min,3.结果计算取样品上清液在595nm下比色.0.1ml于新的10ml离心管内,式中C查林轴喇嘛!衔由童侬鲁iff=CgVW;V提取液总积 ml ;此为样品提取液总体积为3ml;W取样量g.X测定以上3工程时,同时取局部同批剩余鲜样称重后转入纸袋烘干称重.2.可溶蛋白、超氧阴离子自由基_植物材料0.1-0.2g左右记录准确称量值65mmol/L磷酸钾缓冲液pH7.81ml一少许

11、石英砂一冰上充分研磨一转入离心管一磷酸钾缓冲液洗涤研钵2次,每次1ml全部转入离心管样品提取液总体积为3ml-4c10000r/min离心15min一取上清液转入新管标记低温保存待测液.A.超氧阴离子自由基入=530nm比色原理：2Q.-+盐酸羟胺一NQ-+磺胺一重氮化磺胺+一泰胺一偶氮化合物粉红色,在波长530nm处有显著的光吸收试剂准备：1、65mmol/L磷酸钾缓冲液pH7.8;【不用磷酸钠】称取&HPO-3H2OMW=228.229.1234g和KH2PO4MW=136.093.406g,蒸储水定容到1L.或KHPO-3H2.4.562g和KHPO1.703g,蒸储水定容到0.

12、5L.2、10mmol/L盐酸羟胺；称取盐酸羟胺MW=69.490.06949g蒸储水定容到100mL3、12mol/L乙酸：称取冰乙酸MW=60.05144.1g蒸储水定容到200mL4、58mmol/L磺胺12mol/L乙酸为溶剂配制;称取磺胺MW=172.210.9988g,用12mol/L乙酸溶解并定容到100mL5、7mmol/L-泰胺12mol/L乙酸为溶剂配制；称取a-蔡胺MW=143.190.100233g0.1g,用12mol/L乙酸溶解并定容到100mL6、三氯甲烷氯仿；7、NaNO230umol/LNaNO2用65mmol/L磷酸钾缓冲液配制和稀释：称取NaNO2MW=6

13、9.000.207g用65mmol/L磷酸钾缓冲?定容到1L此时NaNO2浓度3mM从中吸取5ul,加65mmol/L磷酸钾缓冲液495ul即可30uM.其它25,20,15,10,5umol/LNaNO2,依此.测定流程图空白调零组：磷酸钾缓冲液0.5ml一盐酸羟胺0.1ml一摇匀一25c水浴10min一冰浴一磷酸钾缓冲液0.5ml一摇匀一25c水浴20min一冰浴一磺胺1ml-“-泰胺1ml一摇匀一25c水浴20min一冰浴一三氯甲烷3ml-4c10000r/min离心3min一上层水相测定A530.试验组：磷酸钾缓冲液0.5ml一盐酸羟胺0.1ml一摇匀一25c水浴10min一冰浴一上清

14、液0.5ml一摇匀一25c水浴20min一冰浴一磺胺1ml一“-蔡月堂1ml一摇匀一25c水浴20min一冰浴一三氯甲烷3ml-4c10000r/min离心3min一粉红色水相上层测定A530.标准曲线：NaNO2i65mmol/L磷酸钾缓冲全彼配置成30umol/L,再稀释成25,20,15,10,5和0umol/L.磷酸钾缓冲液0.5ml一盐酸羟胺0.1ml一摇匀一25c水浴10min一冰浴一加各种不同浓度的NaNO2各取0.5ml一摇匀一25c水浴20min一冰浴一磺胺1ml-“-泰胺1ml一摇匀一25c水浴20min一冰浴一三氯甲烷3ml一10000r/min离心3min一粉红色水相上

