保健食品中总黄酮的测定方法(精)

1、作者简介肖香兰（1964-,女,主管检验技师，主要从事理化检验研究。【化学 测定方法】保健食品中总黄酮的测定方法肖香兰罗仁才，张楠（北京市疾病预防控制中心营养与食品卫生所，北京100013摘要目的:建立以石油醚作为洗脱剂测定保健食品中总黄酮的方法。方法：样品经甲醇提取，用聚酰胺粉吸附，经石油醚洗脱杂质后，在波长360n m处，用分光光 度法测定保健食品中总黄酮的含量。结果：采用石油醚作为洗脱剂，总黄酮浓度的含 量在02010卩g/m I范围内与吸光度值呈良好的线性关系（r=019998方法的检出限为 215卩g测定样品的相对标准偏差在 4160%6149%之间，回收率在86167%101150

2、%之间。与用苯作为洗脱剂方法测定结果比较,两者无显著性差异。结论:该方法操作简便，重现性及稳定性好，线性范围宽，特别是减少了苯对检测人员 和环境的污染，可用于保健食品中总黄酮的测定。关键词保健食品；总黄酮;t检验中图分类号R15515文献标识码A文章编号1004-8685(200706-1037-02D eter m i n a ti on of tot a l fl avono i ds i n hea lth foodX iao X ian g2la n,L uo Ren 2cai,Zha ng N an(Beiji ng Center f or D isease Con tr ol a

3、nd P reve nti o n,Beiji ng100013,Chi naAbstract O bjecti ve:To establish a method for deter m ining flav ono ids in health food1M ethods:The t otal flav ono ids in health f ood were deter m ined by s p ectr ophot omet after the sa mp les were distilled by metha nol and p urified by p etr oleu m ethe

4、r1The detec2 ti on wavele ngth was360n m1Results:Data bet w een the flav ono ids content and卩 g/m l(r=019998仃heabs orba n had Ooetter lin ear relati on shi p in the range of02010deter m in ati on li m its were215卩 g1The relative standard deviati ons were bet w een4160%6149% 仃he recoveries were in th

5、e range of86167%101150%1 Purified by petr oleu m ether in stead of benzen e,the results had no obvi ous differe nce1Co nclusi on: The method is si m p le,stable and accurate,a nd it has bee n app lied successfully t o deter m ine flav ono ids in health food1Key wordsHealth f ood;Total flav ono ids;t

6、 detecti on黄酮类化合物也称类黄酮，是广泛存在于植物界的一大类多酚化合物，多以甙类形式存在，也有一类以游离形式存在。黄酮类化合物泛指两个苯环通过中央三 碳链相互连接而形成的一系列化合物，母体结构为二苯基色酮。许多黄酮类化合物 都有重要的生物活性，如抗氧化、抗肿瘤、保护心血管、抗突变等功能。类黄酮以 其独有的特性日益成为全世界研究的热点，在医学、食品、保健食品等领域得到广 泛的应用。目前保健食品中总黄酮的测定通常方法有硝酸铝比色法和直接紫外测定 法，在保健食品检验与评价技术规范中，采用的是直接紫外测定法，在测定中需以 苯洗脱杂质，但是，苯的毒性很强且用量大，对环境极易造成污染，并对实验

7、者造成伤 害。因此本文用石油醚替代苯，实验结果满意。1材料与方法111仪器与设备7220型分光光度计，恒温水浴箱,25m l具塞比色管，滤纸，漏斗，分析天平（万分之。112试剂11211甲醇分析纯。11212石油醚 沸程30r 60C。11213总黄酮（以芦丁计标准溶液称取芦丁 010100g加甲醇溶解并定容至100m I,即得 0110mg/m l。113测定方法11311 标准曲线 吸取芦丁标准溶液：0100、0105、0110、0120、0140、 110、1150、2100m I于10m I比色管中,加甲醇至刻度，摇匀,于波长360nm比色，求回 归方程，计算试样中总黄酮含量。1131

8、2样品处理。11313样品测定 称取适量试样，加乙醇定容至2510m I,摇匀,80C水浴提取 23h,放冷，重新定容,吸取上清液110m l于蒸发皿中,加聚酰胺粉吸附，于水浴上挥去 乙醇，转入层析柱，先用2010m l石油醚洗脱，然后用甲醇洗脱黄酮，定容至25m I。此 液于波长360n m测定吸收值。2结果与讨论211波长选择黄酮类化合物是母体结构为二苯基色酮的一类化合物的（下转第1142页和小批量样品的测定。其原理：样品的BP 0经乙醚提取浓缩后，被KI还原成苯 甲酸，在气相色谱上分离测定，与标准品比较定量。气相色谱仪附 F ID检测器，色谱 柱为玻璃柱 2m3 312mm 内装 608

