M2型抗线粒体抗体在原发性胆汁性肝硬化中的应用研究

1、M2 型抗线粒体抗体在原发性胆汁性肝硬化中的应用研究摘要： 目的： 探讨 M2 型抗线粒体抗体诊断原发性胆汁性肝硬化的临床价值。 方法 回顾分析 48 例原发性胆汁 性肝硬化（观察组）和 40 例其他原因导致肝硬化（对照组） 患者血清 M2 型抗线粒体抗体、碱性磷酸酶（ ALP ）及氨酰 转肽酶（ GGT ）检测结果。 结果 观察组患者血清 M2 型抗 线粒体抗体检测阳性率 91.67%；高于对照组的 2.50%，差异有统计学意义（ P0.05）。 结论 原发性胆汁性肝硬化患者血 清 M2 型抗线粒体抗体阳性率较高，有助于早期诊断，为临床治疗提供参考依据。关键词： 原发性胆汁性肝硬化；抗线粒体

2、抗体；M2中图分类号】 R575.22 【文献标识码】 B 【文章编号】1002-3763（2014）04-0065-01近年来，随着检验医学的飞速发展，敏感检测方法相继开展，无症状、无黄疸的原发性胆汁肝硬化早期诊断逐渐增多。文献报道 1 ，抗线粒体抗体与原发性胆汁性肝硬化有关，高滴度的抗线粒体抗体是其主要的血清学指标，其中M2 亚型具有特异性。本研究回顾性分析68 例原发性胆汁性肝硬 化患者 M2 型抗线粒体抗体检测结果，报道如下。1.资料与方法1.1 诊断标准 参照2009 年美国肝病学会原发性胆汁性肝硬化指南中的诊断标准2:存在胆汁淤积症的生化学证据，主要是碱性磷酸酶（ALP ）升高；血

3、清抗线粒体抗体阳性；非化脓性破坏性胆管炎及小叶间胆管破坏的组织学 证据。如果符合上述三个标准中的两项即可诊断原发性胆汁 性肝硬化。1.2临床资料2010年1月2014年1月，选取在我院诊治的原发性胆汁性肝硬化患者 48例（观察组） ，其中男 19例、女29例，年龄2357岁，平均（45.57 ± 8.19）岁。主要临床表现:黄疸 31 例（ 64.58%）、疲乏 26例（ 54.17%）、纳差 24例（ 50.00%）和皮肤瘙痒 19例（39.58%）。选择同期在我院治疗的其他原因导致的肝硬化（梗阻性黄疸及恶性 肿瘤者除外）患者 40 例（对照组） ，其中乙肝肝硬化 27 例、 酒精

4、性肝硬化 13例，男 22例、女 18例，年龄 2959岁，平均（46.90± 8.43）岁。主要临床表现: 黄疸 24 例（60.00%）、 疲乏 20例（50.00%）、纳差 17例（42.50%）和皮肤瘙痒 12例（ 30.00%）。两组患者年龄、性别及临床表现相似，差异统计学意义（P>0.05）,具有可比性。1 .3检测指标及方法1.3.1 样本收集 患者均于空腹清晨 8: 00 时抽取静脉血5 ml 置入 EDTA 抗凝管中，常温下 3000 r/min 离心 10 min ， 分离血清保存于-70 C冰箱集中待测。1.3.1 生化指标 ALP 及氨酰转肽酶（ GGT

5、 ）采用全自动生化分析仪（日立 7600020）检测。1.3.2M2 型抗线粒体抗体 M2 型抗线粒体抗体酶免疫试剂盒由德国欧蒙医学实验诊断股份公司提供。操作步骤： 加样。用100卩L样品稀释液按1: 200比例稀释血清，将不同浓度的 M2 型抗线粒体抗体标准品及血清依次加入到已包 被 M2 抗原的微孔中；在微振荡器上进行振荡混匀，室温（18 C24 C）孵育30 min，应用自动洗板机洗板 3次，拍干。酶结合物反应。将 50卩L已稀释的碱性磷酸酶标记的抗人 IgG 加入相应微孔中， 室温条件下再次温育 30 min 及洗涤、拍干。显色：各微孔依次加入50卩L底物液室温下反应10 min，洗板

6、、风干。结果判断：M2抗原包被区出现深蓝或紫色条带为阳性，无颜色为阴性。1.4 统计学处理 采用 SPSS 17.0统计软件进行数据分析处理，计数资料比较采用卡方检验，计量资料比较采用 验， P<0.05 为差异有统计学意义。2.结果2.1 两组患者血清 M2 型抗线粒体抗体检测结果比较察组患者血清 M2 型抗线粒体抗体检测阳性 44 例，阳性率91.67%，阴性 4 例，阴性率 8.33%；对照组患者血清 M2 型 抗线粒体抗体检测阳性 1 例， 阳性率 2.50% ，阴性 39 例，阴性率 97.5%；差异有统计学意义（ P<0.05）。2.2 血清 M2 型抗线粒体抗体阳性与

