多肽、蛋白质药物ppt课件

1、一、多肽药物及其消费工艺一、多肽药物及其消费工艺多肽类药物多肽激素：垂体多肽激素、促皮质激素、促黑素、多肽激素：垂体多肽激素、促皮质激素、促黑素、脂肪水解素、催产素、加压素脂肪水解素、催产素、加压素甲状腺激素：甲状旁腺激素、降钙素甲状腺激素：甲状旁腺激素、降钙素胰岛激素：胰高血糖素、胰解痉多胰岛激素：胰高血糖素、胰解痉多胃肠道激素：胃泌素、肠血管活性素、抑胃肽胃肠道激素：胃泌素、肠血管活性素、抑胃肽胸腺激素：胸腺素、胸腺肽、胸腺血清因子胸腺激素：胸腺素、胸腺肽、胸腺血清因子含有多肽成分的其他生化药物含有多肽成分的其他生化药物骨宁、眼生素、血活素、氨肽素、蜂毒、蛇毒、骨宁、眼生素、血活素、氨肽素

2、、蜂毒、蛇毒、胚胎素、花粉提取物、心脏激素等胚胎素、花粉提取物、心脏激素等、多肽类药物、多肽类药物胸腺素的制备胸腺素的制备用途：原发性和继发性免疫缺陷病，如反复上呼吸道感用途：原发性和继发性免疫缺陷病，如反复上呼吸道感染染;本身免疫性疾病，如肾病、红斑狼疮、类风湿关节本身免疫性疾病，如肾病、红斑狼疮、类风湿关节炎、重症肌无力炎、重症肌无力;变态反响性疾病，如支气管哮喘；细变态反响性疾病，如支气管哮喘；细胞免疫功能减退的中老年人和老年人疾病，并可抗衰老；胞免疫功能减退的中老年人和老年人疾病，并可抗衰老；肿瘤的辅助治疗。肿瘤的辅助治疗。黄海葵强心肽黄海葵强心肽AAPA的制的制备备海洋生物中有许多含

3、有多肽或蛋白质毒海洋生物中有许多含有多肽或蛋白质毒素往往具有特殊的药物功能。如海葵毒素往往具有特殊的药物功能。如海葵毒素等的强心功能，棘皮、软体等动物的素等的强心功能，棘皮、软体等动物的抗癌肽的抗癌功能等。抗癌肽的抗癌功能等。 黄海葵强心肽就是其中一种。人们已黄海葵强心肽就是其中一种。人们已从黄海葵中分别出具有强心作用的黄海从黄海葵中分别出具有强心作用的黄海葵强心肽葵强心肽A、B、C。 APA由由49个氨基个氨基酸组成，酸组成，Mr为为5500，属碱性多肽。，属碱性多肽。、黄海葵毒素的制备二、蛋白药物及其消费工艺二、蛋白药物及其消费工艺蛋白质药物蛋白质药物蛋白质激素：垂体蛋白质激素生长素、催乳

4、激素、促甲状腺激素、蛋白质激素：垂体蛋白质激素生长素、催乳激素、促甲状腺激素、促卵泡激素、促性腺激素人绒毛膜促性腺激素、血清性促性腺促卵泡激素、促性腺激素人绒毛膜促性腺激素、血清性促性腺激素、胰岛素及其他蛋白质激素胰岛素、胰抗脂肝素、松弛素激素、胰岛素及其他蛋白质激素胰岛素、胰抗脂肝素、松弛素血浆蛋白质：白蛋白、纤维蛋白溶酶原、血浆纤维结合蛋白、多种血浆蛋白质：白蛋白、纤维蛋白溶酶原、血浆纤维结合蛋白、多种免疫球蛋白、纤维蛋白原、抗凝血酶免疫球蛋白、纤维蛋白原、抗凝血酶III、凝血因子、凝血因子VIII和和IV。蛋白质类细胞生长调理因子：干扰素蛋白质类细胞生长调理因子：干扰素(IFN)、白细胞