15、层测定A530.结果计算：通过标准曲线生成的NO2与A530的方程,求出NO2-,乘2那么得O2.-.O2.-产生速率=O2.-/样品Pr含量/20min;O2.-产生总量=O2.-/样品Pr含量25c水浴共培养60min.说明：鲜样测定,不能用于干样品,样品也不宜液氮速冻后超低温冰箱储存后测定.盐酸羟胺与样品上清液的25c水浴共培养20min用于O2.-产生速率测定；如果25c水浴共培养60min那么用于O2.-含量测定.25c水浴共培养的时间为关键时间,必须掌握好,此步处理前后样品试剂溶液尽量处于冰浴状态.待测液制备后应尽快测定.干旱胁迫处理,要同时称量所取用的同一样品烘干至恒重称出烘干重

16、,以便计算单位干重样品的O2.-产生速率； 或者用的同一新鲜样品测定蛋白质含量,以便计算单位蛋白质质量的O2.-产生速率.B.可溶性蛋白质含量测定比色原理：染料考马斯亮蓝G-250在游离态下呈红色,当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色,前者最大光吸收在465nm,后者在595ns在一定蛋白质浓度范围内0100g/ml,蛋白质色素结合物在595nm波长下的光吸收与蛋白质含量成正比.故可用于蛋白质的定量测定.蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内到达平衡,完成反响十分迅速,其结合物在室温下1h内保持稳定.该反响非常灵敏,可测微克级蛋白质含量,所以是一种比拟好的蛋白质定量法.【试剂】1

17、、65mmol/L磷酸钾缓冲液pH7.8;如超氧阴离子自由基含量测定用.称取K2HPO43H2OMW=228.229.1234g和KH2PO4MW=136.093.406g,蒸储水定容至U1L.或K2HPO43H2O4.562g和KH2PO41.703g,蒸储水定容至U0.5L.2、考马斯亮蓝G-250:称取100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml90叱醇中,参加85%W/V磷酸100ml,最后用蒸储水定容至1000mlo滤纸过滤后低温储存.常温下可放置一个月；3、磷酸85%W/V:也即商业磷酸浓度85%.直接用.4、0.15M的NaCl标准曲线用：NaCl0.8766g蒸储水定容到100m

18、l.【方法】【方法】1.标准曲线的绘制血清白蛋白BSA先用0.15M的NaCl配制成2mg/ml的原液.表1配制01000Pg/ml血清白蛋白液123456牛血清蛋白原液ml00.10.20.30.40.5磷酸钾缓冲液量ml1.00.90.80.70.60.5蛋白质含量g/ml02004006008001000以上各管混匀后,各取0.1ml于新的10ml离心管内,2min,在595nm下比色,绘制标准曲线.折衷：表2配制01000dg/ml血清白蛋白液各加5ml考马斯凫蓝染液,混匀放置123456牛血清蛋白原液ul01020304050磷酸钾缓冲液量ul1009080706050蛋白质含量g/

19、ml02004006008001000以上各管混匀后,各加5ml考马斯凫蓝染液,混匀放置2min,595nm绘制标准曲线.2.样品提取液中蛋白质浓度的测定样品制备参见超氧阴离子自由基含量测定方案.取样品上清液0.1ml于新的10ml离心管内,各加5ml考马斯亮蓝染液,混匀放置2min,在595nm下比色.3.结果计算式中C查械猫喇岬际瘠fiOTg/t爵由)=CgVW;V提取液总积(ml);此为样品提取液总体积为3ml;W取样量(g).X测定以上3工程时,同时取局部同批剩余鲜样称重后转入纸袋烘干称重.3.叶绿素、类胡萝卜素叶绿素、类胡萝卜素测量实验步骤：叶片快速剪取并精确称重0.1g左右,重复3

