《分子医学实验学》课程教学大纲

1、 分子医学实验学课程教学大纲 Molecular Medicine Laboratory Science 一、实验总学时： 40 二、应开实验个数： 8 个 学分：2 分 必开实验个数： 8 个 三、适应专业：口腔医学 四、考核方式及评定标准： 考核方式：包括考勤、实验操作及实验报告等。批改实验报告按百分制 计。要求每次实验后学生必须写实验报告。 每位同学必须参加每次实验课， 无故 旷课者，实验课成绩均以零分计算。 评定标准：根据学生实验课上的发言、 实验操作及实验报告等， 评定学生实验课的成绩，取实验报告成绩的平均值作为实验报告成绩。 五、配套的实验教材：自编的分子医学实验学实验指导六、实验

2、项目 实验一 实验室基本知识和技术 学时： 4 （一）实验类型：综合型 （二）实验类别：学科基础实验 （三）实验目的 1掌握生物化学各种基本技术、常用仪器的分类、使用及注意事项 2熟悉生化实验室规则 （四）实验内容 1实验室规则 2生物化学实验各种基本技术 3 722 型分光光度计的使用 4实验记录和实验报告 （五）要求：必开 （六）每组人数 2 人/ 组 （七）主要仪器设备及其配套数 1烧杯 1 个、试管 10 支、刻度吸量管 3 支、离心管 2 支、滴管 1 支 1 套/组，共 32 套 2公用：枪式移液器及其配适吸头、恒温水浴箱、离心机、 722 型分光光度 计 （八）所在实验室：分子医

3、学实验室 实验二 胰岛素及肾上腺素对血糖浓度的影响 学时： 4 （一）实验类型：验证型 （二）实验类别：学科基础实验 （三）实验目的 1熟悉对家兔进行采血和注射方法 2掌握血糖测定的方法 3验证激素对血糖浓度的调节作用 （四）实验内容 1动物准备（空腹家兔） 2取空腹血、药物（肾上腺素及胰岛素）注射、采血及分离血浆 3血糖测定（葡萄糖氧化酶法） （五）要求：必开 （六）每组人数： 8 人/ 组 （七）主要仪器设备及其配套数 11ml 及 10ml 注射器及其针头、兔固定箱，刀片、试管及试管架、移液器及 其配适吸头。 1 套/ 组，共 8 套 2公用：台式磅秤、恒温水浴箱、离心机、 722 型分

4、光光度计 （八）所在实验室：分子医学实验室 实验三 凝集试验 学时： 2 （一）实验类型：验证型 （二）实验类别：学科基础实验 （三）实验目的： 1. 学会并掌握玻片凝集试验的方法、原理及临床意义。 2. 学会试管凝集试验的方法、结果和效价的判断，并掌握原理及临床意义。 3. 理解间接凝集试验的原理并了解其操作方法。 4. 了解凝集试验的微量管法的操作流程。 （四）实验内容： 1. 玻片凝集试验。 2. 试管凝集试验。 3. 间接凝集试验。 4凝集试验的微量反应板法。 （五）要求：必开 （六）每组人数： 2 人/ 组 （七）主要仪器设备及其配套数： 1. 接种环、酒精灯、试管架、刻度吸管、黑色

5、反应板、 V 形孔微量反应板、微量加样器等 1 套/ 组。 2. 温箱、微量震荡器、恒温水浴箱等 1 套 / 室。 （八）所在实验室：分子医学实验室。 实验四 质粒 DNA 提取与纯化 学时： 4 （一）实验类型：验证型 （二）实验类别：学科基础实验 （三）实验目的： 1. 掌握碱裂解法提取质粒 DNA 的基本原理和技术。 2. 熟悉质粒的基本特性及质粒 DNA 提纯的方法 （四）实验内容： 1质粒 DNA 提取 2质粒 DNA 纯化 （五）要求：必开 （六）每组人数： 2 人 / 组 （七）主要仪器设备及其配套数： 1公用器材：超净工作台 2 台、恒温水浴箱 4 台、恒温摇床 4 台、高速离

6、心 机 3 台、普通冰箱 2 台及低温冰箱 1 台及高压灭菌锅 1 台等。 20.5-1000ul 微量取液器及微量取液器吸头 14 套； Eppendorf 离心管（盒） /2 组；培养皿、试管、三角瓶、试剂瓶、烧杯、量筒、酒精灯等 12 套 3试剂 8 套： 溶液、溶液、溶液、 TE 缓冲液、 70乙醇等 （八）所在实验室：分子医学实验室。 实验五 血浆清蛋白的分离纯化与鉴定 学时： 6 （一）实验类型：综合型 （二）实验类别：学科基础实验 （三）实验目的 1掌握蛋白质的分离技术 2掌握分段盐析、凝胶层析及蛋白质醋酸纤维薄膜电泳的原理及操作方法 3掌握电泳方法检测分离效果 （四）实验内容