5、介素、白细胞介素(IL)、神经、神经生长因子、肝细胞生长因子、血小板生长的生长因子、肿瘤坏死因生长因子、肝细胞生长因子、血小板生长的生长因子、肿瘤坏死因子、集落刺激因子、组织纤溶酶原激活因子子、集落刺激因子、组织纤溶酶原激活因子tPA、促红细胞生、促红细胞生成素成素(EPO)等等胶原蛋白：明胶、阿胶胶原蛋白：明胶、阿胶蛋白酶抑制剂：蛋白酶抑制剂：蛋白质药物白介素蛋白质药物白介素2的动物细胞制备的动物细胞制备作用：白细胞介素作用：白细胞介素2IL2能诱导能诱导T细胞分泌细胞分泌干扰素，加强杀伤细胞的活干扰素，加强杀伤细胞的活性，在调整免疫功能上具有重要作用。临性，在调整免疫功能上具有重要作用。临

6、床用于治疗一些免疫性疾病，如艾滋病、床用于治疗一些免疫性疾病，如艾滋病、原发性免疫缺损、老年性免疫功能不全以原发性免疫缺损、老年性免疫功能不全以及癌症的综合治疗。对创伤修复也有一定及癌症的综合治疗。对创伤修复也有一定的作用。的作用。工艺道路工艺过程工艺过程诱生用鸡瘟病毒刺激人外周血白细胞，诱生用鸡瘟病毒刺激人外周血白细胞，37培育。培育。病毒灭活和固液分别病毒灭活和固液分别 用用 6mol/L HCI调理调理 pH2.02.5，再用再用 6molL NaOH调理调理pH7.27.4，离心除去变性杂，离心除去变性杂蛋白。蛋白。硫酸按分级沉淀取上述离心后的培育上清液，加饱硫酸按分级沉淀取上述离心后

7、的培育上清液，加饱和硫酸按至和硫酸按至35饱和度，饱和度，24h离心弃去沉淀。上清液补离心弃去沉淀。上清液补加固体硫酸按至加固体硫酸按至 85饱和度，饱和度， 4静置静置 24h离心，搜集离心，搜集沉淀。沉淀。除盐将沉淀溶于除盐将沉淀溶于pH6.5、10mmolL PBS中内含中内含 2正丁醇和正丁醇和 0.15NaCI。透析。透析 24h改换改换 5次透析外次透析外液。液。蓝色琼脂糖层析将上述透析内液经过蓝色琼脂糖层析将上述透析内液经过 Sepharose 4B层析柱，用层析柱，用 200mlPBS去不吸附的蛋白，再用含去不吸附的蛋白，再用含 0.4mol/L NaCI的的 PBS洗涤亲和柱

8、，最后用含洗涤亲和柱，最后用含 1.0molLPBS解吸解吸IL2活性组分。活性组分。凝胶层析将解吸的凝胶层析将解吸的 IL2活性组分经活性组分经 PEGMW6000浓缩，再上浓缩，再上 ACA44UItrogel层析柱。柱层析柱。柱用含用含 0.1PEG、 2正丁醇和正丁醇和 pH7.6的的 0.2molL甘甘氨酸的氨酸的Tris.HCI洗脱，得洗脱，得 IL2。 转基因白细胞介素制备重组酵母基因表达重组酵母基因表达转化小鼠细胞挑选单克隆抗体表达转化小鼠细胞挑选单克隆抗体表达重组大肠杆菌表达重组大肠杆菌表达细胞分别细胞破碎细胞分别细胞破碎 包含体包含体 溶解溶解- -分别分别- -脱盐脱盐- -浓缩浓缩白细胞介素大肠杆菌表达的纯化方法白细胞介素大肠杆菌表达的纯化方法基因重组大肠杆菌于基因重组大肠杆菌于LB培育基培育基(含氨苄青霉素含氨苄青霉素)37oC震荡培育过夜震荡培育过夜 次日按次日按1:100比例稀释继续扩增至比例稀释继续扩增至OD600=0.4左右左右加诱导剂加诱导剂IPTG,(异丙基异丙基b-d-硫代半乳糖苷硫代半乳糖苷)至终浓度至终浓度2mmol/L,在在30oC下诱导下诱导6小时小时,搜集表达搜集表达IL-18菌体菌体.搜集菌体加细胞裂解液搜集菌体加细胞裂解液,用超声波破碎菌体