一般食用菌母种(一级种)制作

1、一般食用菌母种(一级种)制作 母种制作的基本工艺流程为母种(由科研单位、大专院校、菌种保藏专门机构引进)一培养基制备一接种一培养检查一成品。 (一)常用培养基及配方 培养基是食用菌菌种生长所需营养的基质。培养基要具备四个条件，第一，要含有所培养的菌株生长所需要的各种营养物质，如糖类、有机氮、矿物质等。第二，所含养分浓度和状态要利于食用菌的吸收和利用。如食用菌母种培养基使用葡萄糖的浓度多在2左右，过高和过低都不利于菌丝的生长；食用菌对氮素的吸收优先吸收有机氮，因此，原种和栽培种的培养基中应添加有机氮源，如麦麸、米糠等。第三，要有适宜的酸碱度(pH)，食用菌多数喜偏酸性，pH5.06.5。第四，经

2、过严格灭菌，保持无菌状态。这最后一点是要通过灭菌才能达到的，然而，灭菌的高温能破坏培养基中的许多化学成分，并能降低pH。这一点必须在配制时就考虑到。这就要求从使用的营养型药品试剂上，要尽量选用热稳定性好的种类，配制时，灭菌前的pH要略高于使用时所需的适宜酸碱度。一般高压蒸汽灭菌01012兆帕30分钟，培养基的pH下降0103。高压灭菌切勿压力过高，时间过长，以利培养基保持良好的营养和适宜的pH。 目前食用菌母种生产上使用的都是固体培养基，以琼脂(洋菜)为凝固剂，琼脂的用量从1024克不等，这依琼脂的质量而定，使用时用量要参考产品使用说明书。此外，当制作相同培养基时，高温季节要较常量多用些，以利

3、凝固，低温季节可按常量使用；较酸的培养基也要较pH较高的培养基琼脂用量多些。 1通用培养基通用培养基有多种配方，几乎通用于各类食用菌，常用的配方如下： (1)PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基) 马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，琼脂10或20克，水1升。 (2)综合马铃薯培养基 马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁05克，琼脂10或20克，水1升。 (3)马铃薯麦麸综合培养基 马铃薯200克，麦麸100克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁05克，琼脂10或20克，水1升。 (4)马铃薯蛋白胨综合培养基 马铃薯200克，葡萄糖20克，蛋白胨23克，磷酸二氢钾2

4、克，硫酸镁05克，琼脂10或20克，水1升。 (5)马铃薯酵母粉综合培养基 马铃薯200克，葡萄糖20克，酵母粉46克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁05克，琼脂10或20克，水1升。 2双孢蘑菇培养基 (1)马铃薯麦芽汁培养基 马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁05克，麦芽汁100毫升，琼脂10或20克，水900毫升(与麦芽汁总计1升)。 (2)堆肥浸汁蔗糖培养基 堆肥(干)50克，蔗糖15克，琼脂10或20克，水1升。 (3)改良堆肥PDA培养基 马铃薯(去皮)200克，堆肥100150克，葡萄糖20克，硫酸钙1克，琼脂10或20克，水1升。 (4)堆肥浸汁玉米粉培养基堆

5、肥(干)150克，玉米粉30克，琼脂10或20克，水l升。 (5)玉米粉葡萄糖培养基 玉米粉2030克，葡萄糖20克，蛋白胨O5克，琼脂20克，水1升。 (6)马铃薯麦芽汁蛋白胨培养基 马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，麦芽汁粉12克，蛋白胨3克，琼脂10或20克，水1升。 3平菇培养基 (1)麦麸(米糠)综合培养基 麦麸(米糠)50克，葡萄糖510克，磷酸二氢钾1克，硫酸镁02克，琼脂10或20克，水l升。 (2)葡萄糖棉籽壳浸汁培养基 葡萄糖20克，棉籽壳100克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁05克，琼脂10或20克，水1升。 4香菇培养基 (1)麦麸蛋白胨培养基 麦麸100克，蛋白胨2克，

