HE染色程序及相关溶液配制

1、精品HE 染色程序1取材与固定：一般取0.5 立方米，基本不用再次修形。置于4% 甲醛溶液中，至少固定24 小时。室温保存即可。2水洗：视组织块大小而定。一般与固定时间相等或至少水洗24 小时。3脱水： 70 酒精（过夜或2h ） 80 酒精（过夜或1h ）90 酒精（ 1h ）95 酒精（ 1h ） 95 酒精（ 1h ） 100 酒精 (1h) 100 酒精 (1h) ，梯度酒精脱水注：当酒精浓度逐渐升高时，特别是100% 的酒精，注意观察组织块情况，不能脱水脱过了，如果拖过了，切片时，组织易碎。如果水脱的不彻底，则浸蜡时，蜡不能完全浸入，也会影响后期切片。4、透明：二甲苯（ 10min

2、）二甲苯 (10min)。5、浸蜡： 58 1.5-2h（一般用新蜡）6 、包埋：叠好的蜡槽，一般深1cm ，宽 1cm ，长 7cm ，放 4个组织块为宜。注：包埋一般采用旧蜡，避免产生气泡。包埋时用来夹取组织块的镊子，要同时放在蜡箱里预热。先向蜡槽内倒蜡，然后用预热的镊子夹取浸蜡缸中的组织，放到蜡槽底部，尽量避免漂浮。包埋后，就不要挪动蜡槽了，否则组织漂浮在蜡槽的表面。7、常规切片，一般组织3-5 微米，神经组织切7 微米。展片温度为 52 摄氏度。捞片时刻直接从95% 的酒精中取载玻片直接捞片，不必擦干载玻片上的酒精。 捞好片后，置于 37 度温箱恒温干燥过夜。感谢下载载精品8、 切片脱

3、蜡：二甲苯（ 5min ）二甲苯 (8min) ，9、 水化： 100 酒精（ 1min ） 90酒精 (1min) 80 酒精(1min) 70 酒精 (1min)10、 水洗 2-5min11、 苏木素染色 15-20min12、 水洗至灰黄色13、 分化： 1% 盐酸酒精分化 30s 至桃粉色，14、 水洗返蓝： 2-3h15、伊红染色： 15min16 、脱水：70 酒精（10s ）80 酒精（20s ）90 酒精（ 30s ） 95 酒精（ 1min ） 100 酒精 (2min) 100 酒精 (2min) 17 、二甲苯透明：二甲苯（ 5min ）二甲苯 (5min) 18 、中

4、型树胶封片，镜检。相关液体的配制：1、4% 甲醛固定液： 40% 的甲醛溶液 10ml + 90ml蒸馏水，摇匀即可。2、处理载玻片用的盐酸酒精： 95% 酒精 100ml + 36-38%盐酸 1 ml摇匀即可。3、分化用1%盐酸酒精：注：1%盐酸酒精配制：75% 酒精99ml+36-38%HCL1ml即可。4、二甲苯：无需配制，用商品化得即可。感谢下载载精品5、各个浓度的酒精，均用100% 的酒精或 95% 酒精按比例稀释配制即可。6、苏木素的配制：A 液：铵明矾（硫酸铝按）55 克加蒸馏水至 600mlB 液：苏木素6 克加 100% 酒精 50ml 混匀C 液：甘油150ml 加甲醇

5、150ml分别配制 A、B、C 液，将 A 与 B 混合过夜，用滤纸过滤后，加入C液，在温暖有阳光处照射1-2 个月，使染料成熟，方可使用。7、1% 伊红的配制（水溶性的）：1 克伊红（曙红 B）加 100ml 蒸馏水即可，需放置于阳光下成熟一段时间。 一般 500ml 染液中加入 5-6 滴醋酸，可以增强其着色力。HE 染色原理 ;苏木精染液为碱性 ，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色 ；伊红为酸性染料 ，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。所有化学试剂买“分析纯”级别的。甲醛：买回来的都是40% 浓度的，回来自己配成4% 的。二甲苯：买回来的直接用就行，无需配制。无水乙醇：95% 乙醇： 此两种浓度的酒精，用来配制90% ，80% ，70% 浓度的酒精。感谢下载载精品苏木素：还有叫苏木精的。如果买粉末的话，就按上边给的配方配制，这样就需要 铵明矾（硫酸铝按 ）常规药品，都好买。也有商品化的，买现成的染液，直接就是液体的。伊红，又有叫曙红B，（千万别买错了，还有叫曙红Y 的，这个不能用于 HE 染色）。粉末状的，按上面的配方自己配。也有现成的商品化的染液，就是价格略贵一些。蜡：有国产的，国产的比较便宜。 有进口的。进口的比较贵， 60-100元/kg 价格不等。我们实验室以前买过