洁净室环境监测操纵制度

1、* * 青岛有限公司文件 文件名称 洁净区环境监测操作规程 文件编号 SOP-ZL66-1 制定人 审核人 审核人 制定日期 审核日期 审核日期 批准人 批准日期 生效日期 颁发部门 品管部 印 数 份 分发部门 品管部 目的 建立洁净区环境监测规程，规范洁净区沉降菌、浮游菌、悬浮粒子的测试，保 证药品在规定的洁净级别内进行生产。 范围 本标准适用于洁净区沉降菌、浮游菌、悬浮粒子的监测。 责任环境监测员 内容 1、检验依据： 1.1 GB/T16294-2010 1.2 GB/T16293-2010 医药洁净室（区）沉降菌的测试方法 医药洁净室（区）浮游菌的测试方法 1.3 GB/T16292

2、-2010 2、悬浮粒子的监测 医药洁净室（区）悬浮粒子的测试方法 2.1概述：本测试方法采用计数浓度法，即通过测定洁净区环境内单位体积空气中 含大于或等于某粒径悬浮粒子数，来评定洁净室（区）的悬浮粒子洁净度等级。 2.2仪器和设备：尘埃粒子计数器，严格按照尘埃粒子计数器操作、维护保养规程 （SOP-ZL95-1 ）操作。 2.3测试步骤 2.3.1测试条件：在测试之前，要对洁净室（区）相关参数进行预先测试，包括温度 控制在18-26 C、相对湿度控制在45-65%、压差等，同时应满足仪器的使用范围。 2.3.2测试状态：静态测试，人员不得多于2人。测试报告中应明确测试时所采用的 状态及测试人

3、员数。 2.3.3测试时间：在空态或静态a测试时，对单向流洁净室（区）而言，测试宜在净 化空气调节系统正常运行时间不少于 10min后开始。对非单向流洁净室（区），测试宜 在净化空气调节系统正常运行时间不少于 30min开始。在静态b测试时，对单向流洁 净室（区），测试宜在生产操作人员撤离现场并经过 10min后开始；对非单向流洁净室 （区），测试宜在生产操作人员撤离现场并经过 20min自净后开始。* * 2.4采样点数目及其布置 2.4.1在空态或静态测试时，悬浮粒子采样点数目及其布置应力求均匀，并不得少 于最少采样点数目。在动态测试时，悬浮粒子采样点数目及其布置应根据产品的生产及 工艺关

4、键操作区设置。最少采样点数目如下 最少采样点数目 面积（m2） 洁净级别 A级 C级 D级 v 10 2-3 2 2 10 v 20 4 2 2 20 v 40 8 2 2 40 v 100 16 4 2 采样点的布置: -1 1 - H - 1- 1 I 11 4 4 * r X X XX X2.4.2采样点位置：一般在离地0.8m高度的水平面上均匀布置，并避开回风口。测 试人员应在采样口的下风侧。 2.4.3采样次数的限定：对于任何小洁净室或局部空气净化区域， 采样点的数目不得 少于2个，总采样次数不得少于5次。 最小米样量 洁净度级别 米样量L/次 0.5 (jm 5 A级 5.66 8

5、.5 C级 2.83 8.5 D级 2.83 8.5 2.5判断标准: * * 洁净度级别 悬浮粒子最大允许数 （个/m 3） （静态） M）.5 阿 5 m A级 3520 20 C级 352000 2900 D级 3520000 29000 2.6监测频率： 2.6.1每季度对微生物洁净实验室进行监测，并及时填写监测记录（附件 2 ）。 262 D级取样间每季度监测所有房间，并及时填写监测记录（附件 1） 263每季度对D级洁净区所有房间进行监测，并及时填写监测记录（附件 1）。 3、沉降菌的监测 3.1概述：本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子 于培养基平皿，经

6、若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板 培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净 度。本法采用动态监测，培养皿暴露时间为不大于 4小时。 3.2仪器和设备：高压消毒锅、恒温培养箱、培养皿（已灭菌，90mm X15mm ）、 大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）或沙氏琼脂培养基（SDA）。 3.3测试步骤： 3.3.1测试前培养皿表面必须严格消毒。将已于 30 35 C恒温培养箱中倒置培养48 小时且无菌落生长的培养皿按照采样点布置图逐个放置， 然后从里到外逐个打开培养皿 盖，使培养基表面暴露在空气中。全部采样结束，将培养皿倒置于恒温培养箱中培

7、养。 采用大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）配制的培养皿经采样后在3035 C下培养，时间不 少于2天。采用沙氏琼脂培养基（SDA）配制的培养皿经采样后在2025 C下培养，时 间不少于5天。每批培养基应有对照试验，检查培养基本身是否污染，可每批选定3只培 养皿作对照培养。 3.3.2菌落计数：用肉眼直接计数，然后用510倍放大镜检查有否遗漏。若培养皿 上有2个或2个以上菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。 3.3.3采样点数目及其布置：参照悬浮粒子的采样点数目。 3.3.4最少培养皿数：在满足最少采样点数目的同时，还应满足最少培养皿数 最少培养皿数 洁净度级别 最少培养皿数（90mm