6、蔗糖或葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁05克，琼脂10或20克，水1升。 (2)菇木汁培养基菇木或人造菇木渣200克，麦麸或米糠100克，葡萄糖20克，硫酸铵l克，琼脂10或20克，水1升。 (3)酵母粉葡萄糖培养基 葡萄糖20克，酵母粉5克，琼脂10或20毫升，水1升。 (4)葡萄糖麦芽糖酵母粉培养基 葡萄糖10克，麦芽糖10克，酵母粉5克，琼脂10或20克，水1升。 5木耳培养基(1)黄豆粉培养基黄豆粉20克，葡萄糖20克，硫酸镁0.1克，过磷酸钙1.5克，琼脂10或20克，水1升。 (2)木屑浸出汁综合PDA培养基 马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，木屑501 o()克，磷酸二氢

7、钾2克，硫酸镁05克，琼脂10或20克，水l升。6草菇培养基(1)稻草汁培养基 碎稻草200克，葡萄糖20克，硫酸铵3克，琼脂20克，水1升。(2)稻草汁综合PDA培养基 碎稻草200克，马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，硫酸镁05克，磷酸二氢钾2克，琼脂20克，水1升。(3)综合PDYA培养基马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，酵母粉5克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁l克，琼脂10或20克，水1升。(二)培养基制作培养基制作的步骤为：材料选择准确称量萃取配制定量分装灭菌斜面摆放。1材料的选择组成食用菌母种培养基的材料中，有些材料浓度、成分都相对稳定，如葡萄糖、磷酸二氢钾等，有些天然营养材料就

8、没有那么稳定了，往往由于对这些材料的选择直接影响培养基使用效果，影响食用菌菌丝的生长。如马铃薯、麦麸挑选不好时，制成培养基后，食用菌菌丝就不能很好地生长。因此，要认真选择，根据我们的经验，选材时要注意：发芽的马铃薯不能用，因为芽眼处有较大量的龙葵碱，对菌丝生长有毒害作用；表皮颜色变绿的马铃薯不能用；麦麸、米糠、豆粉、玉米粉等农产品发霉、发过霉，生虫或生过虫的不能使用。总之，要使用新鲜洁净的材料。 2准确称量各种食用菌菌丝的生长都要求一定的养分浓度，因此，使用配方的各种养分的配比不可随意更改，称取时要准确。 3制备原则 (1)植物性材料先行煮沸萃取 凡植物性材料均先单独煮沸萃取(两种或两种以上时

9、可混合煮沸萃取)，煮沸萃取时间为30分钟，煮沸30分钟后，取其上清液或滤液。如麦麸、米糠、木屑、棉籽壳、稻草、堆肥、马铃薯等。 (2)生物制剂如酵母粉、蛋白胨，需事先用冷水溶化，然后加入。但不需煮沸。 (3)化学试剂最后加入凡属化学试剂类营养物质，如葡萄糖、麦芽糖、硫酸铵、磷酸二氢钾、硫酸镁等，均在配制的最后一步加入，并不断搅拌以使其快速溶解，不可与植物性材料一起煮沸。 (4)以1升为配制单位各培养基配方所列材料的用量均以最终配制成1升为单位，即每升培养基中的含量。因此，当某种培养基中加入较大量的某种汁液或某种浸提液时，要注意计算培养基的最终容量。当水煮萃取过程中使培养基水量不足时，可中途加水

10、或最后补足水至l升。 4制作方法 食用菌母种用培养基均含有天然植物材料的浸出液，如最常用的马铃薯、麦麸、米糠等的浸出液。这类材料均先用清水煮沸萃取，取其滤液，用滤液再煮琼脂。下面以通用培养基中的马铃薯酵母粉综合培养基为例讲述培养基的制作方法。 (1)准备材料选取没有发芽的马铃薯，洗净去皮，称取200克，并将其切成l厘米左右见方的小块。同时准确称量好其他成分：葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁05克，琼脂10或20克，酵母粉46克(溶于少量水中)。 (2)煮沸 将切好的马铃薯小块放入1200毫升左右(煮沸过程中会蒸发200300毫升水，故煮沸萃取之初要多加水200毫升左右)水中，用铝锅煮沸30

11、分钟。煮沸中不要搅动，以免打碎马铃薯而使培养基沉淀物过多。 (3)过滤煮沸30分钟后，用24层纱布过滤。 (4)用滤液融化琼脂琼脂使用前可剪成2厘米左右长的小段，这样融化会快些，如果琼脂不太干净，最好水洗23遍去除杂质。如果使用琼脂粉，最好事先溶于少量冷水中。煮琼脂时，要多搅拌，边煮边搅，直至完全融化。煮沸后要文火，以防溢出。 (5)加入全部组分后定容 琼脂完全融化后，将各组分完全加入，并定容至1升，用玻棒搅拌，使其均匀。 (6)调节pH加入全部组分定容后，用pH试纸测定培养基的pH，若不适，可用柠檬酸或食醋调低，用氢氧化钠、碳酸钠或石灰调高。在我国多数地区，使用自然水制备培养基时，自然pH多

