淀粉酶活力测定实验报告

1、淀粉酶活力测定实验报告淀粉酶活力测定实验报告实验三、淀粉酶活性的测定实验报告实验四、淀粉酶活性的测定一、实验目的：1、了解a -淀粉酶和P -淀粉酶的不同性质及其淀粉酶活性测定的意义；2、学会比色法测定淀粉酶活性的原理及操作要点。二、实验原理：淀粉酶存在于几乎所有植物中，特别是萌发后的禾谷类种子，淀粉酶活力最 强，其中主要是。-淀粉酶和。-淀粉酶。根据。-淀粉酶和淀粉酶特性不同，淀粉酶不耐酸，在pH3. 6以下迅速钝化；。-淀粉酶不耐热，70? 15min则被钝 化。测定时.，使其中一种酶失活，即可测出另一种酶的活性。淀粉在淀粉酶的催化作用下可生成麦芽糖，利用麦芽糖的还原性与3, 5-二硝基

2、水杨酸反应生成棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸，测定其吸光度，从而确定酶液中淀 粉酶活力(单位重量样品在一定时间内生成麦芽糖的量)。三、实验用具：1、实验设备研钵,具塞刻度试管，离心管，分光光度计，酸度计，电热恒温水浴锅，离心机，电磁炉。2、实验材料与试剂(1)0. lmol/1 pH5. 6的柠檬酸缓冲液:A液:称取柠檬酸20. 01g,定容至1000ml ;B液:称取柠檬酸钠29. 41g,定容至1000ml;取A液55ml与B液145ml混 匀。(2) 1%可溶性淀粉溶液:1g淀粉溶于100ml 0. lmol/1 PH5. 6的柠檬酸缓冲液；(3) 1%3, 5-二硝基水杨酸试剂:称取3

3、, 5-二硝基水杨酸lg、NaOH 1.6g、酒石酸 钾钠30g,定容至100ml水中，紧盖瓶塞，勿使C02进入；(4)麦芽糖标准溶液:取麦芽糖0. 1g溶于100ml水中；(5)pH 6. 8的磷酸缓冲液：取磷酸二氢钾6. 8g,加水500ml使溶解,用0. lmol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6) 8,加水稀释至1000ml即得。(6)0. 4niol/L 的 NaOH 溶液;7) ) l%NaCl 溶液。(8)实验材料:萌发的谷物种子(芽长约1cm)四、操作步骤1、酶液提取:取6. 0g浸泡好的原料，去皮后加入10. 0mL 1%的NaCl溶液，磨 碎后以2000r/min离心lOmin

4、,转出上清液备用。取上清液1.0ml,用pH为6. 8 的缓冲溶液稀释5倍，所得酶液。2、”淀粉酶活力测定(1)取试管4支，标明2支为对照管,2支为测定管。(2)于每管中各加酶液1ml ,在70?士 0.5?恒温水浴中准确加热15min，取出 后迅速用流水冷却。(3)在对照管中加入4ml 0.4mol/L氢氧化钠。(4)在4支试管中各加入lml pH5. 6的柠檬酸缓冲液。(5)将4支试管置另一个40?士 0. 5?恒温水浴中保温15min，再向各管分别 加入40?下预热的1,淀粉溶液2ml,摇匀，立即放入40?恒温水浴准确计时保温 mine取出后向测定管迅速加入4ml 0. 4mol/L氢氧

5、化钠,终止酶活动，准备测糖。3、淀粉酶总活力测定:取酶液5ml,用蒸偏水稀释至100ml,为稀释酶液。另取4 支试管编号,2支为对照,2支为测定管，然后加入稀释之酶液1ml,在对照管中加 入41nl 0. 4mol氢氧化钠，4支试管中各加lml pH5. 6的柠檬酸缓冲液。以下步骤 重复a-淀粉酶测定第（5 ）步的操作，同样准备测糖。4、麦芽糖的测定标准曲线的制作：取25ml刻度试管7支,编号.分别加入麦芽糖标准液（lmg/ml ） 0, 0. 2, 0. 6,1. 0, 1.4, 1. 8, 2. 0ml ,然后用吸管向各管加蒸馈水使溶液达2. 0ml,再各加3, 5 一二硝基水杨酸试剂2.

6、 0ml ,置沸水浴中加热lOmin .取出冷却,用蒸储水稀释至 25mlo混匀后用分光光度计在520nm波长下进行比色,记录吸光度，以吸光度为纵坐标，以麦芽糖含量 （mg ）为横坐标，绘制标准曲线。（2）样品的测定：取步骤2, 3中酶作用后的各管溶液2ml,分别放入相应的8支 25ml具塞刻度试管中，各加入2ml 3, 5-二硝基水杨酸试剂.以下操作同标准曲线制 作。根据样品比色吸光度平均值,从标准曲线查出麦芽糖含量,最后进行结果计算。五、结果处理式中A为a-淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖（mg ）;Ao为a-淀粉酶的对照管中麦芽糖量（mg ）;B为（a十B）淀粉酶共同水解淀粉生成的麦芽糖（mg ）;Bo为（a十B）淀粉酶的对照管中麦芽糖（m