8、 ） A级 2 C级 2 D级 2 * * 3.3.5采样次数：每个采样点采样一次 3.3.6评定标准： 洁净度级别 浮游菌 cfu/m 3 沉降菌（ 90mm ） cfu/4 小 时 接触蝶 cfu/ 蝶 手套 cfu/ 手 套 A级 小于1 小于1 小于1 小于1 C级 100 50 25 D级 200 100 50 3.3.7监测频率： 3.3.7.1微生物洁净实验室净化台样品每次实验时监测，其他房间每周一次并及时 填写监测记录（附件4 ）。 337.2 D级取样间每季度监测所有房间，并及时填写监测记录（附件 3）。 3.3.7.3 D级洁净区每季度监测所有房间，并及时填写监测记录（附件

9、 3）。 3.3.7.4阳性对照间生物安全柜每次实验时监测，其他房间每季度测一次并及时填 写监测记录（附件4） 3.3.7.5微生物洁净实验室表面微生物（手套及操作服）每周测一次，并及时填写 监测记录（附件4 ）。 4、浮游菌的监测 4.1概述 本方法采用计数浓度法，即通过收集悬游在空气中的生物性粒子于专门 的培养基，经若干时间，在适宜的生长条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，从而判 定洁净环境内单位体积空气中的活微生物数，以此来评定洁净室 （区）的洁净度。本法采 用动态监测。 4.2仪器、设备和培养基：FKC-1型浮游菌采样器，严格按照浮游菌采样器操作及 维护保养规程（SOP-ZL96-1

10、）操作。 培养皿（已灭菌， 90mm X15mm ）、大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）或沙氏琼 脂培养基 （SDA）、恒温培养箱。 4.3测试步骤 431测试前仪器、培养皿表面必须严格消毒。采样器进入被测房间前先的消毒剂 灭菌，用于100级洁净室的采样器宜一直放在被测房间内。 先用消毒剂消毒采样器的顶 盖、转盘以及罩子的内外面，采样结束，再用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘。采样 口及采样管，使用前必须高温灭菌。如用消毒剂对采样管的外壁及内壁进行消毒时，应 将管中的残留液倒掉并晾干。采样者应穿戴与被测洁净区域相应的工作服，在转盘上放 入或调换培养皿前，双手用消毒剂消毒。 4.3.2仪器经消毒后先不

11、放入培养皿， 开动真空泵抽气， 使仪器中的残余消毒剂蒸 发， 时间不少于5min，并调好流量、转盘转速。关闭真空泵，放入培养皿，盖上盖子 后调节采样器缝隙高度。置采样口于采样点后，依次开启 采样器、真空泵，转动定时 * * 器，根据采样量设定采样时间。 433培养 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。在30 C35 C 培养箱中培养，时间不少于48h。每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。 可每批选定3只培养皿作对照培养。 4.3.4菌落计数 用肉眼直接计数、标记或在菌落计数器上点计，然后用 510 倍放大镜检查，有否遗漏。若平板上有 2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍

12、以 2 个或2个以上的菌落计数。 4.4采样点数量及其布置 浮游菌测试的最少采样点数目及其布置参照悬浮粒子的 采样点数目。 4.5监测频率： 4.5.1微生物洁净实验室每季度监测一次，并及时填写监测记录（附件 6 ）。 4.5.2 D级取样间每季度监测所有房间，并及时填写监测记录（附件 5）。 4.5.3 D级洁净区每季度监测所有房间，并及时填写监测记录（附件 5）。 5、 注意事项 5.1使用前仔细检查每个培养皿的质量，培养基及培养皿有变质、破损或污染的不 能使用。 5.2采取一切措施防止采样管的污染和其他人为对样本的污染。 5.3对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。 5.4由于细菌种

13、类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细 观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落或培养基沉淀物的区别，必 要时用显微镜鉴别。 6、 年度回顾审核与数据趋势分析 6.1品管部每年对通过质量回顾对监测数据收集并经评价，用统计分析图将趋势直 观地反映出来，在图中标出警戒限度及纠偏限度。 6.2根据趋势分析结果可对环境控制区的微生物学质量做出评估，并对警戒和纠偏 限度做出相应调整，并通知相关部门 7、 警戒限度与纠偏限度的确定原则 7.1警戒限度：用以指示环境中的微生物水平是否有偏离正常水平的可能性如超 过，至少应予以调查。 7.2纠偏限度：一旦超出，表示环境中微生物污