12、在6.26.8，不需再格外调节。(7)分装调好pH后，即开始分装。食用菌母种常用的试管规格是1820厘米(长)×1820毫米(口径)。分装试管的装置可用带铁环架和漏斗的分装架(图310)，也可自行设计和制作分装装置。自行制作的分装装置是一只1升的大烧杯或量杯，杯中插入一支“V”形玻璃管，没有“V”形玻璃管时，可用与容器等高长度的直玻璃管，管的一头插至杯底，另一头接乳胶管，乳胶管处夹一止水阀，下端再接一10厘米左右长的玻璃管。 使用自制分装装置分装时，将培养基倒人大烧杯或大量杯后，先将吸耳球插入外端最末端的玻管内，将培养基从容器中吸人玻管，直至流人止水阀处。分装时注意玻管末端的水平一定

13、低于培养基的水平面，否则，培养基不能自动流出。 分装时，要注意流出的培养基不可沾在近试管口的壁上，以防日后生霉。一旦管口内沾有培养基，待凝固后用接种钩取出，并用潮湿洁净的纱布擦拭干净。 一般将培养基装至试管的15l4处，尔后加盖棉塞。棉塞要用干净的梳棉制作，不可用脱脂棉，因为脱脂棉在灭菌中极易吸水，日后易滋生霉菌。棉塞要上下粗细均匀，松紧适度，以塞好手提时不掉为宜。棉塞长度以塞入试管内1.52.0厘米长，外露1.5厘米左右为宜。然后7或10支捆成一捆，管口一端用牛皮纸包好扎紧。 (8)灭菌试管分装打捆后，直立放于灭菌锅中灭菌。灭菌是培养基制备的重要步骤。灭菌是否彻底，是培养基制备成功与否的关键

14、。初次使用高压灭菌锅时，要事先认真阅读使用说明，并严格按说明操作。 使用高压锅时，先加足水，然后将试管竖立于套桶中，加盖拧好，加热，压好放汽阀。当压力表指针升至005兆帕时，打开放汽阀，放汽35分钟，然后关闭。当压力达到0100.12兆帕时，开始计时，并保持这一压力30分钟。之后，关闭热源，使锅内压力自然下降。当锅内压力降至0后，打开放汽阀放汽。放净汽后，打开盖，即可将试管摆成斜面。 (9)摆放斜面 一般情况下，打开锅后，不宜立即摆放斜面，以免形成过多的冷凝水。高温季节开锅自然降温3040分钟较好，低温季节则20分钟左右为宜。 试管斜面的大小以上限距棉塞3厘米左右为宜。斜面摆成后。不宜再行摆动

15、。斜面固定后，抽取20支试管置于28培养箱内恒温培养2448小时，以检查灭菌效果。培养后若培养基上无微生物长出，表明灭菌成功，即可使用。当时不用的试管斜面可保存于清洁干燥处，以后可随时取用。 制备母种培养基过程中要注意以下几点： 各环节紧密衔接，特别是分装后，要立即灭菌，不可隔夜。 灭菌时放汽要充分，否则影响灭菌后果。低温季节分装时注意保温，防止培养基凝固。 (三)接种 1接种室和接种箱的消毒和使用规程 接种室和接种箱是接种操作的场所，必须保持高度无菌，这需要使用前的消毒处理和日常卫生的保持。常用的消毒方法有药物熏蒸、药液喷雾和紫外灯照射三种。三种并用时，效果最好。 (1)药物熏蒸消毒 接种室

16、和接种箱都可使用。当用药物熏蒸接种室时，必须使用前一天进行。熏蒸用药物和用量为甲醛78毫升+高锰酸钾5克米3。处理时，先关闭门窗，将称好的高锰酸钾放在大烧杯或盆内，然后屏住呼吸倒入甲醛，立即出室关门。高锰酸钾使甲醛迅速气化。甲醛对人的眼睛和呼吸道有强烈的刺激作用，因此，熏蒸12小时后必须用和甲醛量相等的氨水中和空气中的甲醛，以便接种操作。摆放氨水杯要在接种操作前35小时进行。也可使用气雾消毒剂进行空气消毒，使用方法参考产品使用说明书。 当接种室内使用接种箱进行接种操作时，接种室不需每次接种前都进行熏蒸消毒处理，这种熏蒸只作为定期处理即可，生产旺季一般每周处理一次，其他季节每月处理一次。 (2)