20、次.再快速剪成细丝(或用打孔器打成小的叶圆片)转入洁净离心管,管内加提取液10ml,于室温下遮光静置至样品完全发白(期间屡次摇动提取液),对提取液比色(以不加叶片的提取液调零),然后据提取液类型按下面公式计算叶绿素和类胡卜素含量.剪取叶片同时再精确称取0.1-0.2g左右叶片,1050c杀青10min,80oC烘干恒重后称重.结果计算：一、采用丙酮、无水乙醇、蒸储水混合提取液(三者体积比4.5:4.5：1)Chla(mg/L尸9.784OD6630.990OD645,Chlb(mg/L尸21.426OD6454.650OD663,Chl(a+b)(mg/L)=5.134OD663+20.436

21、OD645,Car(mg/L)=4.695OD4400.268(Chla+Chlb),采用波长663,645和440nmo唐延林,黄敬峰,王人潮.水稻不同发育时期高光谱与叶绿素和类胡萝卜素的变化规律.中国水稻科学2004,18(1)59-66二、采用80断酮提取液采用波长663,646和470ns(ArnonandLichtenthale)Chla(mg/L)=12.21D663-2.81D646;Chlb(mg/L)=20.13D646-5.03D663;Chl(a+b)(mg/L)=Chla+Chlb=17.32D645+7.18D663;Car(mg/L)=(1000D470-3.27C

22、hla-104Chlb)/229三、采用采用95叱醇提取液-采用波长665,649和470ns(邹琦等)Chla(mg/L)=13.95D665-6.88D649;Chlb(mg/L)=24.96D649-7.32D665;Chl(a+b)(mg/L)=Chla+Chlb=18.08D645+6.63D663;Car(mg/L)=(1000D470-2.05Chla-114.8Chlb)/245结果：Chl(mg/g)=浓度(mg/L)x提取液体积(ml)/质量(g)x10004.可溶性糖意酮法测定可溶性糖样品制备测定：取新鲜植物叶片(或干材料),擦净外表污物,剪碎混匀,精确称取0.05-0.

23、1g左右,转入研钵,加少许石英砂,1ml蒸储水充分研磨后转入10ml离心管,4ml蒸储水分次洗涤研钵后也完全转入离心管内.离心管沸水浴30min,5000rpm离心5min,上清转入新管,原来离心管残渣再加水5ml,混匀后沸水浴10min,5000rpm离心5min,上清一并转入新管,并蒸储水定容到10ml混匀备测.【原理】糖在浓硫酸作用下,可经脱水反响生成糠醛或羟甲基糠醛,生成的糠醛或羟甲基糠醛可与慈酮反响生成蓝绿色糠醛衍生物,在一定范围内,颜色深浅与糖含量成正比.用意酮法测出的碳水化合物含量,实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量.【试剂】1 .慈酮乙酸乙酯试剂：取分析纯慈酮1g,溶于50

24、ml乙酸乙酯中,贮于棕色瓶中,在黑暗中可保存数星期,如有结晶析出,可微热溶解.2 .浓硫酸(比重1.84).标准曲线制备：100g/ml蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80c下烘至恒重,精确称取1.000g.加少量水溶解,移入100ml容量瓶中,参加0.5ml浓硫酸,用蒸储水定容至刻度；精确吸取1%蔗糖标准液1ml参加100ml容量瓶中,加水定容.表各试管加溶液和水的量管号012345678910100g/ml蔗糖液(ul)04080120160200水(ul)400360320280P240200此时蔗糖浓度科g/ml01020304050取10ml离心管11支,从010分别编号,根据上表参加蔗糖

25、标准液和水后,逐管参加意酮乙酸乙酯试剂0.1ml并小心参加浓硫酸1ml,加盖后充分震荡,立即沸水浴1min,取出冷却后630nm比色,蒸储水调零.上清液0.2ml加蒸储水0.2ml,参加慈酮乙酸乙酯试剂0.1ml并小心参加浓硫酸1ml,加盖后充分震荡,立即沸水浴1min,取出冷却后630nm比色,蒸储水调零.结果计算：可溶糖含量mg/gFWorDW=C*V/W/1000C：标曲所得可溶糖含量ug/ml;V:样品提取液体积10ml;W样品鲜重或干重g.5.游离氨基酸游离氨基酸含量测定样品制备测定：叶片准确称取0.05-0.1g于研钵,1ml的10叱酸重复研磨,转入10ml洁净离心管,2ml的10