9、0 目 Chr om s orb WAW DMCS 涂以 5%+ 11%DEGS+磷酸。方法的检出限为015mg/kg。方法的准确度和精密度为：过氧化苯甲酰浓度在0102012g/kg范围内，回收率为8318%9410%,RSD为315%511%。线 性范围在每毫升含有过氧化苯甲酰 20200ug3建议鉴于从1999年2002年6月,3年半时间内各地及国家质检总局检测BP O使用状况，建议:(1禁止添加过氧化苯甲酰于面粉中，因为0106g/kg限量对面粉增白效果 不理想。(2如不能禁止使用，则应对小面粉加工厂采取严管措施，实施卫生许可制度，对不 具备有添加设备的小企业不允许向小麦中添加过氧化苯

10、甲酰，对具有添加设备的企 业，要求有专人负责，并增加对产品的检测频次，以确保添加量控制在国家标准限量之 内。(3建议企业使用过氧化苯甲酰替代品，如使用生物酶与乳化剂结合而增白等。(4加强市场监督管理力度。(5加大宣传力度，暴光有问题的面粉，使老百姓在政府的指导下，选购合格面粉, 将不合格面粉从市场淘汰出局。参考文献1 G B2760-19961食品添加剂使用卫生标准S12 F AO/nyo食品卫生标准法典M1第1版1北京冲国轻工业出版社,1993118013 郭万春，陆守政1市售面粉中过氧化苯甲酰添加和残留量的检测与分析J1中国公共卫生，1999,15(6:51914 王燕1面粉中过氧化苯甲酰

11、含量的检测报告J1中国公共卫生，2000,16(2:1121丁鸿简,李林,杨其富1高效液相色谱测定面粉中面粉中过氧化苯甲酰J1中国公共卫生,2001,17(11:104716 0fficial Methods of A ss ociati on of official Che m ists14th ED,AOAC,VA,1984;Sec14:03817 王萌国1HP LC测定过氧化苯甲酰J1环境与健康杂志,1999,16(1:9818 刘仁凤，易小军,祁世凯，等1面粉中过氧化苯甲酰含量检测与分析J1中国公共卫生，2001,17（增刊:1201(收稿日期:2007-02-05（上接第1037页总

12、称，包括:黄酮、黄酮醇、脱氢黄酮、异黄酮和查耳酮等，这一类化合物有两个 紫外吸收区，即240280n m和300 400n m本方法测定的是在300400n m有吸收 的黄酮，某些在该波长无吸收的黄酮成分不包括在内，如异黄酮。212溶剂选择包括甙和甙原形式的黄酮化合物都有较强的极性，易溶于甲醇、乙醇等溶剂。 使用乙醇作为提取液在80°C水浴提取2h可提取完全。213准确度实验采用不同种类的样品，进行了高低两浓度的加标实验,3种不同样品高低两浓度 的平均回收率分别为：93160%、97147%和96176%,见表1。表1准确度实验结果（n=6样品加标量(mg测定结果（mg回收范围(%平

13、均回收率(%硬胶囊 321672171219021612164216086167-9810089183 651875179519251725185519095133-9816797136软胶囊 331113102312421983107310089167-10016796172 66112610951986102610951939415-10115098122茶叶 321842196219731032179218588133-10110095183 651885194519151845177518196117-9913397169214精密度实验对不同种类的样品，分别测定6次，其RSD分别为5

14、127%、6149%、4160%见表 2。215线性范围在本实验条件下，黄酮浓度在0-20卩g/ml的范围内，线性关系良好 尸019998。表2精密度实验结果（n=6样品测定结果（mg/g平均结果(mg/gRSD(%硬胶囊 9142914081337189818681198168014688512软胶囊1111813614129151301412519126131261781227614茶 叶 181721121914201320181918201030192234160216与保健食品检验与评价技术规范所载方法的比较采用5种不同的样品,分别用保健食品检验与评价技术规范所载方法和本法进行测定，结果表明，两 种测定方法测定结果无显著性差异，见表3。表3两种测定方法的t检验结果均无显著性差异样品规范方法测定结果（mg/g本方法测定结果（mg/gt硬胶囊912691239137915591349114914291408133718981198186211软胶囊 11018951492179615911812613126141091511014125199414981011茶叶 18161812191721121914191518172112201319141