17、药液喷雾消毒接种操作开始前，用5石炭酸液或煤酚皂化液(来苏儿)喷雾。这些消毒液除具杀菌作用外，还可降沉空气中的尘埃和杂菌孢子，净化空气，减少接种操作中的污染。 (3)紫外灯照射消毒 接种操作前，打开紫外灯消毒30分钟，如果使用普通紫外灯，关闭后必须隔40分钟，待臭氧散尽后才可入室工作。如果使用无臭氧紫外灯，关闭后可立即入室操作。紫外灯管使用超过2 500小时后，作用强度明显下降，要适当延长使用时间。有条件的灯管要定期更换，一般每使用4 000小时后更换。 (4)使用规程 接种室地面不可用笤帚清扫，必须用墩布拖，以防扬尘。 消毒处理前需将要接种的物品及用具搬入。 接种操作完毕后要随手清洁。连续使

18、用时，则清洁后重新消毒处理。 接种室要定期消毒处理，以保证高度无菌状态。 操作人员必须在接种工作开始前先用肥皂洗净手和手腕，在缓冲间更衣，进入接种室后用75酒精棉球擦拭双手，特别是指尖，同时擦拭操作台面。 接种操作中途不可进出。2接种 按上述消毒方法和接种室使用规程处理好后，就可接种了。接种方法是：左手平托母种试管和另一支待接种的试管，菌种在外，待接种的在内，右手持接种钩，在火焰上灼烧蘸有酒精的接种钩。在酒精灯火焰上方拔下试管棉塞，夹于右手指间，接种钩冷却后进入母种试管切取绿豆粒大小一块母种，并迅速转接至待接种的试管斜面中央，在火焰上方同时塞好母种和新接种试管的棉塞。这时，一支试管母种接种完毕

19、。如此反复，一支试管母种一般可转接扩繁3040支。切取菌种时，注意母种斜面上方较干，要去掉干皮，母种块周围的菌丝也较老，最好不要使用。3接种操作注意事项 (1)酒精灯火焰要高酒精灯火焰不够高时，火焰周围的无菌范围小，不利于无菌操作，也易造成接种钩灼烧灭菌不彻底，影响接种后的成品率。影响火焰大小的因素一是酒精浓度，二是灯芯。酒精浓度越高燃烧越好，最好使用95的工业酒精。灯芯材料太实，塞得又紧时，内吸的酒精少，火力也不旺。所以，灯芯最好用棉花捻制，并拨出一定的长度。 (2)母种试管表面和管口要灭菌彻底，作为接种物的母种试管表面并未处于无菌环境下保存。因此，接种时要注意试管表面和管口的灭菌。具体方法

20、是：拔下棉塞后，在酒精灯火焰上转动23圈，这样可有效地减少菌种造成的污染。 (3)拔塞、取种、接种及塞棉塞必须在火焰上方或附近操作母种试管和待接种的试管一旦打开棉塞，就不能离开火焰，因为只有在火焰周围很小范围内才是绝对无菌的。 (4)接种钩要灼烧彻底 接种钩最好用较薄的材料制成，灼烧时烧至红色。并注意接种钩灼烧的长度，灼烧长度以试管长度为度，在火焰上方反复灼烧34次即可。 (5)接种时掉到地上的棉塞不能使用 接种时棉塞要夹于右手指间，不可放在操作台上。一旦掉到台面上，塞之前要在火焰上过一遍再用。掉到地上的棉塞严禁使用。 (6)接种钩火焰灭菌后要冷却 不经冷却的接种钩会烫死菌种。冷却一般在无菌的

