实验2蛋白质的性质实验.

1、蛋白质等电点的测定蛋白质的沉淀及变性实验目的Z了解蛋白质的两性解离性质学习测定蛋白质等电点的一种方法预期得到的结果及达到的训练效果学会观察化学反应现象并解释现象学会正确使用移液管学习使用涡旋混合器进一步学习实验报告书写的规范和原则：忠于实验本身而不 是忠于课本；正确、精确使用科学的描述语言；加强深入、 透彻地分析讨论结果COOHcooH2NtttH1+H3N4H11R1R不带电形式两性离子形式p K o|R+ IH3NCHCOOH在酸性溶液 中的氨基酸(pHpI)调节氨基酸溶液的pH,使氨基酸分子上的+NH3 基和_coo-基的解离程度完全相等时，即所带净电 荷为零，此时氨基酸所处溶液的pH值

2、称为该氨基酸 WmfW O当氨基酸相互连接成贵白质时，只冇其侧链基团和末端的a 氨基，竣基是可以离子化的。蛋口质是两性电解质。在蛋白质溶液中存在卜列平衡COOH蛋白质分子NH2COOCOO+OHNH2阴离子NH；兼性离子+OH/COOHP、NH；阳离子pHplpH=plpHpl电场中:移向阳极不移动移向阴极蛋口质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度的影 响。当溶液的pH达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的 数目相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极 移动，此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点PI。不同蛋 白质各冇其特界的等电点。在等电点时，至白质的理化性质 都询变化，可利川此种

3、性质的变化测定各种蛋口质的等电点。 最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。本实验借观 察在不同pH值溶液小的溶解度以测定酪蛋白的等电点。1. 加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识2. 了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义3. 了解蛋白质变性和沉淀的关系（二）实验原理：带正电荷的蛋白质在等电点的蛋白质带负电荷的蛋白质脱水作用1脱水作用脱水作用带正电荷的蛋白质 不稳定的蛋白质颗粒带负电荷的蛋白质溶液中蛋白质的聚沉（三）蛋白质的沉淀类型:仁町逆沉淀：此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化, 除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原 来的溶剂中，并保持其天然性质而不变性。2不口J逆沉淀：此时蛋

4、白质分子内部结构发生重大改变, 蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中。蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷），蛋白质并不析出。因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已 变性。几种沉淀蛋白质的方法1. 蛋白质的盐析2. 重金属离子沉淀蛋白质3. 有机酸沉淀蛋白质4. 有机溶剂沉淀货门质5. 变性蛋白质的溶解性试管号蒸锚水(mL)0.01 mol/L 蜡酸(mL)0. 1 mol/L 蜡酸(mL)1 0 mol/L蜡 酸(mL)14.20.324.350.1534.00.543.70.8乙醇引起的变性与沉淀试剂管号5%卵清蛋 白质 溶液01 mol/L氢氧 化钠溶液0mol/L盐 酸溶液95%乙醇PH4.7缓冲溶液10.50.50.520.50.50.530.50.50.5振摇混匀后，观察各管有何变化。放宣片刻向各管内加入水4亳升，然后在 第2, 3号管中各加一滴中基红,再分别用O.1mol/L醋酸溶液及0.05mol/L碳 酸钠溶液中和之。观察各管颜色的变化和沉淀的牛