7、阴性患者生化指标比较 M2 阳性组 ALP 为 256.91±34.75 U/L ，GGT 274.33 ±38.41 U/L， M2 阴性组 ALP 为 242.65±33.93 U/L ， GGT 268.97±35.80 U/L. 血清 M2 型抗线粒体抗体阳性与阴性患者 ALP 及 GGT 水平相似，差异无统计学意义（P>0.05）3.讨论原发性胆汁性肝硬化发病与自身免疫、病原微生物感染、接触化学物品、遗传和家庭因素有关，临床主要表现为 皮肤瘙痒、进行性黄疸、黄色瘤、肝脾肿大和后期出现门脉 高压症，好发于中老年女性 3 。本研究显示男：女为

8、 0.66： 1，平均年龄（ 45.57±8.19）岁。原发性胆汁性肝硬化目前尚无有效的治疗方法，所以早期诊断、及时治疗对于改善患 者的预后至关重要。抗线粒体抗体共有 9各亚型，与原发性胆汁性肝硬化相关的有 M2、M4、M8 及 M9 亚型。 M2 是线 粒体内膜抗体，可与多个抗原发生反应，最主要是与丙酮酸脱氧酶 E2 亚基，其次则是 2-氧戊二酸脱氢酶复合物与 2-氧戊二酸脱氢酶复合体的 E2 亚基。中 M2 诊断原发性胆汁性肝硬化的特异性抗体，主要原因：灵敏度及特异度均达到95%以上4。在疾病早期已经出现，甚至在无症状的体检者中可出现，多年后大多数发展为原发性胆汁性肝硬化患 者；

9、动物实验证实 M2抗原可诱导建立小鼠原发性胆汁性肝硬化模型，其生化与病理特征和人类相似，进一步证实了 M2 在原发性胆汁性肝硬化发病中的重要作用5 。本研究显示， 48 例原发性胆汁性肝硬化患者血清 M2型抗线粒体抗体阳性率高达 91.67% ，进一步证实了上述结论。国内文献报道6 ，5011名健康体检者， 8 例检出血清 M2型抗线粒体抗体阳性，其中5 例符合美国肝病学会推荐的原发性胆汁性肝硬化诊断标准，提示无症状者在我国也不少见，也说明怀疑 该病者应早做 M2 亚型筛查。许峰 7报道采用 ELISA 法检测 原发性胆汁性肝硬化患者血清 M2 型抗线粒体抗体水平，以25 RU/mL （95%

10、上限为 25 RU/mL ）为临界值，其灵敏度为95.2%，特异度为 97.4%，诊断符合率达 95.6%，阴性预测值 98.7%，阳性预测值 90.9%，对其诊断原发性胆汁性肝硬化进一步量化。本研究还发现， M2 型抗线粒体抗体无论是阴 性还是阳性患者，其肝脏均具有以下病理改变：胆管改变 明显，以小胆管最具特征性，胆管周围见炎性细胞浸润； 汇管区细胞浸润现象明显，甚至形成淋巴滤泡；肝细胞改 变相对较轻，缺乏特异性。所以，对 M2 型抗线粒体抗体阴 性者，病理学检查十分重要。 ALP 及 GGT 升高是原发性胆 汁性肝硬化患者肝功能损害的特征性改变。本研究 48 例患 者肝功能ALP及GGT均

11、为阳性，较正常值高46倍。并且M2 型抗线粒体抗体阴性及阳性患者， ALP 及 GGT 水平无差 异。综上所述，原发性胆汁性肝硬化早期临床症状轻微且无特异性，极易误诊为病毒性肝炎或肝炎性肝硬化，临床医师 认识，将有助于患者获得早期诊断和有效治疗，对患者预后 具有十分重要的意义。有必要加强对原发性胆汁性肝硬化及M2 型抗线粒体抗体的参考文献：1陈乃玲， 杨新玲，刘晓彬，等.血清抗线粒体抗体亚型对原发性胆汁性肝硬化诊疗的临床评估J.中华临床医师杂志（电子版），2008，2（10）：1114-1122.2American Association for Study of LiverDiseases.AASLD practice guidelines ： primary biliary cirrhosis.HepatologyJ.2009 ， 50（1）： 291-308.3 李金祥，杨晋辉 .原发性胆汁性肝硬化 AMA-M2 阴性患者的临床及病理特点 J. 世界华人消化杂志， 2009，17（16）： 1676-1679.4Jones DE. Pathogenesis of primary biliarycirrhosisJ.Gut ，2007，56 （ 11）：1615-1624.5姜小华，仲人前，方晓云， 等.抗线粒体抗体 M2 抗原诱导小鼠原发性胆汁性肝硬化模型的建