26、叱酸分两次洗涤研钵并完全转入离心管内,加无氨蒸储水可以超纯水替代定容到10ml离心管口位置,摇匀后5000rpm离心10min,上清液转入新管备测.同时取局部同批剩余鲜样称重后转入纸袋烘干称重.试剂配制：1、醋酸钠-醋酸缓冲液pH=4.9:9.679g的醋酸钠CH3COON由口4.924g的醋酸CH3COOH蒸储水定容到100ml.2、苛三酮缓冲显色液1%:1.05g苛三酮+18ml正丙醇+25ml正丁醇+50ml乙二醇+12ml醋酸钠-醋酸缓冲液.3、ASA抗坏血酸0.1%:50mg的ASA溶于50ml的无氨蒸储水可以超纯水替代.现用现4、10叱酸：10ml冰乙酸加90ml蒸储水.5、80叱

27、醇：850ml的95%勺乙醇可以组培间大桶酒精替代力口150ml蒸储水.6、氨基酸标准溶液5.0ug/ml:烘干恒重的谷氨酸0.0536g,先用少量的10%勺异丙醇0.5ml异丙醇加4.5ml蒸储水混匀溶解后,转入100ml洁净容量瓶,用蒸储水定容至刻度.从中取5ml用水稀释到50ml即可.标准曲线制备：试齐一一离心唯字号p2回456氨基酸标准溶液ul04080120160200无氨蒸溜水ul20016012080400前二酮缓冲显色液ul700700700700700700抗坏血酸ul202020202020氨基酸含量ug/ml012345根据上表依次参加各试剂,摇匀后,沸水浴显色20min

28、,取出后迅速冰浴,并不时摇动离心管,当溶液呈蓝紫色时各加80叱酉I2ml和蒸储水2.08ml,摇匀后,570nm比色绘制标曲.上清液200ul参加到10ml离心管内一加苛三酮缓冲显色液700ul0.1%抗坏血酸20ul一沸水浴显色20min一迅速冰浴一溶液呈蓝紫色时一加80叱酉12ml一蒸储水2.08ml570nm比结果计算：AA含量mg/gFWorDW=C*V/W/1000C：标曲所得AA含量ug/ml;V:样品提取液体积10ml;W样品鲜重或干重g.6.过氧化氢植物组织中过氧化氢含量测定入=415nm样品提取和测定：1称取新鲜植物组织0.2g左右视H2O2含量多少而定,参加4c下预冷的丙酮

29、1ml和少许石英砂研磨成匀浆后转入离心管,再用2-3ml冷丙酮分次洗涤研钵并把洗涤液转入离心管,3000r/min下离心10min或8000rpm离心5min,同时准备新的离心管并编号标记并称重记录,离心完以后,上清液转入新离心管后,再次称重,两次称重差值除以丙酮密度0.792g/ml,即为样品提取液总体积.【原理】H2O2与硫酸钛或氯化钛生成过氧化物一钛复合物黄色沉淀,可被H2SO4溶解后,在415nm波长下比色测定.在一定范围内,其颜色深浅与H2O凝度呈线性关系.【试剂】1、100mol/LH2O2丙酮试剂：取30附析纯H2O210.2口,溶于100ml的丙酮此时H2O2为1mmol/L,