21、待接种的试管上部空间进行，也可在斜面上端冷却。 (7)消毒酒精要清洁 注意定期更换。 (8)操作要到位动作轻盈、敏捷、快速、准确，尽可能地减小声音。 (9)接种操作后的工作及时清理，打开门窗，排除接种时酒精燃烧放出的废气。之后，关好门窗，打开紫外灯进行使用后的消毒，以便以后使用。 (四)培养与检查将接种后的试管置于恒温箱或培养室培养，培养室要尽量避光。培养期间，有条件的要求培养温度略低于菌丝生长最适温度，这样培养出的母种会更健壮，一般较菌丝生长最适温度低12。如木耳菌丝生长最适温度2628，而实际生产中常取25培养。培养期间还要求空气干燥，以大气相对湿度<75为最好。在高温高湿的夏季，要

22、特别注意防止高温削弱菌种的生活力和高湿造成污染。 培养期间要经常检查，及时拣出不良个体。培养期间主要检查两方面，一是有无污染，二是菌丝生长是否正常，包括形态、长速、活力、均匀度等。白灵菇的制种技术一、一级种的制备1.材料与方法(1)培养基配方:我们采用了两种培养基配方作对照。马铃薯、小麦、蔗糖、琼脂培养基:马铃薯200克,蔗糖20克,小麦20克,琼脂20克,水1000毫升。马铃薯、蔗糖、蛋白质、琼脂培养基:马铃薯200克,蔗糖20克,蛋白质2克,水1000毫升。(2)配置过程。培养基的制备。先将马铃薯洗净去皮,挖去芽眼,称取200克切成片,放入1000毫升水中煮,水沸后15分钟(以不煮烂为度)

23、熄火,用4层纱布过滤;将小麦煮至熟而不烂,加入马铃薯滤液中,同时加入琼脂20克、蔗糖20克,补加水至1000毫升,边加热边搅动,别让琼脂粘锅底烧焦,也别让滤液沸腾冒出。待琼脂完全融化后,快速分装至各试管。培养基的分装量以试管的1/4为好,注意管口不能粘有残存的培养基,以免粘在棉塞上引起杂菌的污染。塞试管的棉塞不能塞得过紧过松,过紧不透气,菌种长不好,过松易脱落,也易污染杂菌。将灌好培养基塞好棉塞的试管,一捆捆扎好,包好牛皮纸后,垂直放入高压锅中灭菌。灭菌与摆斜面。灭菌锅中的水要加足,试管培养基入灭菌锅后,上面再盖23层牛皮纸,以防冷凝水弄湿了棉塞。旋紧高压锅旋钮,加热。当压力升至0.5公斤/c

24、m2时,排净锅内全部空气,继续加热,当锅内的蒸汽压力达到1.0公斤/cm2之后开始计时,保压30分钟,灭菌结束。待指针降至零,开锅,取出试管,摆成斜面(摆斜面时,切忌将培养基粘上棉塞)。(3)接种与培养:由武都县提供九成熟白灵菇两月。在无菌接种箱内将菌盖边缘部分剪除,然后用70%挤的较干的酒精棉球作表面消毒,撕开种菇,用无菌的镊子夹取菌盖中心的菌肉23个(黄豆大小),在无菌操作下放入培养基内,塞上棉塞。接种完毕,将已接种的试管扎成捆,包好牛皮纸,写好菌种名称及接种年、月、日,然后放入25恒温箱培养。2.结果。从试管菌丝的生长速度、菌丝的密度来看,加入麦粒的培养基:明显优于不加麦粒的培养基;培养

25、基菌丝旺盛,生长速度快,且污染率低。黑木耳母种及栽培种的制作 1. 木钉原料制备选自当地速生杨树或其它阔叶软杂木树（包括10厘米以上树尖，枝桠），制成1.01.2厘米 （1 厘米×厘米×厘米或 2厘米×2厘米×2厘米）长的短木钉,数量自定,晒干备用。2. 菌种配方干木钉 66%，细木屑10%，麸 皮15%，玉米粉5%，白糖 1%，石膏粉2%，磷酸二氢钾 0.5% 锌镁肥0.5%， 含水量，50%55%（干料与水分比例约1：1），pH值自然。3. 菌种制作3.1 浸泡木钉 根据日生产需用量，按配方比例分别称取标准数量木钉，木屑，麸皮及各种原材料，然后将磷酸