14、染水平已严重偏离正常水平，对产 品质量造成高度的污染风险必须立即采取纠偏措施。 7.3制定依据:警戒限、纠偏限以正常监测数据为基础，并赋与一定的安全系数。即: 警戒限度二平均值+ 2 c, 纠偏限度二平均值+ 3(7 8、 附件1洁净区悬浮粒子监测记录(R-SOP-ZL66-1-01 ) 附件2微生物洁净实验室悬浮粒子监测记录(R-SOP-ZL66-1-02 ) 附件3洁净区沉降菌监测记录(R-SOP-ZL66-1-03 ) 附件4微生物洁净实验室沉降菌监测记录(R-SOP-ZL66-1-04 ) 附件5洁净区浮游菌监测记录(R-SOP-ZL66-1-05 ) * * 附件6微生物洁净实验室浮

15、游菌监测记录(R-SOP-ZL66-1-06 ) 附件7监测点分布图 9、修订历史 文件修订、变更历史 原文件编号 现文件编号 生效日期 修订变更原因 * * 附件1 洁净区悬浮粒子监测记录 编号：R-SOP-ZL66-1-01 监测状态 静态 监测日期 年 月 日 监测标准 D 级：0.5 阿 3520000/m 3; 药 m 29000 /m 3 报告日期 年 月 日 监测依据 GB/T16292-2010医药洁净室（区）悬浮粒子的测试方法 监测数据 房间名称 平均值 房间名称 平均值 0.5 m 5 pm 0.5 pm 5 pm 男二更 中控室 女二更 粉筛室 缓冲间 产气剂前室2 洗衣

16、整衣间 配浆室 称量室 制粒烘干室 备料室 *男二更 洁具间 *女二更 物料气闸室 *缓冲间 内包材室 *洁净走廊 洁净走廊 *中控室 暂存室 *模具室 颗粒填充室 *暂存室 产气剂前室1 *物料缓冲间 * * 模具室 *器具存放室 预留间 *器具清洗室 配料室 *洁具间 器具存放室 *喷干室 器具清洗室 *内包装室 机械间 取样缓冲间 取样间 备注：带“*”为一楼洁净区 监测人： 复核人:* * 附件2 微生物洁净实验室悬浮粒子监测记录 编号：R-SOP-ZL66-1-02 监测标准 A 级：0.5 pm 3520/m 3; 5 阿 20/ m 3 监测状态 静态 C 级：0.5 pm 35

17、2000/m 3 ; 5 pm 2900/ m 3 监测依据 GB/T16292-2010医药洁净室（区）悬浮粒子的测试方法 监测数据 年 区域名称 平均值 年 区域名称 平均值 月 日 0.5 pm 5 pm 月 日 0.5 pm 5 pm * * 监测人： 复核人:* * 附件3 洁净区沉降菌监测记录 编号：R-SOP-ZL66-1-03 监测状态 动态 监测日期 年 月 日 监测标准 D 级：v 100cfu/4 小时，90mm 平皿 报告日期 年 月 日 监测依据 GB/T16294-2010医药洁净室（区）沉降菌的测试方法 监测数据 区域名称 菌落数 平均菌 落数 区域名称 菌落数

18、平均菌 落数 1#采样 占 八、 （累计） 2#采样 占 八、 （累计） 1#采样 占 八、 （累计） 2#采样 占 八、 （累计） 男二更 中控室 女二更 粉筛室 缓冲间 产气剂前室 2 洗衣整衣间 配浆室 称量室 制粒烘干室 备料室 *男二更 洁具间 *女二更 物料气闸室 *缓冲间 内包材室 *洁净走廊 洁净走廊 *中控室 暂存室 *模具室 颗粒填充室 *暂存室 产气剂前室 1 *物料缓冲间 模具室 *器具存放室 * * 预留间 *器具清洗室 * * 监测人： 复核人: 配料室 *洁具间 器具存放室 *喷干室 器具清洗室 *内包装室 机械间 取样缓冲间 取样间 备注：带“*”为一楼洁净区*

19、 * 沉降菌、温湿度、压差监测记录 微生物实验室口 阳性菌对照室口 编号：R-SOP-ZL66-1-04 年 二更 cfu/ 皿 操作间 cfu/ 皿 操作台 cfu/ 皿 相对 湿度% 温度C 压差 Pa 备注 月 日 1 2 1 2 1 2 附件4 * * 监测人:复核人: * * 附件5 洁净区浮游菌监测记录 编号：R-SOP-ZL66-1-05 监测标准 D 级：w200cfu/m 3 监测日期 年 月 日 监测状态 动态 报告日期 年 月 日 采样点 2个（面积w 100m 2） 采样里 200L/ 次 监测依据 GB/T16293-2010医药洁净室（区）浮游菌的测试方法 监测数据 区域名称 菌落数 cfu 菌落数 cfu/m 3 区域名称 菌落数 cfu 菌落数