7、1盐析分段沉淀蛋白质 2层析脱盐 3点样、电泳、染色、漂洗 4观察电泳图谱 （五）要求：必开 （六）每组人数： 4 人/ 组 （七）主要仪器设备及其配套数 1层析柱、镊子、 X 光软片、滤纸、离心管、烧杯、滴管、小试管、吸管等 1 套 / 组 2公用：电动离心机、电泳仪、电泳槽。 （八）所在实验室：分子医学实验室 实验六 DNA 重组质粒的设计与构建 学时： 8 （一）实验类型：综合型 （二）实验类别：学科基础实验 （三）实验目的： 1. 掌握限制性核酸内切酶的基本概念、作用特点及作用原理； 2. 熟悉分子生物学实验常用的载体及各载体的特点和功能，载体的选择；熟悉 DNA 的限制性内切酶酶切分

8、析操作技术及其影响因素； 学习限制性核酸内切 酶的使用；学会重组 DNA 的连接、转化及鉴定重组子的方法 3了解目的基因的获取方法； （四）实验内容： 1通过提供几种质粒、几种基因、几种限制性内切酶，以实验小组为单位对 根据实验目的要求设计实验，提交具体实验方案。 2实验内容包括基因的选择；质粒载体的选择；限制性核酸内切酶酶切位点设计及限制性核酸内切酶的选择与酶切操作； 酶切产物的纯化与连接及连接产物的转化；重组子的鉴定 （五）要求：必开 （六）每组人数： 4 8 人 / 组 （七）主要仪器设备及其配套数： 1公用器材：超净工作台 2 台、恒温水浴箱 4 台、恒温摇床 4 台、台式高速离心机

9、3 台、低温高速离心机 1 台、普通冰箱 2 台及低温冰箱 1 台及高压灭菌锅 1 个、 PCR 扩增仪 1 台、紫外灯检测仪 2 台、凝胶成像系统 1 套等。 2常规仪器及相关试剂 10 套：琼脂糖凝胶电泳系统； 0.5-1000ul 微量取液器及微量取液器吸头； Eppendorf 离心管等；大肠杆菌 DH5、质粒 pYLSV-GD、限制性内切酶（ Xho I ；BamH I ； Hind ； Sal I 和 Pst I 等）等多种相关实 验试剂 （八）所在实验室：分子医学实验室。 实验七 肝功能组合实验 学时： 4 （一）实验类型：设 计型 （二）实验类别：学科基础实验 （三）实验目的：

10、 1掌握肝功能组合实验测定的意义及其在临床上应用。 2掌握酶联免疫吸附试验（ ELISA）的操作流程和技术方法。 3掌握比色法测定血清丙氨酸氨基转移酶（ ALT）活力的原理。 4熟悉 ELISA 的技术类型和基本原理。 （四）实验内容： 1. ELISA 检测乙型肝炎病毒二对半。 2金免疫层吸试验检测血清 HBsAg。 2. 血清丙氨酸氨基转移酶（ ALT）活力的测定。 （五）要求：必开 （六）每组人数： 4 人/组 （七）主要仪器设备及其配套数 1. 主要试剂： ELISA 检测乙型肝炎病毒二对半试剂盒、金标物诊断剂条、丙氨酸氨基转移酶（ ALT）活力测定试剂盒、血清等。 HBsAg 试 2烧杯 4 个、试管 20 支、刻度吸量管 6 支、枪式移液器及其配适吸头等 1 套/ 组。 3公用：、恒温水浴箱、湿盒、酶标仪、 722 型分光光度计或半自动生化分析仪。 （八）所在实验室：分子医学实验室。 实验八 免疫血清的制备 学时： 8 （一）实验类型：设 计型 （二）实验类别：学科基础实验 （三）实验目的： 1. 初步学会免疫原和佐剂的制作及免疫血清制备的基本方法。 2. 理解免疫原、免疫血清制备的意义和应用。 3. 了解动物实验的基本知识。 （四）实验内容： 1. 免疫原、佐剂的制作。 2. 动物实验的基本操作要点及过程。 3