30、混匀后从中吸取506再加丙酮4506混匀 此时H2O2为100科mol/L.2、1mol/L硫酸： 浓硫酸56ml,缓慢加蒸储水944ml,混匀冷却.3、5%W/V硫酸钛：称取5g硫酸钛,加蒸储水100ml溶解.4、丙酮冰浴或冰箱预冷；5、浓氨水.【方法】【方法】1.制作标准曲线：取10ml离心管7支,顺序编号,并按表1和2参加试剂.表1测定H2O2浓度标准曲线配置表试齐J(ml)离心管号12345167100科mol/LH2O200.10.20.40.60.81.04C卜预冷丙酮1.00.90.80.60.40.205%1酸钛0.10.10.10.10.10.10.1浓氨水0.20.20.2

31、0.20.20.20.23000r/min离心10min,弃去上清夜,留沉淀1mol/L硫酸5.05.05.05.05.05.05.0表2测定H2O2浓度标准曲线配置表试齐J(ml)离心管号12345671mmol/LH2O200.10.20.40.60.81.04C卜预冷丙酮1.00.90.80.60.40.205%|酸钛0.10.10.10.10.10.10.1浓氨水0.20.20.20.20.20.20.23000r/min离心10min,弃去上清夜,留沉淀1mol/L硫酸5.05.05.05.05.05.05.0待沉淀完全溶解后,将其小心转入新的10ml离心管中,并用蒸储水少量屡次冲洗

32、原来的离心管,将洗涤液合并后定容至10ml刻度,415nm波长下比色.2.2用移液管吸取样品提取液1ml,按表1或2参加5%1酸钛0.1ml和浓氨水0.2ml,待沉淀形成后3000rpm/min离心10min或8000rpm离心5min,弃去上清液.沉淀用冷丙酮反复洗涤35次,每次1ml具体为：沉淀加冷丙酮1ml,混匀,8000rpm离心1min,弃掉丙酮；重复此步骤三次,直到去除植物色素.3向洗涤后的沉淀中参加1mol/L硫酸5ml,摇匀,待完全溶解后,与标准曲线同样的方法定容并比色.3.结果计算：植物组织中H2O2含量mol/gFw尸FWV1式中C一标准曲线上查得样品中H2O2浓度Wmol

33、;Vt一样品提取液总体积ml;V1测定时用样品提取液体积ml;即1ml.FW一植物组织鲜重g.7.谷胱甘肽、ASAA.谷胱甘肽含量的测定复原型谷胱甘肽GSH是植物细胞内另一种重要的抗氧化剂.它含有活性的萌基,极易被氧化.本实验利用疏基试剂DTN创U定GSH的含量.试剂药品：GSH勺提取下面的ASA测定也使用该提取液精确称0.2g左右叶片,将样品剪碎参加5mL10%三氯乙酸,研磨,15000Xg离心10min,留取上清液备测.同时再精确称取0.2g左右叶片,1050c杀青10min,80oC烘干恒重后称重.1、10%三氯乙酸TCA溶?夜W/V:10g三氯乙酸,用蒸储水配成100mL溶液；2、15

34、0mM磷酸缓冲液pH7.5;含有5mMEDTA:Na2HPO412H2c38.679g和NaH2P042H2O3.952g溶于约1L水；参加EDTA#其浓度为5mM搅匀后蒸储水定容.3、6mMDTNB上面的150mMNaH2PO4pH7.5;含有5mMEDTA配制实验步骤：1、GSHB推曲线的制作配制浓度分别为0mM0.02mM、0.04mM0.06mM、0.08mM、0.10mM0.12mM的标淮GSH液,吸取上述标准液各0.25mL.分别参加150mMNaH2P04pH7.42.60mL,混合均勾后,往各管中加人DTNB式剂0.15mL,摇匀厉,30c保温反响5min,测A412nm以加磷酸缓冲?代替DTNB式齐IJ作空白对照.将测定结果以GSHB度为横坐标、光密度值为纵坐标制作标淮曲线.2、GSH的提取下面的ASA测定也使用该提取液精确称0.2g左右叶片,将样品剪碎参加5mL10%三氯乙酸,研磨,15000Xg离心10min,留取上清液备测.同时再精确称取0.2g左右叶片,1050c杀青10min,80