26、二氢钾、锌镁肥，白糖一起倒入大缸或水泥池中，加入净水约需总量的70%，反复搅动，待溶解均匀后倒入干木钉，数量以淹没表层木钉为宜，浸泡期间翻动 12 次，时间46小时，时间长短以达到木钉完全渗透为准。3.2 拌料 木钉浸泡完毕沥去多余水分，再将过筛的细杂木屑，麸皮，玉米粉，石膏粉均匀混合，倒入木钉中，反复翻抄，达到均匀。最后将浸泡木钉剩余水和留用的30%净水调整含水量，使水分含量达到55%pH值自然。3.3 装袋 菌袋应选用丙烯或乙烯折角袋，双套环，规格 14厘米×27厘米×0.05厘米。装袋时力求规范操作，轻运，轻放，防止菌袋破损。3.4 灭菌 原料分装完毕及时灭菌，不宜过

27、夜。灭菌方式采用常压灭菌法，温度控制以灶内菌袋温度全部达到 100后，再持续灭菌1624小时，确保灭菌完全彻底。3.5 接种 待菌袋冷却后即可接种， 接种时不论采取何种接种方式， 首先应严格检查母种（二级种）质量，对菌丝老化，含有杂菌的母种予以清除。 二是严格检查接种环境，包括用具，接种箱或接种室及密封程度是否完全达到无菌标准和要求。 三是接种人员必须穿工作服，戴帽子，戴口罩，操作熟练。3.6 培养 接种完毕即可进入发菌室培养，温度应控制在2528，培养时间约60天。发菌期应及时检查杂菌感染和菌丝生长情况，对菌袋破损，接种操作不严密造成杂菌感染的菌种要及时清除。香菇菌种生产的方法与步骤 (一)

28、母种生产培养基的配方选择一是马铃薯、葡萄糖、琼脂培养基(PDA)：去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂1623克，水1 000毫升。氢离子浓度1 00010000纳摩升(pH56)，用于分离、培养菌种。 二是PDA改良培养基(甲)：马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾(KH2PO4)2克，硫酸镁(MgSO4)05克，维生素B110毫克，琼脂20克，水1000毫升，灭菌后氢离子浓度316310000纳摩升(pH5055)，用于培养、分离菌种。 三是PDA改良培养基(乙)：马铃薯(去皮)200克，麸皮或米糠50克，硫酸镁0.5克，维生素B110毫克，琼脂20克，灭菌后氢离子浓度316

29、33981纳摩升(pH5455)。 四是PDA改良培养基(丙)：心材木200克，细米糠(或麸皮)100克，硫酸铵1克，麦芽糖(或葡萄糖)20克，琼脂20克，水1 000毫升，灭菌后氢离子浓度316310000纳摩升(pH5.05.5)，用于分离菌种。 五是麦芽浸膏、酵母浸膏、琼脂培养基(MYD)：麦芽浸膏3克，葡萄糖10克，酵母浸膏3克，琼脂20克，蛋白胨5克，水1 000毫升(用于菌种培养)。 六是麦芽浸膏、蛋白胨培养基(MPA)：麦芽浸膏2025克，蛋白胨10克，琼脂20克，水1 000毫升(用于分离、培养、保存菌种)。 上述6个培养基配方中，马铃薯、葡萄糖、琼脂(PDA)配方应用最普遍。

30、在此着重介绍PDA培养基的配制方法与步骤： 1制备培养基的操作程序 选择优质马铃薯，去皮或挖去发芽眼，削去发青皮，切成薄片，称取200克，置于钢精锅，加水1 000毫升，煮沸后小火保持30分钟，趁热用8层纱布过滤后放人有1 000毫升刻度的量杯(或量筒)中，补充水到1 000毫升，倒回钢精锅，加琼脂继续加热，待琼脂溶化后，再加葡萄糖，再补水至1000毫升，用玻璃棒搅均匀，趁热分装试管，或装入三角瓶备用。 2分装试管 将配制好的PDA培养基，趁热(60)倒人事先准备好的量杯或玻璃漏斗，分装试管。每支试管装培养基为管长的14，培养液不可贴附管口内壁，如有沾附物必须揩拭干净。 3做棉塞 取适量棉花做成较紧实的棉塞，塞入试管约2厘米左右，外留1厘米，紧贴试管内壁，松紧度以用手指提起棉塞而不脱掉为宜，光圆不起皱(如图31)，尔后将试管放入铁丝筐内。 4灭 菌 将装有培养基的试管放人灭菌锅的铁丝筐内，上面盖上牛皮纸或聚丙烯塑料薄膜，包扎好，以防棉塞受潮。加热灭菌时，排尽锅内的冷气