紫外-可见分光光度计法测定饮料中苯甲酸钠的含量

1、（3 ）由吸收曲线上找出最大吸收波长 Xnax。 紫外-可见分光光度计法测定饮料中苯甲酸钠的含量 3. 二、 实验原理 为了防止食品在储存、运输过程中发生腐蚀、 变质，常在食品中添加少量防腐剂。 防腐 剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格的规定， 苯甲酸及其钠盐、钾盐是食品卫生 标准允许使用的主要防腐剂之一，根据 GB2760- 1996 规定，碳酸饮料中苯甲酸钠的允许最 大使用量为 0.2g/kg。 苯甲酸具有芳香结构， 在波长 225nm 和 272nm 处有 K 吸收带和 B 吸收带。根据苯甲酸 （钠）在 225nm处有最大吸收，测得其吸光度即可用标准曲线法求出样品中苯甲酸钠的含

2、量。 三、 仪器和试剂 紫外可见分光光度计 UV-2501 （日本岛津），1.0cm 石英比色皿，50ml 容量瓶。 NaOH 溶液（0.1mol/L ） 苯甲酸钠标准溶液的配制 苯甲酸钠标准贮备液（1.000g/L）：准确称量经过干燥的苯甲酸钠 1.000g （105C 干燥处 理 2h）于 1000mL 容量瓶中，用适量的蒸馏水溶解后定容。该贮备液可置于冰箱保存一 段时间。 苯甲酸钠标准溶液（100.0mg/L ）：准确移取苯甲酸钠储备液 10.00mL 于 100mL 容量瓶 中，加入蒸馏水稀释定容。 系列标准溶液的配制：分别准确移取苯甲酸钠标准溶液 1.00mL、2.00mL、3.00

3、mL、4.00mL 和 5.00mL 于5 个 50mL 容量瓶中， 各加入 0.1mol/L NaOH 溶液 1.00mL 后， 用蒸馏水稀 释定容。 得到浓度分别为 2.0 mg/L、4.0mg/L、6.0mg/L、8.0mg/L 和 10.0mg/L 的苯甲酸 钠系列标准溶液。 一、实验目的 了解和熟悉紫外-分光光度计的原理和结构，学习 UV-2501 的操作。 掌握紫外分光光度法测定苯甲酸钠的吸收光谱图。 掌握标准曲线法测定样品中苯甲酸钠的含量。 1. 2. 1. 2. 3. 50mL 瓶编号 1 2 3 4 5 6 100.0mg/L 苯甲酸钠标准溶液体积（mL） 0.00 1.00

4、 2.00 3.00 4.00 5.00 0.1mol/L NaOH 溶液体积（mL） 1.00 用蒸馏水容量 50.0 系列标准溶液浓度（mg/L） 0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 记录吸光度 A 值 （2 ）吸收曲线的测定 用某一浓度较高的标准液如 4 号或 5 号溶液，于 210nm-300nm 波长范围内扫描，即的 苯甲酸钠的吸收曲线。 4. 5. 四、实验步骤 1.吸收曲线的绘制 （1）系列标准溶液的配制 （3 ）由吸收曲线上找出最大吸收波长 Xnax。 雪碧（500mL） 蒸馏水 苯甲酸（钠）吸收曲线 2. 工作（标准或校正）曲线的绘制 按溶液由稀到浓的顺序分别测

5、定他们的吸光度 A，然后以浓度为横坐标，吸光度 A 为 纵坐标作图，求出线性方程和相关系数。 浓度（mg/L） 0 4 6 8 10 X 吸光度 A -0.011 0.225 0.333 0.441 0.552 0.1044 3. 市售饮料样品溶液的含量测定 （1） 准确移取市售饮料 1.5ml 于 50mL 容量瓶中，用超声脱气 5min 驱赶二氧化碳后， 加入O.lmol/LNaOH 溶液 I.OOmL,用蒸馏水稀释定容。 （2） 按测定工作曲线标准液的方法测定样品的 A，由标准曲线或线性方程求出 50mL 样 品溶液中的苯甲酸钠的浓度。 （3 ）求出市售饮料中苯甲酸（钠）的含量。 数据处

6、理 苯甲酸钠紫外-可见吸收光谱的测定，并找出最大吸收峰波长。 苯甲酸钠标准曲线的测定，以及曲线方程、相关系数的测定。 样品中苯甲酸钠含量的测定。 【注意事项】 1. 试样和标准工作曲线的实验条件应完全一致。 2. 不同牌号的饮料中苯甲酸钠含量不同，移取时样品量可酌情增减。 【思考题】 1.紫外可见分光光度计由哪些部件构成？各有什么作用？ 答：紫外可见分光光度计由光源室、 单色器、试样室、检测器及信号显示系统五个部分组成。 光源室能提供仪器使用波段的连续光谱， 单色器是用以产生高纯度单色光束的装置， 试样室 五、 1. 2. 3. 供盛放试液进行吸光度测量之用， 检测器用于检测辐射信号，信号显示

7、系统将图谱、数据和 操作条件都显示出来。 2. 本实验为什么要用石英比色皿？为什么不能用玻璃比色皿？ 答：因为玻璃吸收紫外光，影响测试液对紫外光吸光度的准确性。而石英不吸收紫外光。因 此，可见光区域内测试时需要用玻璃比色池，紫外区域内测试时用石英比色池。 3. 苯甲酸的紫外光谱中有哪些吸收峰？各自对应哪些吸收带？由哪些跃迁引起？ 答：苯甲酸具有环状共轭结构， 在波长 228nm 和 272nm 处有 E 吸收带和 B 吸收带，由冗 7 冗* 跃迁引起。 UVUV- -25012501的操作 1. 2. 开机 打开计算机，打印机。 打开主机开关，双击软件图标 过后按“0K。 吸收光谱的测定 选择

8、“ Window”7“ Spectrur 打开光谱模块。 选择“ Edit ”7“ Meth 设定波长范围（从大到小）；扫描速度（Fast）,采样间隔（1.0）, 扫描方式（Single）, Instrument Parameters （Absorbenee）。 样品池和空白池均放上 2.5mL 缓冲溶液，点击光度计按键条中的 “ Baseline,启动基线 校正，点击确定。 注：在开始基线校正之前，确认样品或参比光束无任何障碍物，且样品室中没有样品。 参比池中加入缓冲溶液，样品池中加入苯甲酸钠标准液，点击按键条中的 “Start 测定 UVProbe,点击“Connec 与仪器联机，仪器开始

9、自检，通 紫外可见吸收光谱。 （5） 扫描完成后，在弹出的新数据采集对话框中输入样品名，点击确定。 （6） 图谱保存：选择 “ File 7 “ Saves ”，在对话框顶部的保存位置中选择适当的路径，输入 文件名，保存类型中选择 Spe,点击 保存”。 最大吸收峰：选择 “Op eratio ns ” 7“ Peak 找到最大吸收峰对应的波长。 3.标准曲线法测定待测样品的浓度 （1） 选择 “ Window” 选择 “ Edit ”7 选定的 Wavelength，根据提示，点击 next, next，方法，设定保存路径，点击 样品池和空白池均放上 2.5mL 缓冲溶液， 校正。 标准曲线

10、：在 Standard table 框里输入 “Co nee ntratio n,输入完毕，将光标移到 T “ Photome,打开测量光度模块。 “ Meth 设置合适的波长（“ Wavelength），如 225nm，点击“ Add；点击 保存”。 点击光度计按键条中的 “Cell blank,进行背景 Sam pie ID （从 1 开始），标准溶液的浓度 WL225 下。在样品池中由稀到浓，依次放入系 （浓度为 列标准溶液，点击按键条中的 “ Read std 依次读出标准系列溶液的吸光度值。 0 的空白液可先按 自动归零”后再读数） 点击 “ Graph ” 7“ standard Curve Statistics 标准曲线的方程和相关系数。 同样，样品池中放入待测溶液， 在 Samp le table 框里框里输入 Sam pie ID，点击按键条中 的“ Read std